大鼠急性心肌梗死模型的改進(jìn)

大鼠急性心肌梗死模型的改進(jìn)

左冠狀動(dòng)脈前降支（lad）的急性心力衰竭是最常見的大鼠急性心力衰竭模型方法，也是研究心肌缺血損傷的公認(rèn)模型。但在暴露出心臟的手術(shù)路徑中,不同的方式,可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的過程和結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。基于此,我們采用文獻(xiàn)報(bào)道開胸方法(方法一)與本實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)開胸方法(方法二)兩種模型。以組織損傷大小,心臟血流動(dòng)力學(xué),超聲心動(dòng)圖,心臟梗死面積以及4h及28d存活率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。比較兩種造模方法優(yōu)缺點(diǎn),并分析總結(jié)制作大鼠急性心肌梗死模型的常見注意要點(diǎn)。1急性心肌梗死模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用雄性SPF級(jí)SD大鼠(成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供),體重(240±20)g。分別使用傳統(tǒng)手術(shù)方法和改進(jìn)手術(shù)方法制作大鼠急性心肌梗死模型。設(shè)定呼吸機(jī)參數(shù)為:呼吸頻率為60次/min,潮氣量為10ml/kg體重,吸呼比為2︰1,吸入氣體為95%氧氣與5%二氧化碳的混合氣體。大鼠采用3%戊巴比妥鈉腹腔注射(50mg/kg)麻醉后,采用不同手術(shù)方案,暴露心臟上左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)的結(jié)扎點(diǎn)進(jìn)行心肌缺血實(shí)驗(yàn)。1.2研究指標(biāo)1.2.1肌肉損傷1.2.2左室壓下降和下降速率左心室插管,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo):左室收縮壓(LVSP),左室壓最大上升和下降速率(±dp/dtmax),左室舒張壓(LVDP),左室舒張末期壓(LEVDP),等容舒張期左室壓下降的時(shí)間常數(shù)(T),心率(HR)。1.2.3超聲心動(dòng)圖的測(cè)定探頭置于其左胸,在取得滿意的胸骨旁左心室短軸二維圖像后,在乳頭肌水平將M型取樣線垂直于室間隔和左心室后壁獲得M型超聲心動(dòng)圖,根據(jù)ASE推薦法測(cè)定舒張末期及收縮末左心室內(nèi)徑(EDD、ESD)及室間隔和后壁厚度。應(yīng)用Teichholtz公式法計(jì)算左心室射血分?jǐn)?shù)(EF)及左心室短軸縮短分?jǐn)?shù)(FS)。每組原始數(shù)據(jù)取連續(xù)3個(gè)心動(dòng)周期的平均值。1.2.4梗死區(qū)域1.2.524小時(shí)和28天的老鼠存活率統(tǒng)計(jì)成功完成建模,觀察大鼠的24h及28d大鼠存活情況。1.3統(tǒng)計(jì)方法所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0,P﹤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1血清ldh方法二組血清LDH的含量低于方法一組。各組血清LDH含量見表1。2.2血流動(dòng)力學(xué)與超聲波心動(dòng)圖結(jié)扎LAD后3h,心臟射血功能顯示降低。無論是超聲心動(dòng)圖參數(shù)還是左室壓最大上升速率均顯示心臟收縮功能的降低。見表2。2.3因缺區(qū)面積的近20%結(jié)扎缺陷后的3h心臟已經(jīng)在缺血區(qū)發(fā)生明顯的梗死,占缺血區(qū)面積的近30%。而方法一與方法二對(duì)于心肌梗死面積的大小并沒有影響。此外,AAR/左心室面積在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中較一致的數(shù)據(jù)顯示造模尤其是選擇結(jié)扎點(diǎn)的成功。見表3。2.4術(shù)后24小時(shí)和28天的存活率造模結(jié)束至28d,假手術(shù)組沒有一只大鼠出現(xiàn)死亡,方法一組28d結(jié)束時(shí)存活12只,方法二組存活16只。見圖1。3改進(jìn)模型的評(píng)價(jià)心肌梗死是威脅人類死亡的重要原因之一。同時(shí),心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?是研究人類相關(guān)疾病病理生理機(jī)制、新藥的研發(fā)評(píng)價(jià),疾病的診斷和治療一個(gè)重要的工具。提高造模的可重復(fù)性和穩(wěn)定性,延長(zhǎng)模型動(dòng)物存活率是建立心肌梗死動(dòng)物模型的核心問題。本研究采用與傳統(tǒng)模型進(jìn)行比較,以手術(shù)損傷大小、心臟血流動(dòng)力學(xué)、超聲心動(dòng)圖、心臟梗死面積以及4h及28d存活率為評(píng)價(jià)指標(biāo),來評(píng)價(jià)改進(jìn)模型的優(yōu)越性。乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶,廣泛存在于真核細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),在機(jī)械外力等損傷細(xì)胞后可釋放入血。改進(jìn)模型血清LDH的水平顯著低于傳統(tǒng)模型組,由此推測(cè)改進(jìn)手術(shù)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的打擊較小。同時(shí),縮小的開胸切口節(jié)約了手術(shù)時(shí)間,同時(shí)對(duì)外層皮膚切口縫合也能使胸腔良好密閉。此外,兩種手術(shù)方法最大的區(qū)別在于開胸的方式。改進(jìn)手術(shù)方法由于不需要在心臟上操作,因此對(duì)心電圖,心肌梗死面積,血流動(dòng)力學(xué)的結(jié)果不會(huì)產(chǎn)生直接影響。因此,可以顯著提高大鼠的28d存活率。本研究改進(jìn)了一種較為穩(wěn)定的大鼠急性心肌缺血損傷的模型。此手術(shù)通過方法減少手術(shù)打擊,縮短手術(shù)時(shí)間,可操作性強(qiáng),從而延長(zhǎng)模型動(dòng)物存活率,