普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義報(bào)告

普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（動(dòng)物、植物）實(shí)驗(yàn)一（1）普通光學(xué)顯微鏡及其使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馄胀ü鈱W(xué)顯微鏡的構(gòu)造及其原理，并熟練掌握其操作方法。二、實(shí)驗(yàn)用品普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、濾紙、擦鏡紙。三、實(shí)驗(yàn)原理和方法普通光學(xué)顯微鏡從構(gòu)造上可分光學(xué)、機(jī)械和電子三大系統(tǒng)。1、顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)通常由物鏡、目鏡、聚光器和光闌組成。1)、物鏡(objective)顯微鏡的質(zhì)量主要取決于物鏡。物鏡種類繁多，性能相差懸殊。物鏡的放大倍數(shù)用數(shù)字表示，如4、10、20、40和100等。a．干燥系(drysystem)物鏡鏡檢時(shí)，物鏡與蓋片間，不添加任何液體。如4×、10×、20×和40×物鏡都屬干燥系，使用時(shí)不加用任何浸液，只以空氣為介質(zhì)，其折射率為1，所以干燥系物鏡的數(shù)值孔徑小，分辨率亦低。b．浸沒系(immersionsystem)物鏡物鏡在使用時(shí)，前透鏡與蓋片之間浸滿液體。依充添的浸液的不同，主要可分為油浸系(oilimmersion)和水浸系(waterimmersion)等類別。最常用的浸沒液為香柏油(cederoil)，其折射率為1.515，與玻片的折射率相近，且不易干涸。使用水浸物鏡時(shí)加用水，其折射率1.33。油浸物鏡外殼上刻有：“oil”、“oel”、“imm”和“HI”等字樣，水浸物鏡刻有“W”或“Water”字樣；油、水浸兩用物鏡則刻上“oil+w”字樣；甘油浸沒物鏡刻有“Glyc”或“Glyz”等字樣。2)、目鏡(eyepiece，ocular)目鏡作為影像和肉眼間的放大鏡，將物鏡映來的影像做第二次放大。同時(shí)，目鏡作為物鏡的補(bǔ)償，把物鏡殘留下的像差給予進(jìn)一步校正，以提高造像質(zhì)量。目鏡作為投影器，把放大的影像投射在攝影暗箱的焦平面上。目鏡通常由兩片(組)正透鏡組成，上面的透鏡叫接目或眼透鏡(eye—lens)，它決定倍數(shù)和成像的優(yōu)劣；下面的透鏡叫會(huì)聚透鏡(collectivelens)或場(chǎng)鏡(fieldpiece)，它使視野邊緣的成像光線向內(nèi)折射，進(jìn)入眼透鏡中，使物體的影像均勻明亮。上下透鏡的中點(diǎn)，或場(chǎng)鏡下面設(shè)有用金屬制造的光闌叫做視野光闌或場(chǎng)光闌(fieldstop)。場(chǎng)鏡或物鏡在這個(gè)光闌面造像，在光闌上可裝入各種目鏡測(cè)微計(jì)、十字線玻片和指針等。由眼透鏡射出的成像光線基本上為平行光束，并在目鏡之上約10mm處交叉，此交叉點(diǎn)稱作出射光瞳。3）聚光器(condensers)聚光器等聚光系統(tǒng)，使來自光源的光線放大，并聚成光束，透過載片照明樣品，射入物鏡。聚光器由聚光鏡和孔徑光闌(aperturediaphragm)構(gòu)成。聚光鏡屬正透鏡系統(tǒng)，由一至數(shù)片透鏡組成，具會(huì)聚作用，把照明光線會(huì)聚放大，射向被檢樣品，進(jìn)入物鏡。孔徑光闌位于聚光鏡下方，光闌的孔徑可變，以改變照明光束的直徑，調(diào)節(jié)進(jìn)光量。孔徑光闌的開度，即聚光器數(shù)值孔徑，左右顯微鏡的成像質(zhì)量。物鏡的有效數(shù)值孔徑，其中涵容聚光器的數(shù)值孔徑，即:物鏡的有效數(shù)值孔徑＝物鏡數(shù)值孔徑＋聚光器數(shù)值孔徑/。2、顯微鏡的照明普通光學(xué)顯微鏡，普遍采用中心亮視野透射照明法。照明光源：照明光源以鎢絲燈和鹵鎢燈為多。鹵鎢燈優(yōu)于鎢絲燈，為顯微鏡的主要光源。3、光路及成像顯微鏡的光路或光程(1ightpath)即光源照明的通路。光路始于光源燈，光源裝在鏡座后方的燈室(1amphousing)內(nèi)。光源燈絲(S)發(fā)出的色光，由聚光透鏡集光成束或光錐，經(jīng)鏡座中的視場(chǎng)光闌(L)，投向反光鏡，呈現(xiàn)45°折射向上，入射孔徑光闌，光源燈絲在此平面處第一次成像(S1)。透過聚光鏡使光線放大、聚集，透射、照明載物臺(tái)的樣品，視場(chǎng)光闌在此平面處第一次成像(L1)，即在樣品聚焦的同時(shí)，可見清晰的、縮小的視場(chǎng)光闌的影像。成像光束繼而進(jìn)入物鏡，在物鏡的后焦面(rearfocalplane)的平面處，光源燈絲第二次成像(S2)。成像光束經(jīng)轉(zhuǎn)折進(jìn)入目鏡，在目鏡的場(chǎng)光闌平面處，視場(chǎng)光闌第二次成像(L2)。最終，成像光束從目鏡眼透鏡射出，在目鏡的出射光瞳處，光源燈絲第三次成像(S3)。視場(chǎng)光闌的第三次成像(L3)在人眼的視網(wǎng)膜上。在成像系統(tǒng)中，一個(gè)位置的改變，會(huì)引起整個(gè)成像關(guān)系的改變，光源燈前后位置的稍許位移將導(dǎo)致光源成像位置的變動(dòng)。4、放大率(magnification)顯微鏡最后形成的物體放大影像，對(duì)被檢物體的大小比例稱為放大率，即像高比物高。放大倍數(shù)以長(zhǎng)度計(jì)算，而不是以面積或體積計(jì)算。某些顯微鏡為適應(yīng)不同需要，鏡筒內(nèi)裝有倍數(shù)不同的附加透鏡系統(tǒng)。在專用的顯微攝影裝置中，附有攝影透鏡(photographiclens)。顯微攝影總放大率的計(jì)算，除目鏡、物鏡的放大率外，攝影透鏡的放大率亦要計(jì)算在內(nèi)。顯微鏡的總放大率(Mt)應(yīng)為；Mt＝Mob×Me×MphMob：物鏡放大率Me：目鏡放大率Mph：攝影透鏡放大率5、顯微鏡的使用正確、合理地使用顯微鏡，是做好鏡檢和顯微攝影的前提。1）光路合軸調(diào)整照明光束應(yīng)與顯微鏡的光軸合一，使光源均勻地照明視場(chǎng)。鏡檢和攝影前，光路要合軸調(diào)整，使照明光束與顯微鏡的光軸于同一軸線上。光路系統(tǒng)中的目鏡、物鏡和視場(chǎng)光闌位置固定，勿需調(diào)整，僅聚光器可調(diào)。因此，光路的合軸實(shí)為聚光器和光源燈的調(diào)中。a.聚光器的調(diào)中聚光器的調(diào)中步驟如下：(1)轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器升降旋鈕，把聚光器升至最高位置。(2)接通光源燈的電源開關(guān)。(3)將制片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，用4X或低倍物鏡對(duì)樣品聚焦。(4)縮小視場(chǎng)光闌，在視場(chǎng)中可見邊緣模糊的視場(chǎng)光闌圖像。(5)微降聚光器，至視場(chǎng)光闌的圖像清晰聚焦止。(6)用聚光器兩個(gè)調(diào)中的螺桿推動(dòng)聚光器，使縮小的視場(chǎng)光闌的圖像，調(diào)至視場(chǎng)中心。(7)開放視場(chǎng)光闌，使多角形的周邊與視場(chǎng)邊緣相接。(8)反復(fù)縮放視場(chǎng)光闌，確認(rèn)光闌中心和邊緣與視場(chǎng)完全重合。(9)使聚光器回復(fù)頂點(diǎn)位置。在視場(chǎng)中，通過觀察視場(chǎng)光闌影像的相對(duì)移動(dòng)，使聚光器調(diào)中，達(dá)到光軸合一。2）光闌及其使用顯微鏡有兩種光闌：視場(chǎng)光闌和孔徑光闌。視場(chǎng)光闌控制照明光束，限定視場(chǎng)大小?？讖焦怅@通過光闌的放縮，限定，聚光鏡的孔徑大小。兩者皆為可變光闌(irisdiaphragm)，正確調(diào)節(jié)和使用光闌，是保證鏡檢和攝影質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。四、思考題1．物鏡的種類各具何種特點(diǎn)?2．目鏡在顯微鏡的成像上起何作用?3．聚光器的構(gòu)成及其作用?4．如何進(jìn)行光路合軸調(diào)節(jié)?5．物鏡和目鏡的選用及其組合的原則?實(shí)驗(yàn)一（2）細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髮W(xué)習(xí)并掌握顯微鏡的正確使用方法。了解真核細(xì)胞的各種形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)。學(xué)習(xí)臨時(shí)裝片標(biāo)本的制作方法。了解植物細(xì)胞中貯藏的內(nèi)含物種類及其特性。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞是構(gòu)成植物體的基本單位，也是植物生命活動(dòng)的基本單位。根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)的方式，可以把構(gòu)成生物有機(jī)體的細(xì)胞分為兩類，即原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。原核細(xì)胞內(nèi)沒有典型的細(xì)胞核，也沒有分化出以膜為基礎(chǔ)的具有特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞器；而真核細(xì)胞的DNA主要集中在由核膜包被的細(xì)胞核中，并分化出多種以膜為基礎(chǔ)的細(xì)胞器。高等植物核絕大多數(shù)低等植物均由真核細(xì)胞構(gòu)成。植物細(xì)胞通常很小，其直徑一般在20~50μm之間，因而要借助顯微鏡才能觀察到。但也有少數(shù)植物細(xì)胞，如苧麻(Boehmerianivea)的纖維細(xì)胞長(zhǎng)可達(dá)550mm，用肉眼即可看到。盡管不同植物細(xì)胞在形態(tài)、大小上有一定差異，但它們的基本結(jié)構(gòu)是一致的。三、實(shí)驗(yàn)材料和用品實(shí)驗(yàn)材料：1、洋蔥鮮鱗莖。2、新鮮菠菜。3、馬鈴薯塊莖。4、新鮮花生米或菜豆種子。實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、剪刀、吸管、尖頭鑷子、刀片等實(shí)驗(yàn)試劑：1、碘－碘化鉀溶液：取3g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中，再加入1g碘，溶解后即可使用。此液應(yīng)放在棕色試劑瓶中，暗處保存。2、蘇丹=3\*ROMANIII染液：、先將0.1g蘇丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、以洋蔥鱗莖的表皮為材料，在光鏡下觀察植物細(xì)胞的基本組成和結(jié)構(gòu)。2、菠菜葉肉細(xì)胞中葉綠體的觀察。3、蠶豆表皮細(xì)胞氣孔的觀察。4、運(yùn)用特異性染色方法鑒定植物細(xì)胞中主要的內(nèi)含物。五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟1、物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的觀察1)洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞臨時(shí)裝片標(biāo)本的制作與觀察取一洗凈的載玻片，用紗布擦干，于玻片中央滴一滴蒸餾水，用尖頭鑷子從洋蔥肉質(zhì)鱗片葉內(nèi)表皮撕下一小塊表皮，鋪在水滴上，用解剖針輕輕將其壓入水中，使之展平。用鑷子夾住洗凈擦干的蓋玻片的一邊，使另一邊接觸水滴的邊緣，然后慢慢地放下，以便驅(qū)走蓋玻片下的空氣，不致產(chǎn)生氣泡。用吸水紙吸去蓋玻片周圍的水，于顯微鏡下觀察。在低倍下，可見洋蔥表皮細(xì)胞略呈長(zhǎng)方形，排列緊密，每個(gè)細(xì)胞內(nèi)有一圓形或扁圓形的細(xì)胞核。在蓋玻片的一側(cè)滴上一滴碘－碘化鉀溶液，滴在蓋玻片邊緣的載玻片上，然后用吸水紙一側(cè)將蓋玻片下的水分吸去，把染料引入蓋玻片與載玻片之間，對(duì)材料進(jìn)行染色觀察。注意：1.撕表皮時(shí)不要把表皮撕得過大，如撕下的表皮面積大于蓋玻片，要將表皮放在有水的載玻片上，用刀片切成小塊，便于觀察。2.撕表皮時(shí)動(dòng)作要迅速，勿將撕下的表皮在空氣中暴露時(shí)間過久，以免使生活細(xì)胞由于失水而受到損傷。3.撕開的一面最好朝上放在載玻片上，以利于染色和進(jìn)行組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的觀察。4.撕下的表皮一定要平鋪在有水的載玻片上，如發(fā)生褶皺或重疊要用解剖針將其鋪平，以免影響觀察效果。2).菠菜葉肉細(xì)胞葉綠體的觀察取一新鮮菠菜葉片，用鑷子撕去一小塊下表皮，用小刀輕輕刮取一點(diǎn)葉肉細(xì)胞，制作菠菜葉肉細(xì)胞臨時(shí)裝片標(biāo)本。將所制標(biāo)本先置低倍鏡下觀察，然后再轉(zhuǎn)高倍鏡，注意葉肉細(xì)胞內(nèi)葉綠體的形態(tài)、數(shù)目。3).氣孔的觀察取新鮮蠶豆葉片，用刀片在葉的背面輕輕劃一個(gè)小方塊，用鑷子從切口處夾住表皮，并向切開的方向撕下表皮，放在載玻片上的水滴中，用鑷子展平，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察，先在低倍鏡下找出比較薄的部位，然后換至高倍鏡下觀察。注意觀察氣孔的形態(tài)及類型。4).植物細(xì)胞的內(nèi)含物在細(xì)胞代謝活動(dòng)中，常常有一些代謝產(chǎn)物以不同形式貯存在液泡、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器中，其中有些物質(zhì)，如淀粉、脂肪、蛋白質(zhì)等可以通過特殊的顯色方法顯示出來。取馬鈴薯(Solanumtuberosum)塊莖切成兩半，用解剖刀在切開的塊莖表面輕輕刮一下，將附著在刀口附近的渾濁汁液放在載玻片上，用碘－碘化鉀染色，然后蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。取一粒菜豆(Phaweolusvulgaris)種子，剝?nèi)シN皮，用刀片對(duì)含有豐富貯藏物質(zhì)的肥厚子葉做徒手切片，選取較薄的切片放在載玻片上，用碘－碘化鉀染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下觀察。其中被染成金黃色的顆粒是糊粉粒，這是蛋白質(zhì)的一種貯藏形式。取花生(Arachishypogaea)種子，做徒手切片，選取較薄的切片放在載玻片上，用蘇丹=3\*ROMANIII染色，然后蓋上蓋玻片在顯微鏡下觀察。細(xì)胞內(nèi)的脂肪被染成紅色。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告繪制洋蔥表皮細(xì)胞及細(xì)胞核。繪圖表示菠菜葉綠體的形態(tài)。繪制蠶豆表皮的氣孔。制造臨時(shí)裝片應(yīng)該注意些什么問題？附植物科學(xué)繪圖基本方法植物繪圖是通過繪圖的方式，來表現(xiàn)植物的一些重要形態(tài)解剖特征的常用方法。通過繪圖，有助于對(duì)植物結(jié)構(gòu)及其特征的認(rèn)識(shí)和理解，是學(xué)習(xí)植物生物學(xué)必須掌握的技能，也是從事植物形態(tài)解剖以及分類學(xué)研究必備的常用技能之一。一、繪圖的基本要求為保證所繪制的植物圖示的形象與科學(xué)，應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：=1\*GB2⑴科學(xué)性和準(zhǔn)確性繪植物圖不同于一般的美術(shù)創(chuàng)作，它必須具有高度的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。這就要求我們必須認(rèn)真觀察要畫的對(duì)象(切片或標(biāo)本等)，學(xué)習(xí)與之有關(guān)的文字記載及描述，正確理解了各部分的特征，然后還要選出正常的典型材料，才能在繪圖時(shí)保證形態(tài)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性。=2\*GB2⑵點(diǎn)、線要清晰流暢線條要一筆畫出，粗細(xì)均勻、光滑清晰，接頭處無分叉和重線條痕跡，切忌重復(fù)描繪。植物圖一般用圓點(diǎn)襯陰，表示明暗和顏色的深淺，給予立體感。點(diǎn)要圓而整齊，大小均勻，根據(jù)需要靈活掌握疏密變化，不能用涂抹陰影的方法代替圓點(diǎn)。=3\*GB2⑶比例要正確繪圖是要安植物各器官、組織以及細(xì)胞等各部構(gòu)造原有比例繪出，繪放大的解剖圖或形態(tài)圖時(shí)，最好要注明放大的倍數(shù)，如15×40等，也可以用單位短線表示出長(zhǎng)度，如“└┘1cm”等(倍數(shù)一般以長(zhǎng)度的比例為準(zhǔn))。=4\*GB2⑷突出主要特征植物學(xué)繪圖中允許重點(diǎn)描繪植物的主要形態(tài)特征，而其他部分可僅繪出輪廓，以表示其完整性。=5\*GB2⑸圖紙及版面要保持整潔繪圖完成后，圖紙及版面要整潔清晰。=6\*GB2⑹準(zhǔn)確的標(biāo)注圖注一律用正楷書寫，應(yīng)盡量詳細(xì)，并要求用水平的直線引出，最好在圖的右側(cè)，必須整齊一致。作為實(shí)驗(yàn)報(bào)告，圖及圖注一律要求用鉛筆，通常用2H或3H鉛筆，不要用鋼筆、有色水筆或圓珠筆。實(shí)驗(yàn)題目寫在繪圖報(bào)告紙的上方，圖題和所用植物材料的名稱和部位寫在圖的下方。二、繪圖的一般步驟繪制植物圖常常要運(yùn)用多種測(cè)量、描繪的儀器用具，以達(dá)到描繪精確的目的。但對(duì)一個(gè)普通的植物學(xué)工作者或研究人員，只需要掌握最簡(jiǎn)單的繪圖技能，即用鉛筆直接繪圖。應(yīng)遵循以下步驟：=1\*GB2⑴構(gòu)圖根據(jù)所要表達(dá)植物材料的內(nèi)容要求，設(shè)計(jì)好所要繪制的各個(gè)部分各自所占位置，避免因畫面設(shè)計(jì)不合理造成排列的混亂與失衡，影響繪圖的質(zhì)量。=2\*GB2⑵先繪草圖再繪成圖用尖的軟鉛筆(HB)輕輕地在圖紙上勾畫出圖形輪廓的草圖，以便于修改。勾畫時(shí)，要注意對(duì)照觀察所畫輪廓大小是否與實(shí)物相符合。正式繪制時(shí)要用2H或3H的繪圖硬鉛筆，按順手的方向動(dòng)筆，描出與物體相吻合的線條。線條要均勻，最好一次成圖，不繪重線，以免模糊。=3\*GB2⑶概繪全圖細(xì)繪局部在繪植物的宏觀解剖圖時(shí)要先繪全形圖，后繪部分的解剖圖。邊解剖觀察，邊描繪作圖，嚴(yán)格地按一定次序解剖繪圖。因材料放置的時(shí)間越短，特征就越明顯，越不易遺漏。如繪花的外形圖后，取出各花瓣一次擺在玻璃板上，一一繪出；然后繪雄蕊與雌蕊的子房、花柱及柱頭等。注意：繪輪廓時(shí)可采用各種輔助方法。如比例尺、坐標(biāo)紙及實(shí)物測(cè)量等。如果繪的圖是要出版或發(fā)表的，則還需要用繪圖筆細(xì)致地描在硫酸紙上，或直接用電腦繪圖。實(shí)驗(yàn)二（1）

坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本制備【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本的組織分離技術(shù)；學(xué)習(xí)和掌握制備蛙類坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的方法；掌握刺激的種類及形式?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】蟾蜍或蛙【實(shí)驗(yàn)器材】普通剪刀、手術(shù)剪、眼科鑷（或尖頭無齒鑷）、金屬探針（解剖針）、玻璃分針、蛙板（或玻璃板）、蛙釘、細(xì)線、培養(yǎng)皿、滴管、鋅銅弓（或電子刺激器）、任氏液、食鹽、1%H2SO4濾紙?！緦?shí)驗(yàn)方法與步驟】本次實(shí)驗(yàn)首先由教師示教，然后同學(xué)三人一組（手術(shù)者一人、助手兩人）各任不同的手術(shù)職責(zé)進(jìn)行手術(shù)。破壞腦、脊髓取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈（勿用手搓）。左手握住蟾蜍，使其背部向上，用大拇指或食指使頭前俯（以頭顱后緣稍稍拱起為宜）。右手持探針由頭顱后緣的枕骨大孔處垂直刺入椎管（圖1-1）。然后將探針改向前刺入顱腔內(nèi)，左右攪動(dòng)探針2~3次，搗毀腦組織。如果探針在顱腔內(nèi)，應(yīng)有碰及顱底骨圖1-1搗毀蟾蜍脊髓的感覺。再將探針退回至枕骨大孔，使針尖轉(zhuǎn)向尾端，捻動(dòng)探針使其刺入椎管，搗毀脊髓。此時(shí)應(yīng)注意將脊柱保持平直。針進(jìn)入椎管的感覺是，進(jìn)針時(shí)有一定的阻力，而且隨著進(jìn)針蟾蜍出現(xiàn)下肢僵直或尿失禁現(xiàn)象。若腦和脊髓破壞完全，蟾蜍下頜呼吸運(yùn)動(dòng)消失，四肢完全松軟，失去一切反射活動(dòng)。此時(shí)可將探針反向捻動(dòng)，退出椎管。如蟾蜍仍有反射活動(dòng)，表示腦和脊髓破壞不徹底，應(yīng)重新破壞。剪除軀干上部、皮膚及內(nèi)臟

用左手捏住蟾蜍的脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窩處連同皮膚、腹肌、脊柱一并剪斷（圖1-2），然后左手握住蟾蜍的后肢，緊靠脊柱兩側(cè)將腹壁及內(nèi)臟剪去（注意避開坐骨神經(jīng)），并剪去肛門周圍的皮膚，留下脊柱和后肢（圖1-3）。圖1-2橫斷脊柱圖1-3剪除軀干上部及內(nèi)臟剝皮

一只手捏住脊柱的斷端（注意不要捏住脊柱兩側(cè)的神經(jīng)），另一只手捏住其皮膚的邊緣，向下剝?nèi)ト亢笾钠つw（圖1-4）。將標(biāo)本放在干凈的任氏液中。將手及使用過的探針、剪刀全部沖洗干凈。圖1-4剝?nèi)テつw分離兩腿

用鑷子取出標(biāo)本，左手捏住脊柱斷端，使標(biāo)本背面朝上，右手用粗剪刀剪去突出的骶骨（也可不進(jìn)行此步）。然后將脊柱腹側(cè)向上，左手的兩個(gè)手指捏住脊柱斷端的橫突，另一手指將兩后肢擔(dān)起，形成一個(gè)平面。此時(shí)用粗剪刀沿正中線將脊柱盆骨分為兩半（注意勿傷坐骨神經(jīng)）。將其中一半后肢標(biāo)本置于盛有任氏液中備用，另一半放在蛙板上進(jìn)行下列操作。辯認(rèn)蛙后肢的主要肌肉蛙類的坐骨神經(jīng)是由第7、8、9對(duì)脊神經(jīng)從相對(duì)應(yīng)的椎間孔穿出匯合而成，行走于脊柱的兩側(cè)，到尾端（肛門處）繞過坐骨聯(lián)合，到達(dá)后肢背側(cè)，行走于梨狀肌下的股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝內(nèi)，到達(dá)膝關(guān)節(jié)腘窩處有分支進(jìn)入腓腸肌。游離坐骨神經(jīng)和腓腸肌用蛙釘或左手的兩個(gè)手指將標(biāo)本繃直、固定。先在腹腔面用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng)，然后在標(biāo)本的背側(cè)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)與周邊的結(jié)締組織分離直到腘窩，但不要傷及神經(jīng)，其分支待以后用手術(shù)剪剪斷。同樣用玻璃分針將腓腸肌與其下的結(jié)締組織分離并在其跟腱處穿線、結(jié)扎。剪去其它不用的組織操作應(yīng)從脊柱向小腿方向進(jìn)行。剪去多余的脊柱和肌肉

將后肢標(biāo)本腹面向上，將坐骨神經(jīng)連同2~3節(jié)脊椎用粗剪刀從脊柱上剪下來。再將標(biāo)本背面向上，用鑷子輕輕提起脊椎，自上而下剪去支配腓腸肌以外的神經(jīng)分支，直至腘窩（圖1-5A），并搭放在腓腸肌上。沿膝關(guān)節(jié)剪去股骨周圍的肌肉，并將股骨刮凈，用粗剪刀剪去股骨上端的1/3（保留2/3），制成坐骨神經(jīng)-小腿的標(biāo)本。完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本

將脊椎和坐骨神經(jīng)從腓腸肌上取下，提起腓腸肌的結(jié)扎線剪斷跟腱。用粗剪剪去膝關(guān)節(jié)以下部位，便制成了坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本（圖1-5B）。檢驗(yàn)標(biāo)本

用沾有任氏液的鋅銅弓觸及一下（或電刺激刺激）坐骨神經(jīng)或用鑷子夾持坐骨神經(jīng)中樞端，如腓腸肌發(fā)生迅速而明顯的收縮，說明標(biāo)本的興奮性良好。標(biāo)本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中備用。然后再依次用熱玻棒、食鹽（或1%H2SO4濾紙）刺激坐骨神經(jīng)中樞端（或肌肉），觀察肌肉收縮有何變化。如果放上食鹽肌肉無動(dòng)靜，用任氏液將鹽沖洗掉，再觀察沖洗過程中肌肉收縮有何變化。圖1-5分離坐骨神經(jīng)（A）和坐骨神經(jīng)腓腸標(biāo)本（B）【注意事項(xiàng)】避免蟾蜍體表毒液和血液污染標(biāo)本，不可壓擠、損傷和用力牽拉標(biāo)本，不可用金屬器械觸碰神經(jīng)干。在操作過程中，應(yīng)給神經(jīng)和肌肉滴加任氏液，防止表面干燥，以免影響標(biāo)本的興奮性。標(biāo)本制成后須放在任氏液中浸泡數(shù)分鐘，使標(biāo)本興奮性穩(wěn)定，再開始實(shí)驗(yàn)效果會(huì)較好。熱玻棒的溫度應(yīng)防止過高，以免燙傷標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)二（2）蛙離體心臟灌流標(biāo)本的制備【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)蛙離體心臟灌流標(biāo)本的制備方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】蛙【實(shí)驗(yàn)器材】蛙類常用手術(shù)器械一套、玻璃分針、蛙板、蛙釘、蛙心插管、蛙心夾、試管夾、滴管燒杯、雙凹夾、萬能支架、細(xì)線、任氏液?！緦?shí)驗(yàn)方法與步驟】本次實(shí)驗(yàn)首先由教師示教，然后同學(xué)三人一組（手術(shù)者一人、助手兩人）各任不同的手術(shù)職責(zé)進(jìn)行手術(shù)。圖2-1插管進(jìn)入心室示意圖離體蛙心灌流標(biāo)本制備（斯氏蛙心插管法）：取蟾蜍一只，打開胸腔，暴露心臟。在主動(dòng)脈干下方穿雙線，一條在左主動(dòng)脈上端結(jié)扎作插管時(shí)牽引用；另一根在動(dòng)脈球上方打一活結(jié)備用（用以結(jié)扎和固定插管）。玻璃分針將心臟向前翻轉(zhuǎn)，在心臟背側(cè)找到靜脈竇，在靜脈竇以外的地方做一結(jié)扎（切忽扎住靜脈竇），以阻止血液繼續(xù)回流心臟（也可不進(jìn)行此操作）。左手提起左主動(dòng)脈上方的結(jié)扎線，右手持眼科剪在左主動(dòng)脈根部（動(dòng)脈球前端）沿向心方向剪一斜口，將盛有少許任氏液、大小適宜的蛙心插管由此開口處輕輕插入動(dòng)脈球。當(dāng)插管尖端到達(dá)動(dòng)脈球基部時(shí)，應(yīng)將插管稍向后退（因主動(dòng)脈內(nèi)有螺旋瓣會(huì)阻礙插管前進(jìn)），并將插管尾端稍向右主動(dòng)脈方向及腹側(cè)面傾斜，使插管尖端向動(dòng)脈球的背部后方及心尖方向推進(jìn)，在心室收縮時(shí)經(jīng)主動(dòng)脈瓣進(jìn)入心室（見圖2-1）。注意插管不可插得過深，插管的斜面應(yīng)朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。若插管中任氏液面隨心室的收縮而上下波動(dòng)，則表明插管進(jìn)入心室，可將動(dòng)脈球上已準(zhǔn)備好的松結(jié)扎緊，并固定于插管側(cè)面的鉤上，以免蛙心插管滑出心室。剪斷結(jié)扎線上方的血管，輕輕提起插管和心臟，在左右肺靜脈和前后腔靜脈下引一細(xì)線并結(jié)扎（參考圖2-1），于結(jié)扎線外側(cè)剪去所有相連的組織則得到離體蛙心。此步操作中應(yīng)注意靜脈竇不受損傷并與心臟連結(jié)良好。最后，用任氏液反復(fù)換洗插管內(nèi)的任氏液，直到插管中無殘留血液為止。此時(shí)，離體蛙心標(biāo)本制備成功，可供實(shí)驗(yàn)。【注意事項(xiàng)】制備離體心臟標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇。蛙心夾應(yīng)在心室舒張期一次性夾住心尖，避免因夾傷心臟而導(dǎo)致漏液。實(shí)驗(yàn)三植物細(xì)胞死活的鑒定和組織滲透勢(shì)的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦觅|(zhì)壁分離現(xiàn)象驗(yàn)證植物細(xì)胞的死活及測(cè)定植物組織的滲透勢(shì)；理解植物組織水勢(shì)的組成及發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象的條件。二、實(shí)驗(yàn)原理植物活細(xì)胞是一個(gè)滲透系統(tǒng)，當(dāng)其處于高滲溶液中時(shí)，細(xì)胞失水，原生質(zhì)體體積縮小，發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象。若將發(fā)生質(zhì)壁分離的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至低滲溶液中，細(xì)胞會(huì)重新吸水，原生質(zhì)體膨脹，質(zhì)壁分離復(fù)原。由于死細(xì)胞的質(zhì)膜失去半滲透性，不能發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原現(xiàn)象。因此質(zhì)壁分離法可用于鑒定植物細(xì)胞的死活。利用植物活細(xì)胞的質(zhì)壁分離及其復(fù)原現(xiàn)象，可測(cè)定植物組織的滲透勢(shì)。當(dāng)植物細(xì)胞或組織放在外界等滲溶液中時(shí)，組織與外界溶液的水分交換達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，植物細(xì)胞處于初始質(zhì)壁分離狀態(tài)，細(xì)胞壓力勢(shì)為零，溶液的滲透勢(shì)即等于所測(cè)植物的滲透勢(shì)(壓力勢(shì)為零的水勢(shì))。用一系列梯度濃度溶液浸泡組織，并觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象。能引起植物組織細(xì)胞發(fā)生初始質(zhì)壁分離的溶液濃度或介于發(fā)生質(zhì)壁分離的溶液和相鄰沒有發(fā)生質(zhì)壁分離的溶液之間的濃度，即為等滲濃度。根據(jù)公式計(jì)算植物組織的滲透勢(shì)。三、實(shí)驗(yàn)器材和試劑1、植物材料洋蔥鱗莖或蠶豆葉2、實(shí)驗(yàn)器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、解剖針、刀片、酒精燈、濾紙、滴管、移液管、9cm培養(yǎng)皿3.實(shí)驗(yàn)試劑1mol/L蔗糖溶液四、實(shí)驗(yàn)步驟1、質(zhì)壁分離及其復(fù)原現(xiàn)象觀察1).撕取一小塊洋蔥鱗片的內(nèi)表皮，放在滴有1～2滴蒸餾水的載玻片，蓋上蓋玻片。顯微鏡下觀察植物細(xì)胞的狀態(tài)，并繪圖表示之。2).在蓋玻片的一端滴加2～3滴1mol/L的蔗糖溶液，同時(shí)在另一端用濾紙吸去水分，使植物材料浸入蔗糖溶液中，在顯微鏡下連續(xù)觀察細(xì)胞有何變化，解釋變化原因，并繪圖表示細(xì)胞此時(shí)的狀態(tài)。3).按照上述步驟，在蓋玻片的一端滴加蒸餾水，使材料重新浸入蒸餾水中，觀察細(xì)胞的變化，并解釋變化原因。4).另取洋蔥鱗片內(nèi)表皮一小塊，放在有數(shù)滴蒸餾水的載玻片上，酒精燈上小心加熱2～3min(或用酒精浸泡)將植物細(xì)胞殺死，冷卻后在載玻片上滴加1mol/L蔗糖液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察植物細(xì)胞是否有質(zhì)壁分離現(xiàn)象出現(xiàn)，并解釋原因。2、植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定1).配制0.1～0.8mol/L8個(gè)梯度的蔗糖溶液各10ml，分別盛于小培養(yǎng)皿中，并加上蓋子。2).從部位相近的鱗片撕取大小相近(約幾個(gè)平方毫米)的內(nèi)表皮，從濃度高的蔗糖溶液開始，依次每隔3min投放內(nèi)表皮到一種濃度的溶液中(以便有充足的時(shí)間觀察，并使組織在不同溶液中處理時(shí)間一致)，并使之完全浸沒，室溫下放置30min。3).按濃度由高到低依次取出處理過的表皮，放在有1～2相應(yīng)濃度蔗糖溶液的載玻片，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察觀察質(zhì)壁分離的情況(每次鏡檢約100個(gè)細(xì)胞)，并記錄不同濃度溶液處理下質(zhì)壁分離的程度。4).依據(jù)不同溶液中植物細(xì)胞質(zhì)壁分離的程度，確定一個(gè)引起50％的細(xì)胞角隅上出現(xiàn)質(zhì)壁分離(作為初始質(zhì)壁分離)的溶液濃度，或確定引起細(xì)胞質(zhì)壁分離最低濃度下不引起質(zhì)壁分離最高濃度的平均值，作為等滲濃度。用新的溶液和植物材料進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)過程，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。5).依據(jù)所確定的等滲濃度，根據(jù)下式計(jì)算該植物組織的平均滲透勢(shì)。計(jì)算公式：平均滲透勢(shì)＝解離系數(shù)i×氣體常數(shù)×絕對(duì)溫度T×等滲濃度c。平均滲透勢(shì)φs，以bar表示；蔗糖解離系數(shù)i為1；氣體常數(shù)R為0.083L.bar/mol.k；絕對(duì)溫度T＝273℃等滲濃度c，mol/L。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、計(jì)算實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的植物組織水勢(shì)2、不同濃度的NaCl可否用于測(cè)定植物組織的滲透勢(shì)？實(shí)驗(yàn)四兔的麻醉及局部解剖【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆談?dòng)物麻醉的方法；掌握解剖哺乳動(dòng)物的基本技術(shù)；掌握手術(shù)器械的使用方法；掌握組織切開、止血等基本操作技術(shù)?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】家兔【實(shí)驗(yàn)器材】哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械一套（包括手術(shù)刀、粗剪、手術(shù)剪、眼科剪、止血鉗、鑷子等）、兔手術(shù)臺(tái)、注射器、20%氨基甲酸乙酯溶液、1000U/ml肝素溶液?！緦?shí)驗(yàn)方法與步驟】本次實(shí)驗(yàn)首先由教師示教，然后同學(xué)三人一組（手術(shù)者一人、助手兩人）各任不同的手術(shù)職責(zé)進(jìn)行手術(shù)。動(dòng)物的麻醉將家兔稱重，按5ml/kg的劑量于耳緣靜脈注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉。然后將家兔背位（仰臥）固定于兔手術(shù)臺(tái)上。局部解剖在進(jìn)行局部解剖之前，先觀察兔子的大體外形，區(qū)分頭、頸、軀干、尾和四肢五部分。頸部神經(jīng)、血管和氣管的暴露與分離

兔的頸部神經(jīng)、血管、氣管的解剖位置關(guān)系清晰、分支較少。更為突出的是，兔的減（降）壓神經(jīng)單獨(dú)為一支，與迷走神經(jīng)、交感神經(jīng)、頸動(dòng)脈伴行（圖3-1），是進(jìn)行心血管活動(dòng)及內(nèi)臟神經(jīng)功能研究的理想的實(shí)驗(yàn)材料。圖3-1家兔的頸部分離①分離氣管剪去頸前部兔毛，用手術(shù)刀在喉頭下緣沿頸前正中線做一5~7cm長(zhǎng)的切口，用止血鉗縱向分離皮下組織，于正中線分開頸部的胸骨舌骨肌和胸鎖乳突肌，暴露氣管。用玻璃分針或手術(shù)刀柄將覆蓋在氣管表面的筋膜除去，使氣管完全暴露。用彎頭止血鉗或鑷子在氣管下穿一根線備用。②分離頸總動(dòng)脈位于氣管兩側(cè)，分離覆蓋在氣管上的胸骨舌骨肌和側(cè)面斜行的胸鎖乳突肌，深處可看到頸動(dòng)脈鞘。分離時(shí)，可用左手拇指和食指捏住已分離的氣管一側(cè)的胸骨舌骨肌，再稍向外翻，即可將頸總動(dòng)脈以及神經(jīng)束翻于食指上。用玻璃解剖針或止血鉗輕輕分離動(dòng)脈外側(cè)的結(jié)締組織，仔細(xì)分離鞘膜即可看到搏動(dòng)的頸總動(dòng)脈，在其下穿線備用。③神經(jīng)

于頸總動(dòng)脈旁有一束神經(jīng)與其伴行。小心分離頸總動(dòng)脈的鞘膜后仔細(xì)辯認(rèn)該神經(jīng)束中的三條神經(jīng)：其中最粗的是迷走神經(jīng)，最細(xì)的是減（降）壓神經(jīng)，交感神經(jīng)粗細(xì)介于二者之間。在頸部中央段，迷走神經(jīng)位于最外側(cè)，減（降）壓神經(jīng)靠近頸總動(dòng)脈，交感神經(jīng)位于二者之間。減（降）壓神經(jīng)細(xì)如毛發(fā)，常與交感神經(jīng)緊貼在一起。用玻璃分針將所需要的神經(jīng)分離出1~2cm，穿線備用。氣管插管

在暴露的氣管上用手術(shù)剪于喉頭下2~3cm處的兩軟骨環(huán)之間，橫向切開氣管前壁約1/3的氣管直徑，再于切口上緣向頭側(cè)剪開約0.5cm長(zhǎng)的縱向切口，整個(gè)切口呈“⊥”

。若氣管內(nèi)有分泌物或血液要用小干棉球拭凈。然后一手提起氣管下面的縛線，一手將一適當(dāng)口徑的“Y”氣管插管斜口朝下，由切口向下插入氣管腔內(nèi)，再轉(zhuǎn)動(dòng)插管使其斜口面朝上，用線縛結(jié)于套管的分叉處，加以固定（圖3-2）。圖3-2氣管插管示意圖【注意事項(xiàng)】麻醉劑劑量不能過量，注射不宜過快。神經(jīng)、肌肉和血管都是比較嬌嫩的組織，在分離過程中要仔細(xì)、耐心、輕柔。分離時(shí)應(yīng)掌握先神經(jīng)，后血管；先細(xì)后粗的原則。分離的方向一般要求與神經(jīng)、血管的走向平行，才能避免損傷組織。實(shí)驗(yàn)五植物體內(nèi)幾種呼吸酶的鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理植物的呼吸其實(shí)質(zhì)是在植物體內(nèi)進(jìn)行的一系列酶促氧化還原反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)包括鑒定幾種呼吸酶的方法。這些呼吸酶中有的參加線粒體呼吸，有的存在于細(xì)胞質(zhì)中，不參加線粒體呼吸。這些酶鑒定原理如下：1．脫氫酶以亞甲藍(lán)作氫受體。氧化態(tài)的亞甲藍(lán)，接受底物脫下的氫而還原為無色的還原態(tài)亞甲藍(lán)。2．細(xì)胞色素氧化酶在植物體內(nèi)，細(xì)胞色素氧化酶能催化細(xì)胞色素c的氧化。通常利用該酶能催化二甲基對(duì)苯二胺和α—萘酚作用，生成藍(lán)色物質(zhì)的反應(yīng)來鑒定該酶的存在。3．多酚氧化酶該酶催化酚及其類似化合物被分子態(tài)氧氧化為醌類化合物的反應(yīng)。氧化態(tài)的醌可自動(dòng)氧化成棕黑色的化合物。本實(shí)驗(yàn)用鄰苯二酚為底物檢驗(yàn)多酚氧化酶的存在。4．過氧化物酶該酶以H2O2為氧化劑，催化H2O2氧化另一種底物。本實(shí)驗(yàn)以聯(lián)苯胺為供氫體，反應(yīng)后生成藍(lán)色物質(zhì)。5．過氧化氫酶該酶催化H2O2分解成水和氧，O2的產(chǎn)生標(biāo)志著該酶的存在。二、實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備1、植物材料：用水浸泡24h的豌豆種子；馬鈴薯塊莖。2、設(shè)備：試管及試管架；；燒杯；漏斗；量筒；恒溫水浴鍋；解剖刀；吸量管。3、試劑：0.01％甲烯藍(lán)溶液；pH7.0的磷酸緩沖液（0.2mol配法：NaH2.H2O10.7g/lNaH2.2H2O12.17g/lNa2H.2H2O21.71g/lNa2H.12H2O43.70g/l1％鄰苯二酚乙醇溶液1％α－萘酚乙醇溶液1％鹽酸二甲基－對(duì)－苯二胺溶液(冰箱貯存，一周內(nèi)使用)1％聯(lián)苯胺乙醇溶液3％H2O2。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、脫氫酶取10g用水浸泡24h的豌豆種子，剝?nèi)シN皮，分開兩片子葉，分別放入兩支試管內(nèi)。向其中1支試管內(nèi)加入少量蒸餾水，在沸水浴中加熱5min，倒出水。然后，分別向兩支試管中加入5ml甲烯藍(lán)溶液，染色10min。染色結(jié)束后，倒出甲烯藍(lán)溶液，用水沖洗，此的種子表面應(yīng)呈藍(lán)色。然后加水至接近管口，將試管放入37℃將表面藍(lán)色消失的種子倒出，暴露于空氣中，現(xiàn)察種子表面的變化，并解釋之。2、細(xì)胞色素氧化酶、多酚氧化酶和過氧化物酶1)．酶液的制備取l0g洗凈去皮的馬鈴薯塊莖，切碎，放入研缽中，加少量磷酸緩沖液，低溫下研磨成勻漿。用緩沖液將勻漿洗入小燒杯中，加磷酸緩沖液至25ml，在冰浴中浸提20min，用脫脂棉過濾。收集濾液15ml，分成兩份，一份于沸水浴中煮5min，另一份置于冰浴中。2)．酶的鑒定取6支試管分成兩組，依次編號(hào)為l、2、3。向其中一組試管內(nèi)加入煮過的酶液各2ml；向另一組試管內(nèi)加入置于冰浴中的酶液各2ml。然后向1號(hào)試管內(nèi)加入1ml二甲基－對(duì)－苯二胺和1mlα－萘酚，向2號(hào)試管內(nèi)加入2ml鄰苯二酚；向3號(hào)試管內(nèi)加入1ml聯(lián)苯胺和1mlH2O2。將試管內(nèi)的底物與酶液混勻，于37℃3、過氧化氫酶將馬鈴薯塊莖切成約5mm3的小塊。取兩支試管，每支放入3塊馬鈴薯小塊。其個(gè)1支加入少量的水，將薯塊浸沒，于沸水浴中加熱5min，然后將水倒出。分別向兩支試管內(nèi)加入5ml3％H2O2，觀察兩種馬鈴薯小塊周圍有無氣泡產(chǎn)生。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告將所鑒定的5種呼吸酶、底物(分成氧化劑和還原劑兩類)和反應(yīng)的結(jié)果列表表示。酶的名稱底物實(shí)驗(yàn)結(jié)果加熱不加熱注意：1：檢測(cè)過氧化物酶時(shí)，當(dāng)樣品顯出籃色時(shí)，應(yīng)立即取出觀察，否則藍(lán)色會(huì)轉(zhuǎn)變成棕色復(fù)合物，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)六兔頸部動(dòng)脈、輸尿管插管【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆胀妙i部動(dòng)脈、輸尿管插管的方法【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】家兔【實(shí)驗(yàn)器材】哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械一套（包括手術(shù)刀、粗剪、手術(shù)剪、眼科剪、止血鉗、鑷子等）、兔手術(shù)臺(tái)、動(dòng)脈夾、動(dòng)脈套管、注射器、20%氨基甲酸乙酯溶液、1000U/ml肝素溶液?！緦?shí)驗(yàn)方法與步驟】本次實(shí)驗(yàn)首先由教師示教，然后同學(xué)三人一組（手術(shù)者一人、助手兩人）各任不同的手術(shù)職責(zé)進(jìn)行手術(shù)。動(dòng)物的麻醉將家兔稱重，按5ml/kg的劑量于耳緣靜脈注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉。然后將家兔背位（仰臥）固定于兔手術(shù)臺(tái)上。頸動(dòng)脈插管

頸部剪毛，沿頸部正中線切開皮膚5~7cm，用止血鉗鈍性分離皮下組織及淺層肌肉，暴露和分離氣管。分離左、右兩側(cè)頸總動(dòng)脈。事先準(zhǔn)備好插管導(dǎo)管，取適當(dāng)長(zhǎng)度的塑料管或硅膠管，插入端剪一斜面，另一端連接于裝有抗凝溶液（或生理鹽水）的血壓換能器或輸液裝置上，讓導(dǎo)管內(nèi)充滿溶液。給動(dòng)物靜脈注射肝素（500U/kg），使全身肝素化，分離出一段頸總動(dòng)脈，在其下穿兩根線備用。將動(dòng)脈遠(yuǎn)心端的線結(jié)扎，用動(dòng)脈夾夾住近心端，兩端間的距離盡可能長(zhǎng)。用眼科剪在靠遠(yuǎn)心端結(jié)扎線處的動(dòng)脈上呈45o度剪一小口，約為管徑的1/3或1/2，向心臟方向插入動(dòng)脈導(dǎo)管，用近心端的備用線，在插入口處將導(dǎo)管與血管結(jié)扎在一起，其松緊以開放動(dòng)脈夾后不致出血為度。小心緩慢放開動(dòng)脈夾，如有出血，即將線再扎緊些，但仍以導(dǎo)管能抽動(dòng)為宜。將導(dǎo)管再送入2~3cm并結(jié)扎更緊些，使導(dǎo)管不致脫落。用遠(yuǎn)心處的備用線圍繞導(dǎo)管打結(jié)、固定。操作完畢后將血管放回原處（圖4-1）。圖4-1頸總動(dòng)脈插管示意圖輸尿管插管恥骨聯(lián)合上緣向上沿正中線作4cm長(zhǎng)皮膚切口，再沿腹白線剪開腹壁及腹膜（勿傷