中草藥提取物復(fù)方制劑體外抑殺眼部蠕形螨作用的研究

30種中草藥提取物體外抑殺眼部蠕形螨的研究蠕形螨(Demodex)是一種小型寄生螨類，屬于節(jié)肢動物門、蛛形綱、真螨目、蠕形螨科。自然界存在種類和數(shù)量眾多的蠕形螨，只有兩個種類發(fā)現(xiàn)寄居于人體，即毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨[1]。在眼部，毛囊蠕形螨寄居于睫毛毛囊，而皮脂蠕形螨則寄居于睫毛皮脂腺和瞼板腺[2]。蠕形螨瞼緣炎表現(xiàn)為瞼緣及結(jié)膜充血，干澀不適，癢，異物感等。病情反復(fù)發(fā)作，難徹底治愈，因而人們不斷研究探索治療蠕形螨瞼緣炎的有效方案。既往，治療蠕形螨瞼緣炎的藥物主要有甲硝唑、金霉素眼膏、匹魯卡品眼膏等[3,4,5]，但容易復(fù)發(fā)，療程長，效果不盡人意。近年，GaoYY進(jìn)行的體外殺蟲試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以往報(bào)道的這些藥劑對眼部蠕形螨體外的殺蟲效果不良，而茶樹油具有很好的體外殺蟲效果，并呈濃度依賴型[6]，并已報(bào)道應(yīng)用于臨床[7]，對蠕形螨引起的眼部炎癥和不適有很好的效果。然而，茶樹油的不足之處為它有比較明顯的眼部刺激征，因而我們致力找尋一種既能有效殺螨而又刺激性小的藥物。中草藥作為傳統(tǒng)藥物的組成部分，在預(yù)防、治療各種疾病特別是西藥很難治愈的疑難雜癥方面的優(yōu)勢已獲得世界的廣泛認(rèn)同，對面部蠕形螨的治療方案也取得顯著療效。我們對30種中草藥分別采用80％乙醇熱回流法對其殺睫毛蠕形螨活性進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)丁香、蒼耳子等具有較顯著的殺滅眼部蠕形螨的活性。

1材料1．1供試藥物查閱《中藥大辭典》、《全國中草藥匯編》等有關(guān)書籍和文獻(xiàn)資料，選擇具有驅(qū)殺體內(nèi)外寄生蟲作用的中草藥，及國內(nèi)外期刊里出現(xiàn)的具有殺蟲、殺螨活性的中草藥，并從中挑選出30種刺激性較小的供于試驗(yàn)：艾葉、百部、白花丹、檳榔、白鮮皮、陳皮、大風(fēng)子、地膚子、丁香、大風(fēng)子、黃柏、苦參、蒲公英、蛇床子、使君子、仙鶴草、茵陳、芫花、梔子、青蒿、荊芥、五倍子、麝香、佛手柑、白芷、朱砂、打破碗花花、蒼耳子、苦楝皮、貫眾。（所有藥物均購自福建醫(yī)科大學(xué)附屬二院）1．2主要儀器雙目光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS），電熱套(PTHW，河南豫華儀器有限公司），

不銹鋼電熱蒸餾水器（上海路達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），高速中藥粉碎機(jī)（HX-100，浙江省永康市溪岸五金藥具廠），數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市江南儀器廠），循環(huán)水式真空泵（SHZ-D（III），河南省鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），架盤藥物天平（0g－500g，上海醫(yī)療器械八廠），可調(diào)式移液器（上海雷勃分析儀器有限公司）。其他耗材：鐵架臺、球形冷凝管、抽濾瓶、布式漏斗、磨口圓底燒瓶、溫度計(jì)、真空彎管、膠管、定性濾紙、載玻片、蓋玻片、乙醇等。2

方法2．1提取物的制備將中藥材清洗、干燥、粉碎，稱取藥材粉末20g，置500mL圓底燒瓶內(nèi)，加80％乙醇200mL，室溫浸泡12小時，85℃水浴熱回流提取2次，首次60分鐘，第2次30分鐘，合并提取液，放冷后真空抽濾，減壓回收乙醇至無醇味，得到中藥材乙醇提取物，定容成0.5g/ml。2．2體外殺螨試驗(yàn)我們經(jīng)過大量的睫毛采樣鏡檢，發(fā)現(xiàn)上瞼蠕形螨的陽性率高于下瞼，據(jù)報(bào)道，眼部蠕形螨高發(fā)于具有圓柱狀鱗屑的睫毛[8]，故采樣時統(tǒng)一拔取上瞼睫毛和采選帶有圓柱狀鱗屑或顏色異常、可疑蠕形螨寄居的睫毛，每上瞼拔4根，共8根，將拔下的睫毛置于載玻片上，觀察是否有蠕形螨存在。眼部蠕形螨在睫毛拔出后部分蟲體呈游離狀態(tài)，部分蟲體不同程度埋在睫毛的圓柱狀鱗屑中[6]，使蟲體不能有效接觸藥液，故本試驗(yàn)僅計(jì)數(shù)滴入藥劑后游離的蠕形螨。在確認(rèn)有蠕形螨的睫毛上，蓋上蓋玻片，將20ul待測藥液緩慢滴于蓋玻片的側(cè)緣，藥液緩慢向?qū)?cè)擴(kuò)散，顯微鏡下觀察蠕形螨的活動情況，直至螨蟲死亡。由于幼蟲離開人體后很快死亡，故受試螨蟲均選取活力好的成蟲作為試驗(yàn)對象，成蟲和幼蟲的區(qū)別為：成蟲為短棒狀，有4對發(fā)育良好的足，幼蟲體形瘦長，尾部尖削，可見3－4對發(fā)育不良的足（圖一）。蠕形螨死亡判定標(biāo)準(zhǔn)：蟲體肢節(jié)持續(xù)2min不動，用解剖針刺激仍無復(fù)蘇現(xiàn)象或蟲體體表皺縮、變色、變形、內(nèi)含物外瀉等。3

結(jié)果3．1中草藥篩選殺螨效果較好的中草藥是:丁香、蒼耳子、蒲公英、苦楝皮、使君子、艾葉、芫花、黃柏、苦參、荊芥、百部等，均能在30分鐘之內(nèi)殺滅睫毛蠕形螨。陰性對照組生理鹽水觀察150分鐘仍未見螨蟲死亡（表一）。（統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）該研究首次發(fā)現(xiàn)了蒼耳子具有較顯著的殺螨效果，金銀花也顯示出了一定的殺螨效果（55分鐘）。表一

中草藥對睫毛蠕形螨的體外殺蟲試驗(yàn)結(jié)果中草藥活螨數(shù)目（只）螨死亡時間（分鐘）中草藥活螨數(shù)目（只）螨死亡時間（分鐘）丁香156.33±1.75貫眾1552.93±3.28蒼耳子1512.47±1.41金銀花1555.07±3.45蒲公英1514.07±1.83佛手柑1558.93±4.27苦楝皮1515.13±1.30蛇床子1565.13±4.48使君子1519.80±1.57仙鶴草1569.93±5.05艾葉1523.87±1.64茵陳1575.07±5.98芫花1524.93±2.05五倍子1581.33±6.68黃柏1526.13±1.96地膚子1585.87±6.96苦參1527.07±2.19白花丹1588.20±7.51荊芥1529.20±2.68青蒿1591.93±7.75百部1530.53±3.66大風(fēng)子1596.80±7.98白芷1539.80±2.60朱砂1598.07±8.05梔子1541.00±2.51打破碗花花15103.87±8.68陳皮1546.93±2.60檳榔15109.03±8.98白鮮皮1549.87±3.34麝香15>120

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討論文獻(xiàn)報(bào)道的有殺滅蠕形螨的中藥有黃柏、百部、川楝皮、桔皮、苦參、花椒、白鮮皮、蛇床子、使君子、地膚子等[9－11]。這些殺蟲試驗(yàn)取材都是面部蠕形螨，國內(nèi)尚無對眼部蠕形螨的殺蟲試驗(yàn)報(bào)道。近年，GaoYY報(bào)道睫毛蠕形螨的體外殺蟲試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)茶樹油有良好的殺蟲效果，100％的茶樹油殺蟲時間為3.7分鐘，并呈濃度依賴性[6]，在Gao的報(bào)道中，75%酒精，5%碘伏，50%嬰兒香波等試劑體外殺蟲時間都長于150分鐘，這說明了眼部蠕形螨具有很好的對外界的抵抗力，這是蠕形螨瞼緣炎難以治愈，以及常規(guī)的嬰兒香波眼瞼清潔難以根治蠕形螨瞼緣炎的原因，因而尋找有效、副作用和刺激性小的眼部殺螨劑勢在必行。由于面部的毛發(fā)細(xì)，毛囊淺，擠壓出的蠕形螨帶有大量油脂，故我們推測非脂溶性的中葯提取物的殺蟲效果可能受到一定的影響。而且，睫毛毛囊粗大，附著深，眼部淚液的蒸發(fā)導(dǎo)致眼周的濕度也較面部大，因而我們認(rèn)為睫毛蠕形螨的棲息和生長發(fā)育環(huán)境與面部蠕形螨有所不同。基于上述的原因，筆者對于部分報(bào)道和未曾報(bào)道的中藥共30種重新進(jìn)行體外殺螨試驗(yàn)。中藥的有效成分的提取方法很多，其中歷史較久、應(yīng)用較多的是溶劑提取法。溶劑提取法有煎煮法、浸漬法、溶渣法、回流提取法、連續(xù)提取法等[12]。梁裕芬[10]用煎煮法對11種中藥材的煎劑的體外殺螨效果進(jìn)行了比較，結(jié)果濃度100％的百部、丁香組蠕形螨全部死亡時間分別是5h、7h，2％甲硝唑水劑對照組為9h。煎煮法簡便易行，可用水做溶劑只能溶解中藥材的親水性成分，煎出液中含雜質(zhì)較多，亦容易發(fā)生霉變，對含有皂苷成分較多的中藥材，水提液在減壓濃縮時，常會產(chǎn)生大量泡沫，使?jié)饪s困難。而對于含果膠、粘液質(zhì)類成分較多的中藥材，其水提液常呈膠狀，很難過濾，而且以上報(bào)道殺蟲效果不佳。我們前期試驗(yàn)采用煎煮法進(jìn)行體外殺蟲試驗(yàn)，顯示黃柏和百部等煎劑其殺螨效應(yīng)均在3h以后，所以我們不予采用。袁方曙等[11]用溫浸法對有殺蟲作用的中藥花椒、蛇床子、川楝子、苦參、芫花、補(bǔ)骨脂、貫眾、木鱉子、使君子、鶴虱和仙鶴草的有效成分進(jìn)行提取。結(jié)果顯示花椒浸出液6h將螨全部殺死，川楝子浸出液、蛇床子浸出液和苦參浸出液10h將螨全部殺死，而芫花、補(bǔ)骨脂、使君子、仙鶴草、貫眾、鶴虱和木鱉子浸出液在16h或18h才將螨全部殺死，殺蟲效果并不理想。我們之所以采用80％乙醇水浴回流提取，主要原因：⑴采用乙醇為提取溶劑，提取成分較完全，乙醇的用量、提取時間均比用水提取節(jié)省，溶解出來的水溶性雜質(zhì)也少，且乙醇提取液不易發(fā)生霉變。采用80％的乙醇提取，一是其中20％的水可以增加溶劑的穿透力，二是由于藥材組分之間的助溶作用，80％乙醇通常可提取出全部水溶性成分和脂溶性成分。⑵回流提取法可使藥材的成分溶解在溶劑中，溶劑受熱蒸發(fā)被冷凝管冷凝，又進(jìn)入燒瓶中提取藥材，因每次進(jìn)入藥材的溶媒為高純?nèi)苊?，始終保持較高的濃度差，從而加快提取速度，且溶媒可通過減壓回收重復(fù)利用，減少溶媒的用量[8]。該試驗(yàn)對30種記載有驅(qū)殺體內(nèi)外寄生蟲作用的中草藥進(jìn)行了殺螨活性篩選，其中丁香、蒼耳子等11種中藥提取物具有較強(qiáng)殺螨活性，其80％乙醇提取物均能在30分鐘內(nèi)殺死全部供試蠕形螨。丁香、蒼耳子、苦楝皮、荊芥、白芷、貫眾、金銀花、佛手柑在以往文獻(xiàn)中未見有體外殺滅人體蠕形螨的研究報(bào)道，其中丁香、蒼耳子、苦楝皮、荊芥殺螨效果較佳。在本試驗(yàn)中黃柏的殺蟲時間為26.13±1.96分鐘，和文獻(xiàn)報(bào)道黃柏的殺滅面部蠕形螨時間（0.83±0.36分鐘）差別甚大

[7]，我們考慮導(dǎo)致這種差別的原因?yàn)椋孩沤廾湫悟臈⒑蜕L發(fā)育環(huán)境與面部蠕形螨有所不同（如上所述）；⑵其文獻(xiàn)中蠕形螨采樣方法是擠壓刮拭法刮取面部皮脂，涂在載玻片上，用蓋玻片擠壓研磨皮脂使之均勻分布[7]，這外力可能使蠕形螨壽命減短；⑶其受試螨蟲未提及是否均挑選活力好的成蟲作為受試螨蟲，因?yàn)橛紫x的壽命本身就很短，在外界很容易死亡。

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結(jié)論

殺螨時間短于百部的中草藥有丁香、蒼耳子、蒲公英、苦楝皮、使君子、艾葉、芫花、黃柏、苦參、荊芥等10種。對其安全性有待進(jìn)一步驗(yàn)證，為臨床采用中草藥制劑治療蠕形螨瞼緣炎提供依據(jù)。

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