沙門菌的檢驗技術(shù)課件

沙門氏菌（Salmonella）的檢驗DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美國獸醫(yī)微生物和病理學家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學博士。1884年任美國農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀念他而以他的名字命名的。沙門菌（Salmonella）是一大群寄生于動物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌一、沙門氏菌生物學特性G-桿菌0.6-1.0um×2-4um周身鞭毛，有菌毛。形態(tài)大小2、病原學生化反應(yīng)不分解乳糖（亞利桑那菌除外），分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長。3、流行病學易感動物：各種年齡的動物均感染，幼畜最易感傳播途徑：主要消化道、呼吸道、傷口等子宮內(nèi)感染（垂直傳播）內(nèi)源性感染（帶菌現(xiàn)象普遍)沙門氏菌屬——致病性潛伏期一般6-72小時，主要癥狀為惡心、嘔吐、腹絞痛、腹瀉、發(fā)熱寒顫頭痛。病程一般1～2天或更長。感染劑量為15～20個菌，死亡率達1～4%。最易感群體是年幼兒童、虛弱者、年長老人、免疫缺陷者等。污染源主要是人和家畜的糞便可以存在于多類食品中雞白痢本標準代替GB/T4789.4-2008《食品衛(wèi)生微生物檢驗沙門氏菌檢驗》。本標準與GB/T4789.4-2008相比，主要變化如下：

——修改了標準的中英文名稱；

——修改了標準的范圍；

——修改了培養(yǎng)基和試劑；

——修改了設(shè)備和材料；——修改了附錄A。本標準的附錄A、附錄B為規(guī)范性附錄。本標準所代替的歷次版本發(fā)布情況為：——GB4789.4-84、GB4789.4-1994、GB/T4789.4-2003、GB/T4789.4-2008前言設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他還有：★冰箱：2℃～5℃。★恒溫培養(yǎng)箱★均質(zhì)器★振蕩器★電子天平：感量0.1g★無菌錐形瓶:容量500mL，250mL★無菌試管★無菌培養(yǎng)皿★無菌吸管★無菌毛細管★pH計或pH比色管或精密pH試紙★全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)培養(yǎng)基和試劑

緩沖蛋白胨水（BPW）四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液亞硫酸鉍（BS）瓊脂HE瓊脂木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基三糖鐵（TSI）瓊脂蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑氰化鉀（KCN）培養(yǎng)尿素瓊脂賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基糖發(fā)酵管鄰硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培養(yǎng)基半固體瓊脂丙二酸鈉培養(yǎng)基沙門氏菌O和H診斷血清。生化鑒定試劑盒操作步驟1、前增菌——第一步使食物樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。2、選擇性增菌——在含選擇性抑制劑的促生長培養(yǎng)基中間，樣品進一步增菌的一個步驟。此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增殖，同時阻止大多數(shù)其他細菌的增殖。3、選擇性平板分離——這一步采用固體選擇性培養(yǎng)基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。4、生物化學篩選——排除大多數(shù)非沙門氏菌。也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。5、血清學技術(shù)——提供了培養(yǎng)物菌種的鑒定。檢樣25g(ml)樣品+225mlBPW1ml+TTB10ml1ml+SC10ml36℃±1℃，8h-18hBSXLD(或HE、顯色培養(yǎng)基)挑取可疑菌落42℃±1℃，18h~24h

36℃±1℃，18h~24h36℃±1℃，40h~48h36℃±1℃，18h~24h沙門氏菌檢驗程序生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)+A1A2A3反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符

甘露醇+、山梨醇+

ONPG-

沙門氏菌，血清學試驗

非沙門氏菌

報告TSI，賴氨酸，NA，靛基質(zhì)，尿素（pH7.2），KCN綜合以上生化實驗和血清學鑒定的結(jié)果，報告25g（ml）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。結(jié)果與報告前增菌：使食品加工過程中受傷的沙門菌細胞恢復(fù)活力未經(jīng)加工過的食品，檢驗前不需要前增菌前增菌：25克（加工食品）+225毫升緩沖蛋白胨水

37度培養(yǎng)4小時（干蛋品18—24小時）。（一）前增菌（二）選擇性增菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。一種增菌劑不可能適合所有的沙門菌，所以，要同時使用兩種以上的培養(yǎng)基增菌同時使用TTB、SC2003版本國標還有MMAOAC：TT、SCFDA：RV、TTISO：RV、SC選擇性增菌的目的是最大可能的檢出沙門氏菌，原則上必須使用兩種選擇性分離增菌液，一種是抑制除沙門氏菌以外其腸道菌的生長，一種是在不影響其他腸道菌生長的情況下促進沙門氏菌的生長。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建（三）分離培養(yǎng)

分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落，各個平板上的菌落特征見表1。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建表1沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征

選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂（36℃±1℃40h～48h）菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂（36℃±1℃18h～24h）藍綠色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂（36℃±1℃18h～24h）菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。

沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基（36℃±1℃18h～24h）按照顯色培養(yǎng)基的說明進行判定。返回使用BS、XLD、HE、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基2003版本國標：BS、DHL（或HE、WS、SS）FDA：BS、XLD、HEAOAC：BS、XLD、HEISO：phenolredbrilliantgreen瓊脂、BS或HE

為了最大可能的檢出沙門氏菌，原則上必須使用兩種以上選擇性分離培養(yǎng)基。沙門氏菌分離培養(yǎng)基PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建l沙門氏菌菌落形態(tài)：黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建lHE瓊脂：在保證細 菌所需營養(yǎng)的基礎(chǔ) 上，加入了一些抑

制劑，如：膽鹽、 檸檬酸鹽、去氧膽 酸鈉等，可抑制某 些腸道致病菌和革 蘭氏陽性菌的生長， 但對革蘭氏染色陰 性的腸道致病菌則 無抑制作用。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建l沙門氏菌在HE瓊脂上的菌落形態(tài)：藍綠 色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑 色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全 黑色。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建lXLD瓊脂：培養(yǎng)基中含有去氧膽酸 鈉作指示劑，在該濃度下的去氧膽 酸鈉也同時作為大腸埃希氏菌的抑 制劑，而不影響沙門氏菌屬和志賀 氏菌屬的生長。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建lXLD瓊脂：粉紅色，帶或不帶黑色中心，有 些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn) 全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或 不帶黑色中心。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建lXLD培養(yǎng)基分離沙門氏菌和志賀氏菌的敏感 性超過了傳統(tǒng)培養(yǎng)基，如：EMB、SS。因這 些培養(yǎng)基尚有抑制志賀氏菌屬生長的潛在因 素，故本培養(yǎng) 基是分離鑒定 沙門氏菌及志 賀氏菌屬的可 靠培養(yǎng)基。在國外廣泛使用。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建

l沙門氏菌顯色培養(yǎng)基主要用于快速篩選、分 離沙門氏菌。其基本原理：利用沙門氏菌特 異性酶與顯色基團的特有反應(yīng)，使色原游離 出來，沙門氏菌在培養(yǎng)基上呈紫色或紫紅色。 而大腸埃希氏菌等其他腸桿菌呈藍綠色。沙門氏菌辛酸脂酶色原-特定結(jié)合物 無色色原＋特定結(jié)合物

游 離

顯色PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建SS瓊脂上面的志賀氏菌和沙門氏菌PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建SS瓊脂上面的沙門氏菌PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建DHL瓊脂上面的沙門氏菌PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建BS瓊脂上面的志賀氏菌和沙門氏菌PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建分離培養(yǎng)中的注意要點l非典型的沙門氏菌菌落形態(tài)：不存在典型 或可疑沙門氏菌菌落時，按如下步驟檢驗 非典型的沙門氏菌菌落。lHE和XLD瓊脂：非典型的沙門氏菌在HE

和XLD瓊脂上呈黃色菌落，帶或不帶黑色 中心。HE和XLD平板經(jīng)24±2h培養(yǎng)后，沒 有典型的沙門氏菌菌落，則挑取2個或更多 個非典型的沙門氏菌菌落。顯色瓊脂另外。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建lBS瓊脂：某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落， 其周圍培養(yǎng)基稍微或不呈暗色。如果BS平 板培養(yǎng)24±2h后，沒有出現(xiàn)典型菌落，則 不挑取任何菌落，讓平板繼續(xù)培養(yǎng)24±2h。 如果經(jīng)48±2h培養(yǎng)后，仍沒有典型或可疑 的菌落出現(xiàn)，則挑取2個或更多個非典型的 菌落。分離培養(yǎng)中的注意要點PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建（四）革蘭染色沙門氏菌：革蘭陰性桿菌

（五）五項生化試驗1、三糖鐵瓊脂試驗2、靛基質(zhì)試驗（吲哚試驗）3、尿素酶試驗4、氰化鉀試驗（KCN）5、賴氨酸脫羧酶試驗

自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長 至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培 養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見表2。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建

2003版本國標中生化鑒定是將可疑菌落同時接種于三糖鐵（TSI）瓊脂、蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基；2010版本修改為：接種TSI瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時增加一項營養(yǎng)瓊脂（NA），經(jīng)TSI瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的選擇后，可篩掉大部分非沙門氏菌株，大大減少了工作量，同時也滿足了下一步生化鑒定的需要。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建三糖鐵、賴氨酸反應(yīng)情況絕大多數(shù)沙門菌屬，極少數(shù)為愛德華菌屬甲型副傷寒（約10%的甲副H２S呈陽性）傷寒桿菌（H２S僅在穿刺線出現(xiàn)）沙門氏菌亞屬Ⅲ偉勞地檸檬酸桿菌/變形桿菌，極少數(shù)為甲型副傷寒桿菌檸檬酸桿菌屬＋＋＋＋＋＋＋－＋＋－－＋－＋＋＋＋－－－＋－＋⊕⊕

＋⊕⊕⊕A1A2A3A4B1B2判定動力賴氨酸乳糖H２S葡萄糖PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建賴氨酸脫羧酶試驗注：本試驗的陽性反應(yīng)為培養(yǎng)基不改變顏色，而培養(yǎng)基變黃色者為陰性反應(yīng)。本試驗一定要設(shè)空白對照。培養(yǎng)基需用液體石蠟封蓋，阻止空氣的氧化作用。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建

氰化鉀試驗l氰化鉀試驗培養(yǎng)基：蛋白胨、磷酸鹽緩沖液、 氯化鈉、氰化鉀。l原理：氰化鉀是劇毒藥物，可抑制某些細菌 的呼吸酶系統(tǒng)，使這些酶失去活性，細菌的 生長因此受到抑制。而某些細菌可對氰化鉀 產(chǎn)生抗性，能在氰化鉀培養(yǎng)中生長。本試驗 常用于沙門氏菌與檸檬酸桿菌的鑒定。l沙門氏菌生長情況：陰性（不生長）。l注：本試驗必需設(shè)置對照管（不加氰化鉀），若對照管細菌生長良好，試驗管細菌不生長，可判定為陰性。若對照管與試驗管均無細菌生長，則應(yīng)重復(fù)試驗。試驗失敗的主要原因是封口不嚴，氰化鉀逐漸分解，生成氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低細菌生長，呈假陽性反應(yīng)。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建靛基質(zhì)（吲哚）試驗陰性（液面黃）陽性（液面玫瑰紅）尿素酶試驗陰性（黃）陽性（紅）ONPG試驗陽性（黃）空白丙二酸鹽試驗陽性（蘭）陰性（不變）ONPG試驗陽性（黃）空白（六）三糖鐵瓊脂(TSI)介紹

三糖鐵瓊脂(TSI)成分：蛋白胨20.0g

牛肉膏3.0g

乳糖

10.0g

蔗糖

10.0g

葡萄糖

1.0g

硫酸亞鐵銨(含6個結(jié)晶水)0.5g

酚紅

0.025g或5g/L溶液5mL

氯化鈉5.0g

硫代硫酸鈉0.5g

瓊脂12.0g

蒸餾水1000.0mL

可疑菌落生化鑒定l三糖鐵的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亞鐵銨、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂。l在TSI瓊脂中有2個指示劑體系：l－酚紅：在堿性環(huán)境中呈 紅色；在酸性環(huán)境中呈黃 色。l－硫酸亞鐵銨：是硫化氫 的指示劑，可與硫化氫反 應(yīng)生成硫化鐵呈黑色。硫 代硫酸鈉可防止硫化氫氧 化形成S-S基而影響反應(yīng)。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建TSI生化原理

斜面部分暴露于空氣中，為有氧環(huán)境。而下部與空氣隔絕是相對厭氧的環(huán)境。因此TSI時，最重要的是斜面部分和管下部瓊脂的長度，兩者均為3cm，以保證兩部分相對應(yīng)的有氧或厭氧環(huán)境。測試時使用接種針先穿刺至底部，而后于斜面作劃線接種，經(jīng)培養(yǎng)18-24小時后，依情況判斷糖類發(fā)酵情形。觀察結(jié)果：有三種類型

A.非發(fā)酵型：無碳氫化合物發(fā)酵，所以無酸產(chǎn)生，斜面上瓊脂的肽降解產(chǎn)物是堿性物質(zhì)導(dǎo)致斜面變紅。這種類型的細菌稱為非發(fā)酵型。

B.非乳糖發(fā)酵型:如果接種的是發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖的細菌，培養(yǎng)基內(nèi)僅有0.1%葡萄糖可以產(chǎn)酸。開始階段，培養(yǎng)8-12h時，產(chǎn)生的酸足以引起斜面和底部顏色變成黃色。在接下來的時間里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的細菌在有氧條件下開始氧化降解氨基酸，產(chǎn)生的胺類很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整個斜面又轉(zhuǎn)換成堿性PH，顏色有變成紅色。深部（厭氧區(qū)域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培養(yǎng)基仍為黃色。

C.乳糖（蔗糖）發(fā)酵型

三糖鐵（TSI）試驗?zāi)c道桿菌科為革蘭氏陰性菌，可發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸。利用糖類發(fā)酵之不同與硫化氫產(chǎn)生與否，加以區(qū)分。三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基含有1﹪乳糖及蔗糖與0.1﹪葡萄糖作為發(fā)酵基質(zhì)，且以酚紅作為酸堿指示劑，如培養(yǎng)基由橘紅轉(zhuǎn)為黃色，表示有糖類發(fā)酵三糖鐵（TSI）瓊脂試驗本試驗可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。a.uninoculated

b.littlechange/alkaline/-/-

c.alkaline/acid/-/+

d.acid/acid/+/+

e.acid/acid/+/-

slantcolor/buttcolor/gasproduction/hydrogensulfideproduction制好的培養(yǎng)基對照管斜面紅色，底面黃色培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黑色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2（1）斜面堿性（紅色-）底部酸性（黃色+）產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣（產(chǎn)氣時會造成瓊脂裂開）：表示僅葡萄糖發(fā)酵。因微生物優(yōu)先分解葡萄糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基變黃，但因葡萄糖含量低，于斜面產(chǎn)生之微量酸立即氧化而呈堿性反應(yīng)，同時培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)也隨之利用而產(chǎn)堿，培養(yǎng)基底部則因氧張力較小，且微生物生長較慢，故仍維持酸性反應(yīng)。（2）斜面酸性（黃色+）底部酸性（黃色+）產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣：表示除了葡萄糖發(fā)酵外，乳糖與（或）蔗糖也發(fā)酵。由于乳糖與蔗糖濃度高，經(jīng)繼續(xù)發(fā)酵，可維持培養(yǎng)基斜面與底部保持酸性反應(yīng)。（3）斜面堿性（紅色-）底部堿性（紅色-）或無變化（橘紅色）：表示無糖類發(fā)酵。而蛋白質(zhì)則于有氧或厭氧條件下進行代謝產(chǎn)生氨，而使培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)，如有氧與厭氧均發(fā)生蛋白質(zhì)分解，則斜面與底部均呈堿性反應(yīng)。

為使結(jié)果準確，應(yīng)于接種培養(yǎng)18-24小時內(nèi)觀察結(jié)果，以確保糖類尚未用盡，且蛋白質(zhì)分解之堿性終產(chǎn)物尚未產(chǎn)生。培養(yǎng)基變黑（4）三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基中亦含有硫代硫酸鈉若微生物有硫化氫產(chǎn)生，會與亞鐵離子作用生成不溶性硫化亞鐵之沉淀，進而使培養(yǎng)基變黑。腸桿菌科各屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果

斜面底層產(chǎn)氣硫化氫可能的菌屬和種－＋＋/－＋沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌＋＋＋/－＋沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌－＋＋－沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬－＋－－傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬＋＋＋/－－大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌注：＋陽性；－陰性；＋/－多數(shù)陽性，少數(shù)陰性腸桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表

反應(yīng)序號硫化氫（H2S）靛基質(zhì)pH7.2尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果A1＋－－－＋沙門氏菌屬A2＋＋－－＋沙門氏菌屬（少見）緩慢愛德華氏菌A3＋－＋＋－弗勞地氏檸檬酸桿菌、奇異變形桿菌A4＋＋＋＋－普通變形桿菌B1－－－－－－－－＋－沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬B2－－＋＋－－－＋－大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬B3－－－－＋/－＋＋＋＋－克雷伯氏菌族各屬陰溝腸桿菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌B4－＋＋/－＋－摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬注1：三糖鐵瓊脂底層均產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣者可排除；斜面產(chǎn)酸與產(chǎn)氣與否均不限。注2：KCN和賴氨酸可選作其中一項，但不能判定結(jié)果時，仍需補做另一項。注3：＋表示陽性；－表示陰性；＋/－表示多數(shù)陽性，少數(shù)陰性。a）抗原的準備

一般采用1.2％～1.5％瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。

O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的（如2％～3％）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應(yīng)時，可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.55％～0.65％半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻管1次～2次,自遠端取菌培養(yǎng)后再檢查。

(七）血清學鑒定

返回b）多價菌體抗原（O）鑒定

在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體（O）抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑暗背景進行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng)。

c）多價鞭毛抗原（H）鑒定

同b）。

d）血清學分型（選做項目）

返回PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建沙門氏菌血清學試驗結(jié)果觀察PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建沙門氏菌O多價血清凝集試驗

左為陽性

右為陰性對照3/3血清學試驗結(jié)果（八）生化鑒定VITEKGNI+

應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進行