熒光分析測(cè)定維生素c課件

熒光分析法測(cè)定維生素C維生素C及維生素C的測(cè)定原理熒光分析法測(cè)定維生素C實(shí)驗(yàn)熒光分析法測(cè)定維生素C應(yīng)用講解人：賀政軒一、維生素C及維生素的測(cè)定原理1.1維生素C

維生素C又名抗壞血酸,是維持機(jī)體正常生理功能的重要維生素之一,而人體不能自身合成，只能從食物和藥物中攝取，因此，食品、藥物中維生素C的分析具有重要意義。1.2維生素C測(cè)定方法

維生素C的測(cè)定常用的方法有光度法

、電化學(xué)法、滴定法、酶法、色譜法等。

本實(shí)驗(yàn)提出了一種新的測(cè)定維生素C的熒光分析方法：維生素C被Cu2

+氧化為脫氫

抗壞血酸，再與苯甲酸及十六烷基三甲基溴化銨產(chǎn)生熒光協(xié)同增敏作用，通過(guò)對(duì)體系熒光強(qiáng)度的測(cè)定進(jìn)行維生素C的定量分析。二、熒光分析法測(cè)定維生素C實(shí)驗(yàn)

1實(shí)驗(yàn)1.1主要儀器與試劑

分子發(fā)光儀:LS-55型

酸度計(jì):pH-211型

榨汁機(jī):CW-JE04型

電熱恒溫水浴鍋:HH.SY11-Ni1型

CuSO4溶液:2.0×10-3gm/L

十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)溶液:6.0×10-4g/mL苯甲酸溶液：1.0×10-4gm/L

維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:5.0×10-4g/mL,2～8℃（避光保存）；

維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液:1.0×10-5g/mL,2～8℃（避光保存）；

NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液:pH=6.0；

2結(jié)果與討論

2.1激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

取3.0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行操作,分別在290～330nm、360～460nm內(nèi)掃描得到激發(fā)光譜和發(fā)射光譜如圖1、圖2所示。從圖1、圖2中可看出,當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為308nm,發(fā)射波長(zhǎng)為408nm時(shí)體系的熒光強(qiáng)度最大,試劑空白的熒光值比較低且穩(wěn)定,故本實(shí)驗(yàn)選擇激發(fā)波長(zhǎng)為308nm,發(fā)射波長(zhǎng)為408nm。

1—Cu2

++BA+緩沖溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+維生素C+緩沖溶液+CTMAB1—Cu2

++BA+緩沖溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+維生素C+緩沖溶液+CTMAB激發(fā)光譜發(fā)射光譜2.2試劑加入順序

按照實(shí)驗(yàn)方法操作,在各試劑加入量相同的情況下,試驗(yàn)了試劑的不同加入順序?qū)晒鈴?qiáng)度的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)所加試劑順序依次為CuSO4溶液、苯甲酸溶液、維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液、NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液時(shí),體系的熒光強(qiáng)度最大，因此選用此加入順序?yàn)樽罴言噭┘尤腠樞颉?.3

緩沖溶液

溶液的pH值對(duì)體系熒光強(qiáng)度有較大的影響，試驗(yàn)了不同的pH值對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。由pH值—熒光強(qiáng)度的曲線可知,

當(dāng)pH

值為5.9

～

6.2

時(shí),熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值且比較穩(wěn)定,因此確定最佳pH值為

6.0。緩沖溶液的種類(lèi)對(duì)體系的熒光強(qiáng)度也有一定的影響。試驗(yàn)了以下幾種pH

值為6.0

的緩沖溶液:NaOH-KH2PO4、KH2PO4-硼砂、KH2PO4-Na2HPO4、NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀、Na2HPO4-檸檬

酸、NaOH-檸檬酸鈉、HAc-NaAc等。試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)所加的緩沖溶液為NaOH-鄰苯二甲酸氫鉀時(shí),熒光強(qiáng)度最大且穩(wěn)定。因此本實(shí)驗(yàn)選擇NaOH-

鄰苯二甲酸氫鉀為緩沖溶液,其最佳用量為5.0mL。2.4

加熱溫度和加熱時(shí)間

試驗(yàn)了不同溫度對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明,

當(dāng)加熱溫度為35℃時(shí)，既有利于提高體系反應(yīng)速度，又不使反應(yīng)物與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)受到破壞。改變加熱時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在35℃水浴中加熱30min，體系熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值且相對(duì)穩(wěn)定。

2.5

硫酸銅和苯甲酸的用量其它條件不變，試驗(yàn)了硫酸銅和苯甲酸的用量對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)硫酸銅的用量為0.6mL、苯甲酸的用量為2.0mL

時(shí)，體系熒光強(qiáng)度最大。2.6

表面活性劑

分別試驗(yàn)了十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)、十二烷基磺酸鈉及β

-環(huán)糊精對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明,表面活性劑對(duì)體系的熒光強(qiáng)度有一定的增敏效果，其中CTMAB

對(duì)體系的增敏效果最好。進(jìn)一步試驗(yàn)了CTMAB

的用量對(duì)體系的熒光強(qiáng)度的影響,

當(dāng)CTMAB

的用量為2.0mL

時(shí),

體系熒光強(qiáng)度最大。

樣品測(cè)定結(jié)果列于表3表3

樣品測(cè)定結(jié)果(n

=3)。由表3可知，用熒光分析法測(cè)定維生素C藥片、西紅柿和果珍中維生素C的含量，回收率為96.

7%～

100.5%準(zhǔn)確度較高。表3樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

熒光分析法測(cè)定維生素C具有操作簡(jiǎn)單,精密度高,檢出限低等優(yōu)點(diǎn),該法可以應(yīng)用于水果、蔬菜和藥物中維生素C的檢測(cè),適于推廣。利用某些物質(zhì)受光照射時(shí)所發(fā)生的熒光特性和強(qiáng)度，進(jìn)行物質(zhì)的定性分析或定量分析的方法，稱(chēng)為熒光光譜分析。使激發(fā)光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度保持不變，而讓熒光物質(zhì)所發(fā)生的熒光通過(guò)發(fā)射單色器照射于檢測(cè)器上，調(diào)節(jié)發(fā)射單色器至各種不同波長(zhǎng)處,由檢測(cè)器測(cè)出相應(yīng)的熒光強(qiáng)度，然后以熒光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光