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實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室股則第1頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
(2課時(shí))1每個(gè)同學(xué)都應(yīng)該自覺遵守課堂紀(jì)律,維護(hù)課堂秩序,不遲到,不早退,不大聲談笑。2實(shí)驗(yàn)前必須認(rèn)真預(yù)習(xí),熟悉本次實(shí)驗(yàn)的目的、原理、操作步驟,懂得每一操作步驟的意義和了解所用儀器的使用方法,否則不能開始實(shí)驗(yàn)。3實(shí)驗(yàn)過程中要聽從教員的指導(dǎo),嚴(yán)肅認(rèn)真地按操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并把實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)及時(shí)、如實(shí)記錄在實(shí)驗(yàn)記錄本上,文字要簡(jiǎn)練、準(zhǔn)確。完成實(shí)驗(yàn)后經(jīng)教師檢查簽字同意,方可離開實(shí)驗(yàn)實(shí)。
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4實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)隨時(shí)保持整潔,儀器、藥品擺放整齊。公用試劑用畢,應(yīng)立即蓋嚴(yán)放回原處。勿使試劑、藥品灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地上。實(shí)驗(yàn)完畢,儀器洗凈放好,將實(shí)驗(yàn)臺(tái)面抹拭干凈,才能離開實(shí)驗(yàn)室。5使用儀器、藥品、試劑和各種物品必須注意節(jié)約。洗滌和使用儀器時(shí),應(yīng)小心仔細(xì),防止損壞儀器。使用貴重精密儀器時(shí),應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,發(fā)現(xiàn)故障須立即報(bào)告教師,不得擅自動(dòng)手檢修。
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6實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙!注意水電安全,離開實(shí)驗(yàn)室前,必須關(guān)好水龍頭,拉下電閘,嚴(yán)防發(fā)生事故!7廢液倒入專門的廢液桶,固體廢物和帶殘?jiān)膹U物不得倒入水槽或到處亂扔。8儀器損壞時(shí),應(yīng)如實(shí)向教師報(bào)告,并填寫損壞儀器登記表,然后補(bǔ)領(lǐng)。
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9實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一切物品,未經(jīng)本室負(fù)責(zé)教師批準(zhǔn),嚴(yán)禁攜出室外,借物必須辦理登記手續(xù)。10每次實(shí)驗(yàn)課由班長(zhǎng)負(fù)責(zé)安排值日生。值日生的職責(zé)是負(fù)責(zé)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)室的安全、衛(wèi)生和一切服務(wù)性的工作。
第5頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作
(2課時(shí))一.玻璃儀器的洗滌在生化實(shí)驗(yàn)中,玻璃儀器潔凈與否,是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔,無水珠附著在玻壁上。㈠常用的洗滌方法:1.一般儀器,如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗,最后用少量蒸餾水沖洗2~3次,倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。
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2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等,不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時(shí)用自來水多次沖洗,細(xì)心檢查潔凈程度,根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。(1)如不掛水珠,用蒸餾水沖洗、干燥,方法同上;(2)如掛水珠,則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡4~6小時(shí),然后按上法順序操作,即先用自來水沖洗,再用蒸餾水沖洗,最后干燥。第7頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六
3.粘附有血漿的刻度吸量管等,有三種洗滌方法:(1)先用45%尿素溶液浸泡,使血漿蛋白溶解,然后用自來水沖洗;(2)也可用1%氨水浸泡,使血漿溶解,然后再依次用1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗;(3)以上二法如達(dá)不到清潔要求,可浸泡于重鉻酸鉀洗液4~6小時(shí),再用大量自來水沖洗,最后用蒸餾水沖洗2~3次。
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4.新購(gòu)置的玻璃儀器,應(yīng)先置于1~2%稀鹽酸溶液中浸泡2~6小時(shí),除去附著的游離堿,再用自來水沖洗干凈,最后用蒸餾水沖洗2~3次。5.凡用過的玻璃儀器,均應(yīng)立即洗滌,久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時(shí)洗滌,先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中,待后按常規(guī)處理。
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㈡使用重鉻酸鉀洗液(以下簡(jiǎn)稱洗液)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn):1.需用洗液浸泡的容器,在浸泡前應(yīng)盡量瀝干。否則會(huì)因洗液被稀釋而降低洗液的氧化力。2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等離子可與洗液發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成不溶性化合物沉積在容器壁上。因此,凡接觸過上述離子的容器,應(yīng)先除去上述離子(可用稀硝酸或5~10%EDTA鈉清除)。3.油類、有機(jī)溶劑等有機(jī)化合物可使洗液還原失效。因此,容器壁上附有大量油類、有機(jī)物時(shí),應(yīng)先除去。
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4.洗液的酸性和氧化性很強(qiáng),使用時(shí)應(yīng)格外注意,千萬不要滴落在皮膚或衣物上,以免灼傷或燒壞。5.洗液顏色由深棕色變?yōu)榫G色時(shí),說明洗液已經(jīng)失效,應(yīng)停止使用,更換新液。因重鉻酸變成硫酸鉻后不再具有氧化性。
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重鉻酸鉀洗液的配制:
取重鉻酸鉀20g溶于20ml蒸餾水中,加熱至沸。冷卻后再將200ml濃硫酸慢慢加入,邊加邊攪拌。注意:此時(shí)可產(chǎn)生高熱。為防止容器破裂,應(yīng)選用耐酸搪瓷缸或耐高溫的玻璃器皿,切忌用量筒及試劑瓶等配制。為防止洗液吸收空氣中的水分而被稀釋變質(zhì),洗液應(yīng)貯存于帶蓋的容器中。當(dāng)清潔效力降低時(shí),再加入少量重鉻酸鉀及濃硫酸就可繼續(xù)使用。
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二.吸量管的使用吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。㈠吸量管:生化實(shí)驗(yàn)中常用的有三種,最常用的是刻度吸量管。1.刻度吸量管:⑴刻度吸量管的種類:第13頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六
①按容量規(guī)格來分,有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移取量的0.1~1%。通常將管身標(biāo)明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此,10ml的吸量管一格代表0.1ml;1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推。第14頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六
②按“零”點(diǎn)位置來分,有“O”點(diǎn)在吸量管上端的(即讀數(shù)從上而下逐漸增大),也有“O”點(diǎn)在吸量管下端的(讀數(shù)從下而上逐漸增大)。兩種標(biāo)示方法,在使用時(shí)各有方便之處。③按刻度方法來分,刻度吸量管也有兩種,一種是刻度刻到尖端的,將液體放出時(shí),應(yīng)吹出殘留在吸量管尖端的少量液體(我實(shí)驗(yàn)室的刻度吸量管全部是這一種),另一種是刻度不刻到尖端的。
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⑵刻度吸量管的正確使用方法:用右手拇指和中指夾住管身,將吸量管的尖端伸入試液深處,左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時(shí),迅速用右手食指按住吸量管的上口,以控制試液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直,使右眼與刻度等高,稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)吸量管,使試液面緩慢降落,至管內(nèi)試液彎月面的最低點(diǎn)與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中,讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊,松開食指讓液體流出。液體流完后再等15秒鐘,捻動(dòng)一下吸量管后移去(如需吹的吸量管,則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去)。第16頁,共22頁,2023年,2月20日,星期六
⑶使用刻度吸量管的注意事項(xiàng):①選擇適當(dāng)規(guī)格的吸量管:吸量管的最大容積應(yīng)等于或略大于所需容積(ml數(shù))。②仔細(xì)看清吸量管的刻度情況:刻度是否包括吸量管尖端的液體?讀數(shù)方向是從上而下,還是從下而上?③拿吸量管時(shí),刻度一定要面向自己,以便讀數(shù)。
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④吸取試劑時(shí)應(yīng)注意三點(diǎn):一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體,二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進(jìn)入洗耳球),三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。⑤按吸量管上口時(shí)應(yīng)該用食指,不能用拇指。
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⑥吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血清等)時(shí),除選用合適的吸管(奧氏管)外,應(yīng)注意拭凈管尖附著的液體,盡量減慢放液速度(用食指壓力控制),待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。⑦使用的吸量管應(yīng)干凈、干燥無水。如急用而又有水時(shí),可用少量欲取試劑沖洗3次,以免試劑被稀釋。
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2.移液吸量管:也有兩種,常見的一種是吸量管的上端只有一個(gè)刻度,另一種是除了在吸量管上端有刻度外,在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種,在使用時(shí)將量取的液體放出后,只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可,不得吹出尖端的液體。3.奧氏吸量管:準(zhǔn)確度最高,使用時(shí)必需吹出留在尖端的液體。
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㈡定量吸(移)液器(微量加樣器):定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前,因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價(jià)格差異十分懸殊。1.定量吸液器的優(yōu)點(diǎn):使用方便,取、加樣迅速,計(jì)量準(zhǔn)確,不易破損,能吸取多種樣品(只換吸嘴即可)。
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