離子色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定奶粉中氟乙酸鈉

離子色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定奶粉中氟乙酸鈉

氟乙酸鈉是一種含有a級毒性藥物的有機氟乙醇。大鼠口服的半生量為0.22mg/（kgbw），口服的半生量為0.1.10mg/（kgbw）。由于氟乙酸鈉對人和動物的毒性極強、起效快、致死率高,并容易引起二次中毒,我國于1982年就明令禁止其生產(chǎn)、銷售和使用目前,氟乙酸鈉的檢測方法有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法本研究擬建立離子色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用方法檢測奶粉中氟乙酸鈉。采用高氯酸沉淀去除樣品中蛋白和脂肪等雜質(zhì),叔丁基甲醚萃取凈化,借助于離子色譜分離,三重四極桿質(zhì)譜檢測,穩(wěn)定同位素內(nèi)標法定量分析,希望為檢測奶粉中氟乙酸鈉提供新途徑。1實驗部分1.1高效液相色譜儀(基于pahst-pcr)離子色譜系統(tǒng):美國ThermoScientific公司產(chǎn)品,由DionexICS-1100離子色譜儀、淋洗液自動發(fā)生器(RFC-30)、電解再生抑制器(ASRS500)和自動進樣器(DV-AS)組成,由變色龍工作站(7.22版)控制;QTRAP6500三重四極桿/復合線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜儀:美國ABSCIEX公司產(chǎn)品,由Analyst1.6.2軟件控制;MultiReax數(shù)顯型多管旋渦混合器:德國Heidolph公司產(chǎn)品;3-30K高速冷凍離心機:德國Sigma公司產(chǎn)品;N-EVAP氮吹儀(24孔):美國Organomation公司產(chǎn)品;2510超聲波清洗機:美國Branson公司產(chǎn)品;GradientA10Mill-Q超純水器:法國Millipore公司產(chǎn)品。1.2親水性聚丙烯濾膜叔丁基甲醚、丙酮:均為HPLC級,德國Merck公司產(chǎn)品;高氯酸:上海桃浦化工廠產(chǎn)品;親水性聚丙烯(GHP)濾膜針式過濾頭(直徑13mm,孔徑0.2μm):美國Pall公司產(chǎn)品;氟乙酸鈉標準物質(zhì)(純度97%):德國Dr.Ehrenstorfer公司產(chǎn)品;1.3試驗條件1.3.1樣品前處理稱取0.50g奶粉試樣于15mL塑料具塞離心管中,加入100μL1.3mg/L1.3.2koh淋洗液的制備IonPacAS19型色譜柱(2mm×250mm×7.5μm),AG19保護柱(2mm×50mm);ASRS500陰離子抑制器(2mm,外接水模式);KOH淋洗液由RFC-30自動在線產(chǎn)生;梯度淋洗程序:0～7min(5mmol/LKOH),7～8min(5～50mmol/LKOH),8～14min(50mmol/LKOH),14～20min(5mmol/LKOH);淋洗液流速0.30mL/min;柱溫30℃;進樣體積10μL。1.3.3氟乙酸鈉(me排)電噴霧電離(ESI)負離子多反應監(jiān)測模式;離子化電壓(IS)-4500V;離子源溫度650℃;氣簾氣壓強277kPa;噴霧氣壓強345kPa;輔助加熱氣壓強345kPa;碰撞氣設為Medium;氟乙酸鈉定量離子對為m/z77.0>57.0,去簇電壓-40V,碰撞能量-15eV;進樣運行開始時,離子色譜柱流出液經(jīng)六通切換閥切換至廢液,5.50min切換至離子源,質(zhì)譜同時采集數(shù)據(jù),直到8.00min六通切換閥又將柱流出液切換至廢液中。2結(jié)果與討論2.1質(zhì)量分析條件的優(yōu)化在ESI2.2離子層析條件的優(yōu)化氟乙酸鈉為弱酸鹽,lgK2.3樣品前處理方法的優(yōu)化2.3.1提取劑的選擇氟乙酸為弱酸性水溶化合物,pKa2.732.3.2叔丁基甲醚和乙酸乙酯萃取稱取0.50g奶粉樣品,加標10ng氟乙酸鈉,分別用5.0mL叔丁基甲醚和乙酸乙酯萃取。結(jié)果表明,叔丁基甲醚作為萃取劑的氟乙酸鈉響應值比乙酸乙酯作為萃取劑的響應值高20%,故選擇叔丁基甲醚作為萃取劑。2.3.3ph值-氟乙酸鈉響應曲線的繪制取7份奶粉的高氯酸提取液,用高氯酸或氨水調(diào)pH值分別為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0和5.0,再加入20ng氟乙酸鈉標準溶液,用5.0mL叔丁基甲醚萃取2次后測定,繪制pH值-氟乙酸鈉響應曲線,示于圖2。結(jié)果表明,在pH0.5～1.0范圍內(nèi),氟乙酸鈉的響應值最高,故選擇提取液pH值范圍為0.5～1.0。2.3.4萃取量的測定將處于pH0.5～1.0的高氯酸提取液加標10ng氟乙酸鈉標準溶液,用5.0mL叔丁基甲醚萃取3次,測定每次氟乙酸鈉的萃取量,通過除以3次萃取總量計算每次的萃取率。第1次叔丁基甲醚的萃取率約為60%,第2次約為30%,兩次的總萃取率約為90%,最終選擇采用5.0mL叔丁基甲醚萃取2次。2.3.5中氟乙酸鈉鹽析萃取本實驗考察了鹽析效應對氟乙酸鈉萃取率的影響,在高氯酸提取液中加標10ng氟乙酸鈉標準溶液,再加入2.0g氯化鈉后測定,并與不加氯化鈉的結(jié)果比較,發(fā)現(xiàn)鹽析效應對氟乙酸鈉的萃取率無明顯影響,故實際樣品萃取時無需加入氯化鈉進行鹽析。2.3.6基質(zhì)效應的考察本實驗采用穩(wěn)定同位素內(nèi)標法進行定量分析,可有效校正樣品中的基質(zhì)效應。取空白嬰幼兒配方奶粉得到空白處理液,加入氟乙酸鈉標準溶液制成基質(zhì)標準溶液(10μg/L),與溶劑標準溶液(10μg/L)相比評估基質(zhì)效應2.4檢出限和定量限將氟乙酸鈉標準溶液稀釋成濃度分別為0.3、1.0、5.0、50.0、100、600、1300μg/L的系列標準溶液(含130μg/L向空白奶粉中加入低濃度氟乙酸鈉溶液,以分子離子對信噪比S/N≥3的樣品濃度作為檢出限(LOD),以S/N≥10的樣品濃度作為定量限(LOQ),測得方法的檢出限和定量限分別為0.2、0.6μg/kg,測定上限為2.6mg/kg?？瞻缀图訕朔宜徕c嬰幼兒配方奶粉的IC-MS/MS色譜圖示于圖3。2.5加標回收率和精密度向空白嬰兒配方奶粉和全脂奶粉樣品中添加不同濃度的氟乙酸鈉標準溶液,混勻,放置1h,使待測成分與樣品基體成分相互作用達到平衡,再按1.3.1節(jié)方法處理樣品,其回收率和精密度結(jié)果列于表1。結(jié)果表明:氟乙酸鈉的加標回收率在89.7%～104%之間,相對標準偏差在0.50%～11%范圍內(nèi),符合痕量分析的要求。2.6實際樣品的測量采用該方法檢測了5種進口嬰幼兒配方奶粉和3種全脂奶粉,均未檢出氟乙酸鈉。3質(zhì)譜條件優(yōu)化,定量分析本研究采用離子色譜-三重四極桿質(zhì)譜法測定奶粉中氟乙酸鈉。通過優(yōu)化樣品的前處理