ph在不同濃度的中藥水提物對酪氨酸酶活性的影響

ph在不同濃度的中藥水提物對酪氨酸酶活性的影響

黑素是影響人體合成的天然色素。其生物合成的主要酶是酪氨酸酶，廣泛存在于人體、動物和植物中。其活性程度關(guān)系到黑素合成的質(zhì)和量,決定黑素在皮膚和毛發(fā)中的沉積11.1試劑酪氨酸酶、L-Dopa均為日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品;中藥由大連藥材公司購得;其余試劑均為分析純。1.2儀器分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠),超級恒溫水浴(遼陽分析儀器廠),離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠)。1.3方法1.3.1酪氨酸酶激活率測定將待測物用0.2mol/L、pH6.8磷酸緩沖液適量稀釋后與蘑菇酪氨酸酶50μL混和,于36.8℃孵育5min,加入5.1mmol/LL-Dopa反應(yīng)液0.5mL,繼續(xù)孵育2min,立即于分光光度計(jì)475nm處測光吸收值(精確反應(yīng)2min,總反應(yīng)量為3mL)。酪氨酸酶激活率按以下公式計(jì)算激活率%=[(c-d)-(a-b)]/(a-b)×100式中:a—475nm處沒有實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的光吸收值;b—475nm處沒有實(shí)驗(yàn)物質(zhì)和酶的光吸收值;c—475nm處有實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的光吸收值;d—475nm處有實(shí)驗(yàn)物質(zhì)但沒有酶的光吸收值。1.3.2生藥濃度的測定中藥生藥稍粉碎,于80℃下烘干30min,稱取5g,加50mL蒸餾水,煎煮30min,過濾后再加30mL蒸餾水,煎煮20min后過濾,合并兩次所得濾液,除溶劑成膏狀,溶于pH6.8、0.05mol/L磷酸緩沖液中,定溶至50mL,制成每毫升溶液相當(dāng)于生藥100mg。1.3.3l-dopa溶液的配制將中藥提取物用0.05mol/L、pH6.8磷酸緩沖液稀釋到100mg/mL。取其最適劑量與酪氨酸酶50μL(60u)混和,36.8℃孵育5min,分別加入不同劑量的L-Dopa溶液,繼續(xù)孵育2min,立即于分光光度計(jì)475nm處測光吸收值。以吸收值的倒數(shù)(1/A)對底物濃度的倒數(shù)(1/S)作Lineweaver-Burk曲線(圖1),用米氏公式計(jì)算Km。22.1酪氨酸酶活性測定人體皮膚pH值正常為4~7,平均為5.75、呈弱酸性圖1顯示,酪氨酸酶在pH5.8~7.0之間活性較大,其中pH6.8時(shí),活性最大。從圖1中看pH在6.6附近出現(xiàn)低值,這是否與該酶存在不同的同功酶有關(guān),還有待于進(jìn)一步深入研究。2.2乙醇對酪氨酸酶活性的影響乙醇是僅次于水的常用浸出溶媒,有防腐作用,含量在20%以上時(shí),能使中藥不致霉壞變質(zhì)。當(dāng)乙醇含量達(dá)40%時(shí),能延緩許多藥物如酯、鹽的水解作用而增加制劑的穩(wěn)定性。而且,乙醇有藥理作用,考察其對酪氨酸酶活性的影響有其應(yīng)用的價(jià)值。表1表明,隨著乙醇水溶液濃度的增加,酪氨酸酶活性受到抑制的程度增大,在化妝品制劑中采用適量乙醇百分濃度對提高產(chǎn)品性能是可行的。2.3不同溶劑對酪氨酸酶活性的影響二甲基亞砜(DimethylsulfoxideDMSO)為極性溶媒,能與水、乙醇相混合,并能溶解很多水溶性和脂溶性有機(jī)物。同時(shí),二甲基亞砜對皮膚穿透力很強(qiáng),常用于一些外用制劑中,以增加藥物的吸收,同時(shí)略有消炎、止癢作用?？疾炱鋵野彼崦富钚杂绊?以確定其是否可用,見表2。測試結(jié)果表明:體系中二甲基亞砜水溶液即使?jié)舛容^低,對酪氨酸酶的活性也會產(chǎn)生較強(qiáng)抑制作用,從而可能會影響酪氨酸酶在體內(nèi)的正常代謝;揭示二甲亞砜不應(yīng)在烏發(fā)功效化妝品中使用。2.4薄膜對酪氨酸酶的激活作用應(yīng)用天然中藥進(jìn)行皮膚美容和頭發(fā)護(hù)理,在我國有著悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)。《本草綱目》上就收集了歷代美容、烏發(fā)藥方。本文報(bào)道了薄荷單味中藥水提物在不同濃度對酪氨酸酶的激活作用及影響酶活性的動力學(xué)觀察,見表3。由表3可以看出,中藥薄荷水提液對酪氨酸酶具有較強(qiáng)的激活作用。在一定濃度范圍內(nèi),隨著劑量的增加,激活作用增強(qiáng)。薄荷在原生藥量10mg水平對酪氨酸酶的激活率可達(dá)55.2%,而補(bǔ)骨脂乙醇提取液同樣水平的激活率為17.5%(補(bǔ)骨脂是治療白癜風(fēng)病的常用藥物)。隨后我們對薄荷水提物提高酪氨酸酶活性進(jìn)行動力學(xué)觀察見表4。表4和圖1表明,加與不加薄荷水提物酶促反應(yīng)有顯著差異。動力學(xué)曲線,K3在人體黑素合成紡織品中的應(yīng)用通過對不同pH值;不同濃度乙醇、DMSO和中藥薄荷水提物對酪氨酸酶活性作用的考察表明:促進(jìn)人體黑素合成的最適pH為6.8;乙醇、DMSO的存在對人體黑素合成具有