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關(guān)于血凝和血凝抑制第1頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六一、試驗(yàn)?zāi)康模毖囼?yàn):滴定病毒的血凝效價(jià)(病毒的凝集價(jià)),采用一定的病毒量,通常采用4個(gè)血凝單位。2血凝抑制試驗(yàn):應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)病毒液測(cè)定血清中的相應(yīng)抗體或應(yīng)用特異性抗體鑒定新分離的血凝性病毒.3檢測(cè)雞群有無(wú)病毒感染和監(jiān)測(cè)雞的免疫狀態(tài)。掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理和操作方法,能夠正確判定試驗(yàn)結(jié)果第2頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六二、血凝試驗(yàn)(hemagglutinationtest)原理病毒粒子上的血凝素蛋白與紅細(xì)胞特定表面受體相結(jié)合,引起特異性凝集?!F(xiàn)象:有些病毒可凝集某些動(dòng)物(如雞、鵝、豚鼠、綿羊)和人的紅細(xì)胞。第3頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六HA試驗(yàn)的原理示意圖第4頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六用途:1確定病毒的存在;
2測(cè)定病毒的血凝價(jià)血凝價(jià):能使一定量紅細(xì)胞發(fā)生50%凝集的病毒最高稀釋度第5頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第6頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第7頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第8頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六實(shí)驗(yàn)材料器材:96孔V型微量反應(yīng)板、微量移液器、槍頭試劑:1%雞紅細(xì)胞(采集健康雞血液,以阿氏液抗凝,用PBS洗滌3-5次,用PBS配成1%紅細(xì)胞懸液備用)。試驗(yàn)抗原、PBS緩沖液第9頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六血凝實(shí)驗(yàn)步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,在第1排
1-10孔內(nèi)加入25ulPBS緩沖液,第11孔不加。第12孔加25ulPBS緩沖液2.在第1孔內(nèi)加入血凝素25ul,混勻后吸出25ul加入第
2孔內(nèi),再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi),依次類推至第10孔時(shí)棄掉25ul。第12孔不加作陰性對(duì)照孔。3.在1-12孔均加入25ul的生理鹽水。4.在每孔內(nèi)加入25ul1%的雞紅細(xì)胞懸液,震蕩,室溫靜止感作15-30min,每5min觀察一次結(jié)果。5.計(jì)算血凝效價(jià),稀釋使成為四價(jià)備用.第10頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六結(jié)果判定1.在各組對(duì)照均正確的情況下,按下列標(biāo)準(zhǔn)判定
血凝反應(yīng)強(qiáng)度示意圖“4+”紅細(xì)胞呈片狀凝集,均勻布滿孔底,邊緣有時(shí)不整齊或皺縮?!?+”紅細(xì)胞呈片狀凝集,但面積略小于“4+”。“2+”紅細(xì)胞呈片狀凝集,但有少許沉積孔底中部呈小圓點(diǎn)狀?!埃奔t細(xì)胞大部分沉于孔底中央,周圍有少量散在凝集顆粒。“-”紅細(xì)胞均沉于孔底呈小圓點(diǎn)狀,邊緣整齊。2.對(duì)照孔正常的情況下,紅細(xì)胞凝集100%的稀釋度為判定血凝價(jià)的終點(diǎn)。凡能使雞紅細(xì)胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)為病毒的凝集價(jià)。第11頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第12頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六血凝抑制試驗(yàn)步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,在第1排1-10孔內(nèi)加入25ulPBS緩沖液,第11孔不加。第12孔加25ulPBS緩沖液。2.在第1孔內(nèi)加入被檢血清25ul,混勻后吸出25ul加入第2孔內(nèi),再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi),依次類推至第10孔時(shí)棄掉25ul。第12孔不加作陰性對(duì)照孔。3.在1-12孔內(nèi)均加入“四價(jià)”血凝素25ul,震蕩后,室溫靜止作用40min。4.在1-12孔內(nèi)均加入1%的雞紅細(xì)胞懸液25ul,震蕩,室溫30min。5.觀測(cè)結(jié)果,記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).第13頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定測(cè)定孔R(shí)BC沉于孔底中心,呈紐扣狀。(+)
凝集(-)病毒對(duì)照孔:凝集RBC對(duì)照孔:無(wú)自凝血凝抑制試驗(yàn)效價(jià):呈完全血凝抑制使的最高血清稀釋度。
第14頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第15頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第16頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六第17頁(yè),共19頁(yè),2022年,5月20日,4點(diǎn)56分,星期六思考題1、病毒凝集紅細(xì)胞是不是一種特異的抗原體反應(yīng)?為什么?
2、血凝抑制實(shí)驗(yàn)是不是特異的抗原抗體反應(yīng)?為什么?3、血凝試驗(yàn)中為什么要加補(bǔ)充液?
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