化學發(fā)光臨床應用

鄭州安圖生物工程有限公司化學發(fā)光免疫診斷技術(shù)及其在臨床中的應用內(nèi)容提要化學發(fā)光技術(shù)概況

安圖化學發(fā)光項目臨床應用放射免疫診斷技術(shù)（RIA）酶聯(lián)免疫診斷技術(shù)（ELISA）化學發(fā)光免疫診斷技術(shù)（CLIA）20世紀60年代70年代80年代90年代2000年2020年時間臨床免疫診斷技術(shù)的發(fā)展基本歷經(jīng)了以下三個階段：

化學發(fā)光（CLIA）酶免（EIA）放免（RIA）靈敏度（M/L）10-17-10-1910-1510-15-10-16標記物酶蛋白或發(fā)光物質(zhì)酶蛋白放射性元素靈敏度高低高線性范圍寬窄寬放射污染無無有試劑穩(wěn)定性6-12個月6-12個月1-3個月操作易易繁瑣腫瘤標志物系列生殖激素系列

甲狀腺系列糖尿病系列傳染病系列心梗系列綜合系列安圖化學發(fā)光產(chǎn)品的臨床應用生殖激素檢測系列垂體激素（由垂體分泌）

LH促黃體生成素

FSH促卵泡生成素

PRL催乳素甾體激素（由性腺分泌）

E2雌二醇

P孕酮

T睪酮下丘腦垂體前葉（腺垂體）FSH

LHPRL孕酮雄激素雌激素絨毛膜促性腺激素性腺(卵巢，乳腺，睪丸等)邊緣腦大腦皮層中樞

表示促進

表示抑制下丘腦-垂體-性腺機能軸女性月經(jīng)周期中各種激素濃度變化生殖激素的檢測意義青春期前兒童性早熟，判斷真性性早熟和假性性早熟青春期延遲及性幼稚癥的診斷和判別

女性閉經(jīng)和不孕癥，有助于查找病因女性多毛癥、多囊卵巢綜合征的診斷男女性高催乳素血癥的診斷男性性功能減退和不育癥，有助于查找病因更年期綜合征和卵巢功能衰竭的判斷體外受孕（IFV）作為監(jiān)測工具性早熟的診斷一般根據(jù)臨床表現(xiàn)就可判別，而真性和假性性早熟的鑒別則有賴于激素水平的檢測。真性性早熟者

FSH、LH、E2、P或T均會異常增高；假性性早熟者

僅有性腺激素（E2、P或T）的異常升高，但FSH、LH基本正常

原發(fā)性性腺功能低下：由性腺（卵巢）本身造成的性腺功能低下。LH、FSH會升高，E2、P會下降。繼發(fā)性性腺功能低下：由于下丘腦或垂體原因，垂體促性腺激素分泌缺乏導致的性腺功能低下。LH、FSH、P、E2都會較低。女性性腺功能低下繼發(fā)性睪丸功能低下：FSH、LH、T均低原發(fā)性睪丸功能低下：T低，F(xiàn)SH、LH高

若FSH、LH、T都正常，則說明睪丸功能正常，PRL的異常增高也是性功能低下的主要原因。男性性腺功能低下女性閉經(jīng)和不孕癥對于閉經(jīng)和不孕癥女性，測定FSH、LH、E2、P等可鑒別病變部位：

FSH、LH同時低或僅LH異常低，則病因在下丘腦或垂體；FSH、LH均正常，E2、P含量低者，則病因在性腺（卵巢）。此外，LH/FSH比值增高提示排卵障礙，常見于多囊卵巢綜合癥及雄性激素升高患者；垂體瘤和高催乳素血癥，也可抑制排卵導致不孕。是一組以月經(jīng)失調(diào)、無排卵性不孕、多毛、肥胖伴雙側(cè)卵巢增大、多囊性病變等為特征的癥候。本病患者一般情況下LH持續(xù)升高，F(xiàn)SH正常或偏低，LH/FSH比值增加。T大量分泌，含量增高。多囊卵巢綜合征卵巢功能衰竭和更年期更年期是卵巢功能生理性的衰竭：激素水平表現(xiàn)為LH、FSH升高，P、E2降低。年輕女性出現(xiàn)上述的激素變化，則可診斷為卵巢早衰。高催乳素血癥生理性：

妊娠、產(chǎn)后泌乳、應激反應病理性：

分泌催乳素的垂體腺瘤泌乳素抑制激素（PIH）運輸至垂體前葉產(chǎn)生異常藥物其他過高的催乳素可抑制LH和FSH分泌，抑制卵巢功能，抑制排卵生殖激素檢測及相關(guān)疾病—女性相關(guān)疾病檢測項目性早熟FSH、LH、E2、P青春期發(fā)育延遲FSH、LH、E2、P閉經(jīng)和不孕癥FSH、LH、PRL、E2、P多毛癥FSH、LH、PRL、E2、P、T多囊卵巢綜合征FSH、LH、PRL、E2、P、T高催乳素血癥PRL更年期和卵巢衰竭FSH、LH、E2、P生殖激素檢測及相關(guān)疾病—男性相關(guān)疾病檢測項目性早熟FSH、LH、T青春期發(fā)育延遲FSH、LH、T性功能減退和不育癥FSH、LH、PRL、T高催乳素血癥PRL精子缺乏FSH、LH、T乳腺發(fā)育過度T、E2、PRL

甲狀腺功能系列

TSHT3

FT3

T4

FT4

TGAbTPOAb甲狀腺血清學檢測意義甲狀腺疾病的診斷非甲狀腺疾病的排除指導治療和療效觀察

下丘腦--垂體--甲狀腺軸的調(diào)節(jié)

下丘腦垂體甲狀腺T3、T4TRHTSH表示促進表示抑制甲亢常見模式TSHT3T4FT3FT4降低偏高正常正常正常降低偏高正常偏高正常降低偏高偏高偏高正常降低高高高高甲減常見模式TSHT3T4FT3FT4升高正常正常正常降低升高正常降低正常降低升高降低降低正常降低升高降低降低降低降低非常見模式影響因素1垂體，下丘腦功能異常2干擾物質(zhì)—甲狀腺結(jié)合蛋白（TBG、白蛋白）及一些競爭性結(jié)合蛋白物質(zhì)，藥物，激素3亞臨床甲狀腺疾病4先天性TBG，白蛋白異常5先天性甲狀腺相關(guān)激素異常6不同的病理或治療過程7非甲狀腺疾病的影響疾病甲狀腺相關(guān)激素變化TSHT3T4FT3FT4肝臟疾病正?；蚪档徒档驼＝档驼；蚪档吞悄虿≌＝档徒档徒档驼ｏB腦損傷

降低升高降低正常精神病

一過性升高一過性升高一過性升高一過性升高腎臟疾病正常降低降低降低正常心血管疾病

降低

正常甲狀腺球蛋白抗體Anti-TG

甲狀腺過氧化酶抗體Anti-TPO1.主要用于自身免疫性甲狀腺病的診斷2.TGAb陽性主要見于①橋本甲狀腺炎，自身免疫性甲狀腺疾病、原發(fā)性甲狀腺功能減退，甲狀腺功能亢進患者等，橋本甲狀腺炎患者陽性檢出率高達80％～90％。②某些肝臟病、各種膠原性疾病和重癥肌無力。③正常婦女隨年齡的增長,陽性檢出率增加，40歲以上婦女陽性率達18％。3.TPOAb陽性見于橋本甲狀腺炎（90%），原發(fā)性甲狀腺功能亢進，原發(fā)性甲狀腺功能減退，可比正常人高幾十倍或上百倍4.有些患者TGAb陰性，但TPOAb陽性，因此兩種抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的陽性檢出率。

AFPCEAβ-HCGPSAfPSACA125CA15-3CA19-9CA50SFβ2-MG腫瘤標志物系列腫瘤標志物的檢測意義腫瘤的早期檢測腫瘤復發(fā)的早期檢測預后應用療效監(jiān)測理想的腫瘤標志物應具有：

⑴靈敏度100%；⑵特異性100%；⑶器官特異性；⑷與腫瘤的大小或分期有關(guān)；⑸與預后有關(guān)；⑹監(jiān)測腫瘤的復發(fā)。然而目前所應用的腫瘤標志物均未完全達到上述要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價值，關(guān)鍵是要正確評價腫瘤標志物檢測的臨床意義。AFP原發(fā)性肝癌的診斷檢測血清AFP含量是診斷原發(fā)性肝癌的重要手段之一，排除妊娠、活動性肝病、生殖腺胚胎性腫瘤的情況下孕婦血清可見升高，從妊娠6周開始合成，12-15周達到高峰。胎兒出生后數(shù)月至一年后體內(nèi)AFP水平接近成人急慢性肝炎、肝硬化患者血清中可檢出AFP一般僅為50-200ng/ml，少數(shù)病人可暫時升高到400ng/ml以上。先天性胎兒畸形診斷和惡性畸胎瘤的診斷。

CEA非器官特異性腫瘤相關(guān)抗原，胃腸道、呼吸道、泌尿道多有升高廣泛應用于常規(guī)體檢術(shù)后及療效觀測肝炎、肝硬化及肺部疾病等也可以造成升高，吸煙亦能導致CEA升高前列腺癌篩查，組織特異性抗原，而非癌特異性抗原。PSA對前列腺癌陽性檢出率為50%-80%前列腺創(chuàng)傷，良性前列腺增生癥（BPH）時，前列腺炎、腎臟和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病，可見血清PSA可增高；良性前列腺增生血清中游離PSA的比例顯著增高PSA與f-PSA35%30%25%20%15%10%5%0%良性疾病的可能性增加前列腺癌的可能性增加FREEPSA%結(jié)果解釋P-Ca10%34%70%CA125卵巢癌篩查，觀察療效，判斷有無復發(fā)動態(tài)檢測CA125的增速以鑒別腫瘤是良性還是惡性非卵巢癌陽性結(jié)果：妊娠、月經(jīng)期、子宮內(nèi)膜炎等婦科炎癥情況。在妊娠頭3個月和月經(jīng)期CA125陽性率偏高

CA153用于乳腺癌篩查常用于術(shù)后觀察其它惡性腫瘤也可使CA15-3有不同程度的陽性率，如卵巢癌、胰腺癌、胃癌、肝癌CA15-3對蛋白酶等酶類很敏感，血清標本應避免微生物的污染

CA199胰腺癌、膽囊癌、結(jié)直腸癌CA19-9明顯上升,胃癌、肝癌也有升高。急性胰腺炎、膽囊炎，肝硬化、肝炎等疾病也會造成CA19-9上升，應注意區(qū)別對待。

CA50廣譜腫瘤標志物.

對胰腺癌、膽囊癌，胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌及卵巢腫瘤診斷亦有較高價值。常用于常規(guī)體檢潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、自身免疫性疾病等也可見其上升，注意區(qū)別對待。

HCG檢測正常妊娠、異位妊娠檢測自然流產(chǎn)滋養(yǎng)層細胞腫瘤的診斷其他腫瘤的重要標志（如胃癌、胰腺癌、肝癌，多發(fā)性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等）血清hCG濃度的變化受精卵植入子宮內(nèi)膜后，胎盤滋養(yǎng)層合體細胞分泌hCG。在第一周約為50mIU/ml。在其后六周每1.5－3天增加一倍，至第10周左右為峰。其后下降，從第10到第16周逐步降為峰值的1/5，一直維持到分娩。

血清hCG濃度的變化正常妊娠婦女血清中HCG平均值

腫瘤標志物檢測注意點聯(lián)檢更有意義灰區(qū)結(jié)果的分析腫瘤標志物聯(lián)合檢測----提高靈敏度腫瘤標志物動態(tài)觀察----提高準確性

SFβ2-MG

血液病

f-PSAPSA

前列腺

SFβ-HCG

子宮

CA125AFPβ-HCGCEA

卵巢

CA15-3CA125CEA

乳房

CA50CEACA19-9肺

CA19-9CEACA50

胰腺

CEACA19-9CA50

結(jié)直腸

AFPSFCEA

肝

腫瘤標志物選擇順序

癌腫部位糖尿病檢測系列胰島素C-肽

PI、INS和C-P三者的關(guān)系臨床診斷意義糖尿病分型評價胰島分泌功能觀測療效診斷胰島瘤胰島素（C-肽）測定方法及試驗結(jié)果INS、C-肽測定注意事項1.只測空腹值，不進行激發(fā)性實驗臨床意義不大2.只測胰島素，不進行C-肽檢測，受干擾因素較大3.勿將測量數(shù)據(jù)與其它測定方法作簡單對照傳染病系列

化學發(fā)光兩對半定量檢測試劑

HBsAg、HBsAb、

HBeAg、HBeAb

、HBcAb化學發(fā)光兩對半定量檢測的應用乙肝感染篩查急性乙肝診斷治療中的具體監(jiān)測酶免或膠體金檢測HBsAg（-）的HBV感染的結(jié)果分析注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs濃度的定量分析）結(jié)合FQ-PCR-DNA診斷病情FQ-PCR-DNA與HBeAg定量檢測相關(guān)性分析結(jié)合PCR診斷病情

HBV-DNA——病毒復制和患者具有傳染性的標志

HBV-DNA陰性并不完全代表體內(nèi)HBV已被清除或痊愈。

HBV-DNA陰性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc濃度均還較高，提示并未完全痊愈。

HBV-DNA陰性HBeAg陽性提示有可能停藥后病毒再次出現(xiàn)復制狀況。如果HBV-DNA陰性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc濃度均很低或陰性并持續(xù)一段時間，提示可能完全痊愈，預后療效良好。

化學發(fā)光兩對半比酶免兩對半的優(yōu)勢一靈敏度高——縮短“窗口期”，降低漏檢率

1.獻血人員的篩查——降低低濃度標本的傳染率

2.乙肝感染早期的檢測——為病人爭取治療時間

3.部分慢性乙肝患者及攜帶者HBsAg濃度較低，酶免法可能會造成漏檢

4.某些人群如醫(yī)護人員，病人家屬長期接觸患者但非直接經(jīng)輸血傳播，可能造成低濃度感染

5.病毒發(fā)生變異后，表達量較低，常規(guī)ELISA或膠體金檢測易造成漏檢，化學發(fā)光法極有可能同時檢測出HBsAg和抗-HBs。

HBsAg陽性人群中，有部分人群濃度小于

1ng/ml，化學發(fā)光定量試劑能縮短“窗口期”，最大限度地避免漏檢，降低傳播率化學發(fā)光定量（CLIA）檢測HBsAg靈敏度可達0.05-0.1ng/ml，而酶標（ELISA）檢測HBsAg靈敏度是0.5-1.0ng/ml，膠體金檢測HBsAg靈敏度是1-5ng/ml，所以只有血清中的HBsAg達到0.5-5ng/ml酶標或膠體金才會呈陽性反應。

二線性范圍寬，定量檢測——有效檢出高、低值

標本，動態(tài)觀測病情

1.急性乙肝1，2兩項的互轉(zhuǎn)通過定量檢測更清晰直觀，可預見乙肝是否處于康復期，是否轉(zhuǎn)為慢性乙肝。如HBsAg濃度降低，HBsAb的濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復期發(fā)展。反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢，而HBsAb一直處于較底水平，則容易發(fā)展為慢性乙肝或攜帶者。

2.定量分析HBeAg和抗-HBe的濃度變化，可以反映病情變化和治療效果。定量測定能明確檢測HBeAg向抗-HBe轉(zhuǎn)換的時期，即表現(xiàn)為HBeAg濃度下降和抗-HBe濃度升高的過程。高濃度的HBeAg還可間接提示病毒處于高復制狀態(tài)，具有較高的傳染性。高濃度的抗-Hbe一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而在某些時候（如肝功能指標很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關(guān)。

3.有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷。非活動性慢性乙肝各項指標相對穩(wěn)定，活動性往往呈進行性變化。

化學發(fā)光兩對半比酶免兩對半的優(yōu)勢●HBeAg是病毒復制和傳染性的標志血清HBeA