王金發(fā)《細(xì)胞生物學(xué)》課件第章minimizer

CHAPTER2

ExperimentalApproachesforStudyingCells1百度文庫(kù)不能分享？不知道為什么百度文庫(kù)不能分享，那就不上傳了。2OUTLINE2.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.2TECHNIQUESOFCYTOCHEMISTRY2.3TECHNIQUESOFCELLSORTING2.4CELLENGINEERING2.5TECHNIQUESOFISOLATION2.6METHODSOFMOLECULARBIOLOGY3普通光學(xué)顯微鏡42.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.1.1TheLightMicroscope

Resolvingpower,R

顯微鏡的數(shù)值孔徑

(numericaperture，NA)

放大率(magnification,M)5波長(zhǎng)與分辨率6

2.1.2光鏡標(biāo)本制備技術(shù)細(xì)胞染色技術(shù)

組織固定和切片技術(shù)

細(xì)胞化學(xué)技術(shù)利用Feulgen反應(yīng)可特異性檢測(cè)細(xì)胞中DNA。2.1.3常用光學(xué)顯微鏡

◆普通雙筒顯微鏡

(binoularmicroscope)

◆熒光顯微鏡

(fluorescencemicroscope)

◆相差顯微鏡

(phasecontrastmicroscope)7

2.1.3常用光學(xué)顯微鏡◆倒置顯微鏡■物鏡與照明系統(tǒng)的位置顛倒。■集光器與載物臺(tái)之間的工作距離提高,可以放置培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等容器,直接對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行照明和觀察。8倒置顯微鏡9

2.2電子顯微鏡

(Electronmicroscope)

1932年德國(guó)學(xué)者M(jìn)axKnolls和ErnstRuska用波長(zhǎng)比光短得多的電子作光源,發(fā)明了第一臺(tái)電子顯微鏡，大大提高了顯微鏡的分辨率，開拓了超微世界。102.2.1電子顯微鏡概述電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)

電子顯微鏡基本結(jié)構(gòu)由三大部分組成:●電子光學(xué)系統(tǒng)由照明系統(tǒng)、標(biāo)本室、成像系統(tǒng)、觀察窗和記錄用的照相機(jī)等組成；●真空系統(tǒng)是保持電鏡的真空度；●電子學(xué)系統(tǒng)即供電系統(tǒng)，需要高壓穩(wěn)壓。11電子染色

標(biāo)本對(duì)電子的散射能力取決于其組成元素的原子序數(shù),原子序數(shù)越高,散射的電子越多,反差就越大。生物分子是由一些原子序數(shù)很低的輕元素(氫、氧、碳、氮等)組成的,它們散射電子的能力很弱,在電鏡下幾乎不存在明暗反差。為使生物樣品加大反差,就要進(jìn)行染色,即用重金屬增加電子散射能力,稱為電子染色。12電鏡樣品的制備132.2.2TransmissionElectronMicroscope◆冰凍蝕刻術(shù)(freeze-etching)是專門觀察樣品外表面的投影復(fù)型術(shù)。14冰凍蝕刻技術(shù)15

2.2.3ScanningElectronMicroscope

原理：

目前一般掃描電鏡的分辨率約60～100?(6～10nm)。2.2.4ScanningTunnelingMicroscope,STM◆基本原理2.2.4掃描隧道顯微鏡

掃描隧道顯微術(shù)在生命科學(xué)中的應(yīng)用

◆DNA結(jié)構(gòu)研究；

◆膠原、纖維和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究；

◆細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的研究。16掃描隧道顯微鏡工作原理17掃描隧道電鏡下的DNA雙螺旋18

2.3TECHNIQUESOF

CYTOCHEMISTRY

2.3.1酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)就是通過酶的特異細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)來顯示酶在細(xì)胞內(nèi)的定位。2.3.2免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

免疫熒光技術(shù)

免疫電鏡技術(shù)192.4飼Radi從oaut副ogra悠phy放射自顯諸影的原理卵是利用放閘射性同位計(jì)素所發(fā)射委出來的帶指電離子(血α或β離猴子)作用旅于感光材依料的鹵化纖銀晶體,訂從而產(chǎn)生股潛影。這驢種潛影可貌用顯影液抗顯示,成蝴為可見的史“像”。燈因此,它麗是利用鹵鎮(zhèn)化銀乳膠鉛現(xiàn)象,檢帶查和測(cè)量著放射性的肥一種方法誼。20放射自顯諒影術(shù)212.5喜分析身細(xì)胞學(xué)衰技術(shù)2.5討.1撿流式飼細(xì)胞術(shù)(Fl蕩ow隸cyt茄ome斬try羞)流式細(xì)鉤胞器(Fl民ow伯cyt工ome境ter遠(yuǎn),FC松M)22流式細(xì)留胞術(shù)23細(xì)胞分選24細(xì)胞標(biāo)覽記25染色體襪分選26染色體蹲標(biāo)記272.6北細(xì)胞豎工程技黎術(shù)

(租Cel全lE異ngi紛nee雕rin傅g)2.6升.1保細(xì)胞培腥養(yǎng)體外細(xì)胞北培養(yǎng)的條盲件無血清饅培養(yǎng)∶環(huán)境因素∶無菌環(huán)恒境、合葡適的溫峽度、一潤(rùn)定的滲晶透壓和氣殺體環(huán)境潮、O2和CO2。后者對(duì)擾于維持細(xì)胞濱培養(yǎng)液毀的酸堿畜度十分倆重要。代謝物哪和廢物秧排除：28Knoc未kout慮Mic歪eThe蔬te富chn企iqu襲eu沃sed芳to歡ge還ner篩ate寨kn侄ock污out朋mi米ce余was效de網(wǎng)vel臣o(jì)pe賴di芹nt浩he稿lat感e1嗚980葉sb朽yM融arl登oC以ape劣cch鏟ia符tt家he素Uni禍ver拒sit敵yo潤(rùn)fU齒tah嫌.實(shí)驗(yàn)分碎三步∶◆構(gòu)建譜重組體瓜；◆轉(zhuǎn)基因啟敲除；◆篩選攀。29基因敲環(huán)除30基因敲除餓示意圖（1）31基因敲除唇示意圖（2）32基因敲除植原理33Kno修cko喝ut呈Mic拐e34未來的生諒物技術(shù)35用這個(gè)要榜好很多的我們要釣學(xué)習(xí)，碌就得想鬼方法！36謝謝觀看/歡迎下載BY饑FAI錄TH笛IM薦EAN帆A他VIS駐ION浮OF戰(zhàn)GO摔OD諸ONE咽CH憤ERI霧SHE成SA友ND僑THE宿EN形THU址SIA鹽SM六TH