熱激蛋白基因克隆

熱激蛋白基因克隆第1頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月項目的結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容

第一部分：立項依據(jù)第二部分：實驗條件第三部分：研究內(nèi)容第四部分：研究方法第五部分：特色與創(chuàng)新之處第六部分：年度研究計劃及預(yù)期成果第2頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第一部分立項依據(jù)

1研究意義

高溫常常限制作物、蔬菜、食用菌等的生長和推廣，獲得溫度耐受性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因新品種，解除溫度限制，將大大降低推廣栽培的成本。本研究預(yù)期目標(biāo)若能實現(xiàn)，對建立食用菌基因工程研究平臺具有較好的現(xiàn)實意義，我們將為我國食用菌行業(yè)增添一個新的珍稀品種，為甘肅食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展培育出一個新的增長點和新的支撐點，產(chǎn)生顯著經(jīng)濟(jì)效益。第3頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月

2研究現(xiàn)狀研究發(fā)現(xiàn)，許多細(xì)胞的耐熱能力取決于細(xì)胞內(nèi)熱激蛋白70（HSP70）的合成，HSP70具有熱保護(hù)作用。目前，人們對植物和動物體內(nèi)熱激蛋白已有較深刻的認(rèn)識，而關(guān)于微生物熱激蛋白卻鮮有報道，關(guān)于荷葉離褶傘的熱激蛋白尚未見報道。本研究采用RT-PCR技術(shù)克隆荷葉離褶傘HSP70全長基因，構(gòu)建HSP70全長基因的gpd啟動子驅(qū)動的真菌表達(dá)載體。

第4頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二部分實驗條件

已通過響應(yīng)面法優(yōu)化了荷葉離褶傘的DNA提取，獲得了高質(zhì)量的DNA。在實驗室已培育出高產(chǎn)菌株，實驗中用到的菌株、載體由梁倩倩老師保存，分子生物學(xué)實驗室的實驗儀器能夠滿足實驗要求，指導(dǎo)老師梁倩倩多年從事基因克隆方面的分子研究，可以給予很好的指導(dǎo)。第5頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第三部分研究內(nèi)容一研究目標(biāo)

1克隆姬菇和荷葉離褶的HmHSP70基因

2構(gòu)建HmHSP70克隆載體；注冊GENEBANK；

3省級以上期刊發(fā)表研究論文1篇。第6頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月二研究內(nèi)容

1提取姬菇、荷葉離褶傘的DNA、RNA2采用PCR或RT-PCR技術(shù)克隆HmHSP70基因；

3HmHSP70克隆載體；

4測序及序列分析；

5注冊GENEBANK。第7頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月三擬解決的關(guān)鍵問題

荷葉離褶傘為祁連山低溫型優(yōu)良食用菌，由于甘肅河西地區(qū)日夜溫差大，夏天高溫可達(dá)35℃，本項目預(yù)期指標(biāo)的實現(xiàn)，可望獲得溫度耐受性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因荷葉離褶傘新品種，解除溫度對荷葉離褶傘栽培及推廣的限制，能在很大程度上降低推廣栽培的成本。第8頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月四實驗材料

姬菇荷葉離褶傘

第9頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第四部分研究方法研究路線如下：

姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成PCR擴(kuò)增HSP70基因片段克隆載體擴(kuò)建測序表達(dá)載體構(gòu)建姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取PCR擴(kuò)增HSP70基因片段引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取PCR擴(kuò)增HSP70基因片段引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取克隆載體擴(kuò)建PCR擴(kuò)增HSP70基因片段引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取克隆載體擴(kuò)建PCR擴(kuò)增HSP70基因片段引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取測序克隆載體擴(kuò)建PCR擴(kuò)增HSP70基因片段引物設(shè)計合成姬菇、荷葉離褶傘DNA提取RNA提取第10頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第五部分特色與創(chuàng)新之處

1目前以基因工程技術(shù)培育食用菌新品種的研究工作不是很多，關(guān)于荷葉離褶傘的這方面工作國內(nèi)外尚屬空白。

2本研究首次克隆荷葉離褶傘的HmHSP70基因，構(gòu)建載體后，基因還可用于轉(zhuǎn)化其他食用菌以提高品質(zhì)，應(yīng)用范圍廣泛。第11頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第五部分年度研究計劃與預(yù)期成果一年度研究計劃

第一階段（12.12-13.1）閱讀文獻(xiàn)資料，設(shè)計試驗方案，準(zhǔn)備試驗材料；第二階段（13.1-13.3）提取DNA、RNA；第三階段（13.3-13.6）PCR擴(kuò)増目標(biāo)片段、構(gòu)建克隆載體；第四階段（13.6-13.12）測序、構(gòu)建表達(dá)載體，發(fā)表文章；第五階段（13.12）撰寫及修改論文準(zhǔn)備答辯。第12頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月二預(yù)期研究成果

獲得姬菇、荷葉離褶傘HmHSP70基因，