最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件

》》項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素》》項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素1教學(xué)安排：

1.員工培訓(xùn)由老師講解白細(xì)胞介素-2生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)。分配實(shí)操任務(wù)：白細(xì)胞介素發(fā)酵生產(chǎn)。

教學(xué)安排：2最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件3最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件4最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件5最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件6最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件7最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件82酵母宿主菌特性?xún)?yōu)點(diǎn)：可對(duì)蛋白修飾；蛋白折疊正確；缺點(diǎn)：生產(chǎn)較慢。常用甲醇誘導(dǎo)型。2酵母宿主菌特性常用甲醇誘導(dǎo)型。93基因工程菌發(fā)酵控制要點(diǎn)(1)培養(yǎng)基兼顧生長(zhǎng)與外源基因表達(dá)。(2)接種量接種量適中，影響生長(zhǎng)速度和遲滯期的長(zhǎng)短。3基因工程菌發(fā)酵控制要點(diǎn)10(3)溫度影響酶活性。(4)溶解氧維持較高DO值。(3)溫度11(5)誘導(dǎo)時(shí)機(jī)微生物生長(zhǎng)旺盛后。(6)pH根據(jù)生長(zhǎng)期與生產(chǎn)期的需求控制。(5)誘導(dǎo)時(shí)機(jī)12三、白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)與功能Interleukin，簡(jiǎn)稱(chēng)IL。目前批準(zhǔn)上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。三、白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)與功能13IL-2分子量為１４５００的糖蛋白，它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動(dòng)的Ｔ細(xì)胞增殖。重組白介素－２可用于臨床研究。主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ）。ＬＡＫ細(xì)胞代表１個(gè)有單核巨噬細(xì)胞，Ｂ和Ｔ淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些ＬＡＫ細(xì)胞似乎對(duì)癌細(xì)胞有特異作用。此外，ＬＡＫ細(xì)胞（不象Ｔ細(xì)胞）介導(dǎo)殺傷不受ＭＨＣ的約束。

IL-2分子量為１４５００的糖蛋白，它刺激已被特異14四、生產(chǎn)工藝1工藝流程圖四、生產(chǎn)工藝15IL-2工程菌斜面搖瓶發(fā)酵制備包涵體洗滌與裂解凝膠過(guò)濾與復(fù)性檢定與包裝IL-2工程菌斜面搖瓶發(fā)酵制備包涵體洗滌與裂解凝膠過(guò)濾與復(fù)性162生產(chǎn)過(guò)程及工藝過(guò)程(1)發(fā)酵工程菌為大腸桿菌，溫度敏感型。種子用LB培養(yǎng)基；發(fā)酵用M9CA培養(yǎng)基，30度10小時(shí)，后提高溫度至42度，誘導(dǎo)3h。2生產(chǎn)過(guò)程及工藝過(guò)程17(2)分離純化包涵體制備離心收集，菌體懸于EDTA溶液中，用超聲波破碎細(xì)胞，后8000r/min離心，收集沉淀(包涵體和細(xì)胞碎片)。(2)分離純化18

包涵體洗滌及裂解：

用Tris-HCl洗滌3次，離心收集沉淀，用鹽酸胍變性，離心收集上清液。

包涵體洗滌及裂解：19凝膠過(guò)濾及復(fù)性：上清過(guò)SephacrylS-200柱，醋酸液洗脫，收集洗脫峰。干燥：用冷凍真空干燥。凝膠過(guò)濾及復(fù)性：20作業(yè)：1蛋白藥物有哪些種類(lèi)？2大腸桿菌與酵母宿主菌各有何特點(diǎn)和表達(dá)類(lèi)型？3白細(xì)胞介素-2有何功能與用途？4白細(xì)胞介素生產(chǎn)工藝如何？作業(yè)：21

結(jié)束語(yǔ)謝謝大家聆聽(tīng)！?。?2

結(jié)束語(yǔ)謝謝大家聆聽(tīng)?。。?2》》項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素》》項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素23教學(xué)安排：

1.員工培訓(xùn)由老師講解白細(xì)胞介素-2生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)。分配實(shí)操任務(wù)：白細(xì)胞介素發(fā)酵生產(chǎn)。

教學(xué)安排：24最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件25最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件26最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件27最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件28最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件29最新項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件302酵母宿主菌特性?xún)?yōu)點(diǎn)：可對(duì)蛋白修飾；蛋白折疊正確；缺點(diǎn)：生產(chǎn)較慢。常用甲醇誘導(dǎo)型。2酵母宿主菌特性常用甲醇誘導(dǎo)型。313基因工程菌發(fā)酵控制要點(diǎn)(1)培養(yǎng)基兼顧生長(zhǎng)與外源基因表達(dá)。(2)接種量接種量適中，影響生長(zhǎng)速度和遲滯期的長(zhǎng)短。3基因工程菌發(fā)酵控制要點(diǎn)32(3)溫度影響酶活性。(4)溶解氧維持較高DO值。(3)溫度33(5)誘導(dǎo)時(shí)機(jī)微生物生長(zhǎng)旺盛后。(6)pH根據(jù)生長(zhǎng)期與生產(chǎn)期的需求控制。(5)誘導(dǎo)時(shí)機(jī)34三、白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)與功能Interleukin，簡(jiǎn)稱(chēng)IL。目前批準(zhǔn)上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。三、白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)與功能35IL-2分子量為１４５００的糖蛋白，它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動(dòng)的Ｔ細(xì)胞增殖。重組白介素－２可用于臨床研究。主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ）。ＬＡＫ細(xì)胞代表１個(gè)有單核巨噬細(xì)胞，Ｂ和Ｔ淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些ＬＡＫ細(xì)胞似乎對(duì)癌細(xì)胞有特異作用。此外，ＬＡＫ細(xì)胞（不象Ｔ細(xì)胞）介導(dǎo)殺傷不受ＭＨＣ的約束。

IL-2分子量為１４５００的糖蛋白，它刺激已被特異36四、生產(chǎn)工藝1工藝流程圖四、生產(chǎn)工藝37IL-2工程菌斜面搖瓶發(fā)酵制備包涵體洗滌與裂解凝膠過(guò)濾與復(fù)性檢定與包裝IL-2工程菌斜面搖瓶發(fā)酵制備包涵體洗滌與裂解凝膠過(guò)濾與復(fù)性382生產(chǎn)過(guò)程及工藝過(guò)程(1)發(fā)酵工程菌為大腸桿菌，溫度敏感型。種子用LB培養(yǎng)基；發(fā)酵用M9CA培養(yǎng)基，30度10小時(shí)，后提高溫度至42度，誘導(dǎo)3h。2生產(chǎn)過(guò)程及工藝過(guò)程39(2)分離純化包涵體制備離心收集，菌體懸于EDTA溶液中，用超聲波破碎細(xì)胞，后8000r/min離心，收集沉淀(包涵體和細(xì)胞碎片)。(2)分離純化40

包涵體洗滌及裂解：

用Tris-HCl洗滌3次，離心收集沉淀，用鹽酸胍變性，離心收集上清液。

包涵體洗滌及裂解：41凝膠過(guò)濾及復(fù)性：上清過(guò)SephacrylS-200柱，醋酸液洗脫，收集洗脫