半仿生提取技術

半仿生提取技術第一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五主要內(nèi)容概述半仿生中藥篩選系統(tǒng)半仿生技術的操作流程在中藥提取中的應用實例現(xiàn)狀、缺點和展望12345第二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第一節(jié)概述SBE法提出的背景： 目前的提取技術多數(shù)強調(diào)單一組分，而每一種藥材成分復雜，中藥的丸劑,是以原生藥材經(jīng)口服進人到胃、腸，歷經(jīng)胃液、胃消化酶、腸液,腸消化酶及其有節(jié)律的人體易接受的綜合活性混合物。被人體消化、吸收。機體吸收了有效成分,并證實很有效果。多年來，中藥復方提取工藝研究有效成分思維方式的影響下進展緩慢。張兆旺等基于中藥復方成分的提取中存在的主要問題提出了制備中藥口服制劑的新工藝—半仿生提取法。第三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五

半仿生提取法(SBE法)是從生物藥劑學的角度將整體藥物研究法與分子藥物研究法相結合，模仿口服藥物在胃腸道的轉運過程，采用選定pH值的酸性水和堿性水，依次連續(xù)提取得到含指標成分高的活性混合物的中藥和方劑的藥效物質(zhì)提取新技術。即在中藥提取中堅持了“有成分論，不唯成分論，重在機體的藥效學反應?！?/p>

一、半仿生技術的概念第四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五有研究以阿魏酸、苦參堿、苦參總堿及干浸膏為指標，采用SBE和水提取法（WE法）對當歸苦參丸的提取工藝進行比較研究，經(jīng)4個指標綜合評價發(fā)現(xiàn)，SBE法優(yōu)于WE法。但目前半仿生提取法仍沿襲高溫煎煮方式，容易影響許多有效活性成分，降低藥效。因此，有學者建議將提取溫度改為近人體溫度，在提取液中加入擬人體消化酶活性物質(zhì)，使提取過程更接近于藥物在人體胃腸道的轉運吸收過程，更符合辨證施治的中醫(yī)藥理論。第五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五二、半仿生技術的特點分析思維與系統(tǒng)思維的統(tǒng)一單體成分與活性混合成分的統(tǒng)一中醫(yī)治病特點與口服給藥特點的統(tǒng)一以某種化學成分為指標并考慮到綜合成分的作用既可以充分發(fā)揮混合物成分的綜合作用特點，又有利于用單體成分控制制劑質(zhì)量從生物藥劑學角度模擬口服給藥及藥物經(jīng)胃腸道的原理，為經(jīng)消化道給藥的中藥制劑設計的一種新的提取工藝。第六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第二節(jié)半仿生提取的基本研究模式1.SBE法提取工藝設計，重在機體藥效學反應。2.方劑用SBE法提取條件優(yōu)選。3.方劑指紋圖譜-模式識別研究。4.方劑SBE提取液醇沉濃度優(yōu)選。5.方劑4種方法（SBE，SBAE，VE，VAE法）提取液成分、藥效、毒性的比較。6.綜合分析，科學評價。7.研究結果皆提示:SBE有可能取代VE法，SBAE有可能取代VAE法。第七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五優(yōu)選提取條件優(yōu)選藥材組合方式優(yōu)選醇沉濃度半仿生技術的操作流程123第八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1優(yōu)選提取條件

以單體有效成分或指標成分，總浸出物及不同極性部分等作指標或主要藥效、毒理作指標，在藥材密度、煎提溫度、煎提加水量、濾過、濃縮等條件相同的前提下，用均勻設計法或正交設計、比例分割設計等方法，主要優(yōu)選SBE法提取各煎用水的pH值和煎提時間。將各組指標所得數(shù)據(jù)，經(jīng)處理后，優(yōu)選得到SBE法的工藝參數(shù)。第九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五優(yōu)選藥材組合方式2

為選擇方劑有效成分提取時藥材較佳組合方式，用一項下所選出的SBE法條件提取，作指標成分的含量測定，同時將各組合提取液分別制成不同極性部分的提取液，采用正相TLC及反相HPLC分離分析，在獲得所有分析數(shù)據(jù)后，比較不同組合提取液的成分異同；分離不同極性下增減的斑點，鑒定其結構，進一步探討該成分與藥效的關系，最后進行分析和處理，以綜合反映不同組合提取液中化學成分的變化及其相關性，評判確定該方劑提取時藥材較佳組合方式。第十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五優(yōu)選醇沉濃度3

首先測定方劑SBE提取液的pH值，確定醇沉濃度范圍，然后采用比例分割法或正交實驗法等方法，按一項下方法，測得各指標成分的含量，經(jīng)處理后，綜合優(yōu)選出該方劑SBE法提取液的醇沉較佳濃度。第十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第三節(jié)在中藥提取中的應用實例文獻：半仿生煎藥法對清上蠲(juan)痛湯止痛作用的影響常規(guī)煎藥法（WE法）樣品制備：按處方稱取藥材,加10倍量水，煮沸二次，每次40min，過濾，合并濾液PH為6.2，濃縮至含生藥100%和150%，供實驗用。半仿生煎藥法（SBE法）樣品制備：按處方稱取藥材，第一次加10倍量pH為12.2的水煮沸40min，過濾，第二次加10倍量pH為2.0的水煮沸40min，過濾，合并濾液，濃縮至含生藥100%和150%，供實驗用。實驗動物：小鼠，♂♀均有，體重18～22g第十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1.熱板法:

將合格小鼠60只分為6組，每組10只，與樣品分組相對應為實驗組Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ,IV組，去痛片陽性對照組、生理鹽水陰性對照組。每只小鼠給藥量為10ml/kg，給藥前測定基礎痛閾值，1h后給藥，給藥30min后測其痛閾值（60s無反應者取出以免燙傷,其痛閾以60s計算）。計算每組痛閾值（x±s），用下列公式計算痛閾提高率，結果見表1。第十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五方法和結果2.扭體法：取篩選合格小鼠60只，♂♀各半，分組及給藥量與熱板法相同。各鼠給藥30min后，均腹腔注射0.5%醋酸0.2ml只，觀察10min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應（腹部內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高）的次數(shù)，以下列公式計算鎮(zhèn)痛百分率，結果見表1。第十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五實驗結果證明,清上蠲痛湯具有較好的止痛作用,用半仿生煎藥法制備的湯劑比用常規(guī)煎藥法制備的湯劑的止痛作用更好。WESBESBAESBAE第十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五黃芩半仿生提取法工藝條件的優(yōu)選

方法采用U9(96)均勻設計表，在飲片規(guī)格、煎提溫度、煎提用水量、濾過、濃縮等條件相同的情況下，以3煎用水的pH值及總煎提時間為考察因素，以分子量≤1000Da提取物、黃芩苷、黃芩素、總黃酮、HPLC峰總面積為指標，將各指標測得值進行標準化處理，并經(jīng)加權求和后得到綜合評判指標Y值，并用JYSYSJ數(shù)據(jù)分析模塊處理，優(yōu)選黃芩半仿生提取法的工藝條件。第十六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第十七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第十八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第十九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五再將方程在計算機上進行優(yōu)化處理，期望值方向大者為佳。結果優(yōu)化條件確定黃芩半仿生法提取的工藝條件為:3煎用水pH依次為:5.0、7.0、9.0;提取時間依次為:2h、1h、1h。第二十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五張學蘭等對交泰丸SBE法、WE法、SBAE法、WAE法4種方法提取液的成分比較，結果4種方法提取液5個指標成分（小檗堿、肉桂酸、總生物堿、揮發(fā)油、干浸膏量）的綜合評價值為：SBE液>WE液>SBAE液>WAE液。第二十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五4種方法提取液與黃連對照藥材層析行為基本一致。但SBE液與WE液中揮發(fā)油的氣相色譜有差異。氣相色譜表明，SBE液與WE液中揮發(fā)油主成分相同，但各組分的相對含量有差異：油中主要有效成分桂皮醛的相對含量呈現(xiàn)出SBE液為89.15%，WE為83.66%。

第二十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五用均勻設計優(yōu)選復壯膠囊的半仿生提取工藝條件根據(jù)SBE法理論,在藥材粒度、煎提溫度、煎煮加水量、離心、濃縮等條件相同的前提下,確定考察的主要因素及水平。選用U9(91X33)表(中國航天工業(yè)總公司第三研究院提供)安排實驗方案,見表1。第二十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第二十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五工藝條件的優(yōu)化將淫羊藿苷、-谷甾醇、甜菜堿、人參二醇、人參三醇、總糖、干浸膏得率7個指標的數(shù)據(jù)綜合成表2,用JYSYSJ的數(shù)據(jù)分析模塊處理,用二次多項式逐步回歸,得回歸方程:Y=-459.9143+219.5002B-236.5653D+4.244424A2+18.42124B2+22.92169D2+4.3654AB+12.07139BD,工藝條件進行優(yōu)選,確定其SBE法工藝條件為:三煎用水的pH值依次為:4.0,7.5,8.7;提取時間依為:150,75,75min。第二十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第二十六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五例：復壯膠囊不同提取液主要藥效比較第二十七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五復壯膠囊不同提取液主要藥效比較第二十八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第四節(jié)在中藥研究中的

現(xiàn)狀、問題和展望現(xiàn)狀缺點現(xiàn)在還處在理論階段，至于是否可行，還需要實踐證明利用各種條件來模仿人體環(huán)境提取的中藥，這種方法需要長期的時間來證明。不適合現(xiàn)代化大生產(chǎn)，其提取過程中pH變化范圍非常大，一般的儀器很難承受，容易腐蝕，即使解決儀器問題成本問題也會大幅度增高。出膏率問題：由于其提取條件較為劇烈，其提取的雜質(zhì)也很多。所以出膏率不好控制。酶催化第二十九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五展望半仿生提取技術提取溶媒以水為基礎，隨著現(xiàn)代植化技術的發(fā)展和對中藥藥用物質(zhì)基礎的進一步清晰.很多低極性藥用成分需要乙醇等極性低的溶媒來提取更為有效，在工業(yè)化大生產(chǎn)中，采用低沸點、低粘度的溶媒來提取，在過濾、濃縮等工藝環(huán)節(jié)更便利、能耗更低，非水提工藝的采用越來越普遍，半仿生提取技術適用于水提工藝的替代，是中藥傳統(tǒng)煎煮方法的改進，在工業(yè)生產(chǎn)中受到一定的局限。能否進行更大范圍的推廣應用，需結合藥品的安全、有效、穩(wěn)定、可控來進行深入對比研究。第三十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五有人建議采用更加符合人體溫度、酶等環(huán)境條件來進行提取，這樣更符合中醫(yī)藥理論的辨證施治原則。如果能夠將該技術應用于一些經(jīng)典的大品種中，結合安全評價、有效性對比開展系統(tǒng)研究，技術的深度驗證與推廣會取得更好的效果.第三十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五謝謝第三十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五SBE法有可能替代WE（水提取）法既符合中醫(yī)藥理論，又能體現(xiàn)現(xiàn)代科學技術水平提取方法的先河第三十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五均勻設計

一種多因素試驗設計方法。所謂試驗設計是指對于即將進行的試驗進行合理的安排,使之用盡量少的試驗達到預期的目的。正交設計的特點是在各因素考察范圍內(nèi)使試驗點“均勻分散,整齊可比”?！熬鶆蚍稚ⅰ笨墒顾x取的少量試驗點均勻地散布在所考察的范圍內(nèi),各試驗點具有代表性,以此減少試驗次數(shù),“整齊可比”可使試驗結果的分析來得方便,便于找出主要因素和次要因素及最佳水平組合(最優(yōu)試驗條件)。第三十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五

但是,為了達到“整齊可比”的目的,試驗點的數(shù)目必然較多。用正交設計安排試驗,其試驗次數(shù)至少為水平數(shù)的平方次(每個因素需考察的試驗點稱為水平)。在進行正交設計時,如果各因素取的水平多,試驗次數(shù)相當可觀。例如,若各因素取5個水平,則至少要做52=25次試驗,這在實際中往往難以實現(xiàn)。因此,需要一種用于多因素、多水平而試驗次數(shù)又比較少的試驗設計方法。第三十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1980年,我國數(shù)學工作者方開泰將數(shù)論用于試驗設計,創(chuàng)立了一種新的試驗設計方法一均勻設計.它基本思想就是拋開正交設計中“整齊可比”性的特點而只考慮試驗點的“均勻分散”性,即讓試驗點在所考察的試驗范圍內(nèi)盡量均勻地分布,“均勻設計”由此而來。為了達到均勻布點的目的,和正交設計類似,可以使用均勻設計表(簡稱均勻表)安排試驗。均勻表的表頭形式是Un(ts),U表示均勻表,n表示試驗次數(shù),t表示水平數(shù),