實(shí)驗(yàn)室消毒與殺菌技術(shù)

實(shí)驗(yàn)室消毒與殺菌技術(shù)

消毒和消毒的一般原則和方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的生物安全非常重要。因此,實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)學(xué)廢棄物的處理應(yīng)遵守相關(guān)行業(yè)部門、國家和國際的規(guī)定。根椐衛(wèi)生部《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》WS233-2002第6.2.2.2條款明確規(guī)定,實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和建造應(yīng)設(shè)置高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置,實(shí)驗(yàn)后的一切廢棄物都必須進(jìn)行滅菌、消毒處理;關(guān)于清除污染的特殊要求,要根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作類型以及所操作的感染性物質(zhì)的特性來決定?！秾?shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》GB19489-2004的相關(guān)條款均提出設(shè)置高壓滅菌鍋的要求。如在相關(guān)生物安全實(shí)驗(yàn)室未設(shè)置高壓滅菌鍋或化學(xué)消毒裝置或裝備了其設(shè)備但不符合規(guī)定要求的,應(yīng)該講是一個(gè)不合格的生物安全實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)然,正確掌握滅菌和消毒技術(shù)亦是實(shí)驗(yàn)室生物安全保證的重要方面之一。消毒即通過物理或化學(xué)手段去除微生物(不一定殺滅其孢子);而滅菌殺滅和/或去除所有微生物及其孢子的過程;化學(xué)消毒滅菌通過液體化學(xué)試劑殺滅微生物繁殖體或芽孢。然而,消毒對(duì)象包括物體表面、空氣和污染物等,方式有擦洗消毒、熏蒸和浸泡等。物理消毒滅菌包括紫外線、高壓蒸汽滅菌、焚燒和HEPA過濾除菌等。通常加熱是最常用的清除病原污染的物理手段?！案伞睙釠]有腐蝕性,可用來處理實(shí)驗(yàn)器材中可耐受≥160℃高溫的物品,所需時(shí)間為2~4h。通常它的適用范圍是用于高溫下不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)物品的滅菌;用于蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌,如玻璃、油脂、粉劑和金屬等制品的消毒滅菌。但高壓滅菌的濕熱法卻最為有效。煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體,但如果其他方法(化學(xué)殺菌、清除污染、高壓滅菌)不可行或沒有條件時(shí),也可以作為一種最起碼的消毒措施。一旦滅菌后的物品必須小心操作和保存,以保證在使用之前不再被污染。1選擇原則對(duì)于選擇消毒和滅菌方法的原則:1.1消毒指數(shù)的測定高度危險(xiǎn)的物品,必須選用滅菌法滅菌,其滅菌指數(shù)為106;中度危險(xiǎn)的物品,可選用中效消毒法或高效消毒法,要求消毒指數(shù)達(dá)103以上;凡低度危險(xiǎn)物品,一般可用低效消毒方法或只作一般性清潔處理即可。1.2消毒、消毒方法和劑量根據(jù)污染微生物的類型和數(shù)量進(jìn)行選擇2預(yù)防消毒和消毒消毒因子大多是對(duì)人體有害,因此,在進(jìn)行消毒時(shí)一定要具有自我防護(hù)的措施,防止消毒操作中發(fā)生的意外事故,同時(shí)應(yīng)防止由于操作方法不當(dāng)而對(duì)人引起的傷害。熱力消毒滅菌:干熱滅菌防止燃燒,壓力蒸氣滅菌應(yīng)防止爆炸等;紫外線、微波消毒時(shí)應(yīng)防止對(duì)人的直接照射;氣體化學(xué)消毒、滅菌劑要防止泄漏;液體化學(xué)消毒、滅菌劑要防止過敏和對(duì)皮膚粘膜的傷害;處理銳利器械時(shí)應(yīng)避免對(duì)人的損傷。3消毒和消毒方法壓力蒸汽滅菌器是根據(jù)排放冷空氣的方式和程度不同,分為下排氣式壓力蒸汽滅菌器和預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器兩大類。3.1下汽式壓力蒸汽發(fā)生器高壓滅菌即壓力飽和蒸汽滅菌是對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌的最有效和最可靠的方法。通過溫度設(shè)置和滅菌時(shí)間的組合將確保高壓滅菌器的滅菌效果。3.1.1手提式壓力蒸汽滅菌方法3.1.2濕式壓力蒸汽滅菌方法3.2預(yù)真空高壓滅菌的無菌方法如下3.2.1預(yù)真空蒸汽滅菌方法3.2.2動(dòng)脈真空蒸汽滅菌方法4加載注意事項(xiàng)為了利于蒸汽的滲透和空氣排出,高壓滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi)。要使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物。同時(shí)應(yīng)按照下列要求進(jìn)行裝載。1.2.1高效消毒和滅菌法受到致病性芽孢菌、真菌孢子和抗力強(qiáng)、危險(xiǎn)程度大的病毒污染的物體,應(yīng)選用高效消毒法和滅菌法。1.2.2消毒法的選擇受到致病性細(xì)菌和真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體應(yīng)選用中效以上消毒法。1.2.3親脂病毒污染物品的消毒處理受到一般細(xì)菌和親脂病毒污染的物品,可選用中效或低效消毒法。1.2.4消毒時(shí)間的確定物品上污染特別嚴(yán)重時(shí),應(yīng)加大處理劑量和延長消毒時(shí)間。a)134℃、3min;b)126℃、10min;c)121℃、15min;d)115℃、25min其滅菌方法為:3...13..2.1在主體腔內(nèi)加入適量的清水,將滅菌物品放入滅菌器內(nèi);3.1.1.2將頂蓋上的排氣軟管插入內(nèi)壁的方管中,蓋好后必須擰緊頂蓋;.1.1.3打開滅菌器的熱源,開啟排氣閥排完空氣后(約在水沸騰后10min~15min關(guān)閉排氣閥;3.1.1.溫度設(shè)定要求將壓力升至102.9kPa(1.05kg/m2),溫度要求達(dá)121℃,維持到規(guī)定時(shí)間(根據(jù)物品性質(zhì)以及有關(guān)情況確定,一般20min~30min);3.1.1.5、五需要干燥的物品,打開排氣閥,慢慢放汽,待壓力恢復(fù)到零位后開蓋取物。3.2..13.2.2.1將待滅菌物品放入滅菌柜室內(nèi),關(guān)閉柜門并扣緊;3.1..2打開進(jìn)氣閥,將蒸汽通入夾層預(yù)熱;.1.2.調(diào)整控制閥回至菌落夾層壓力達(dá)102.9kPa(1.05kg/m2)時(shí),調(diào)整控制閥到“滅菌”位置,蒸汽通入滅菌室內(nèi),此時(shí)柜內(nèi)冷空氣和冷凝水經(jīng)柜室阻氣器自動(dòng)排出;3.1.2.4當(dāng)柜內(nèi)壓力達(dá)102.9kPa(1.05kg/m2),需維持20min~30min;3.1.2.5、五需要干燥的物品,滅菌后調(diào)整控制閥至“干燥”位置,蒸汽被抽出,柜室內(nèi)呈負(fù)壓,維持一定時(shí)間物品即達(dá)干燥要求;3.1.2.物的加入對(duì)液體類物品,應(yīng)待自然冷卻到60℃以下,再開門取物,不得使用快速排出蒸汽法,以防突然減壓,液體劇烈沸騰或容器爆炸。將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi),關(guān)好柜門,預(yù)真空壓力蒸汽滅菌整個(gè)過程約需25min。3..1.2將蒸汽通入夾層,使壓力達(dá)107.8kPa(1.1kg/m2),預(yù)熱4min;.2.1.3啟動(dòng)真空泵,抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達(dá)2.0kPa-2.7kPa(排除柜室內(nèi)空氣98%左右);3.2.1.4停止抽氣,向柜室內(nèi)輸入飽和蒸汽,使柜內(nèi)壓力達(dá)205.8kPa(2.1kg/m2),溫度達(dá)134℃,維持滅菌時(shí)間3min;3.2.1.6，六通入過濾后的潔凈空氣,使滅菌室壓力蒸汽回復(fù)為零,溫度降至60℃以下,即可開門取出物品。3.2.1.使滅菌物品迅速干燥停止輸入蒸氣,再次抽真空使壓力達(dá)8.0kPa,使滅菌物品迅速干燥;將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi),關(guān)好柜門,脈動(dòng)預(yù)真空壓力蒸汽滅菌整個(gè)過程需29min~36min。3...2將蒸汽通入夾層,使壓力達(dá)107.8kPa(1.1kg/m2),預(yù)熱4min;.2.2.3啟動(dòng)真空泵,抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達(dá)8.0kPa;3.2.2.4停止抽氣,向柜室內(nèi)榆入飽和蒸汽,使柜室內(nèi)壓力達(dá)49kPa(0.5kg/m2),溫度達(dá)106℃~115℃,關(guān)閉蒸汽閥;3.2.2.5、五抽氣,再次輸入蒸汽,再次抽氣,如此反復(fù)3次~4次;3.2.2.6，六最后一次輸入蒸汽,使壓力達(dá)205.8kPa(2.1kg/m2),溫度達(dá)132℃,維持滅菌時(shí)間4min;3.2.2.7、七停止輸入蒸汽,抽氣,當(dāng)壓力降到8.0kPa,打開進(jìn)氣閥,使空氣經(jīng)高效濾器進(jìn)入柜室內(nèi),使內(nèi)外壓力平衡;3.2.2.8重復(fù)上述抽氣進(jìn)氣操作2次~3次;3.2.2.9待柜內(nèi)外壓力平衡(恢復(fù)到零位),溫度降至60℃以下,即可開門取出物品。4.1滅菌器的裝載與裝置設(shè)計(jì)下排氣滅菌器的裝載量不得超過柜室內(nèi)容量的80%;預(yù)真空滅菌器的裝載量不得超過柜室容積90%,同時(shí)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器的裝置量又分別不得小于柜室容積的10%和5%,以防止“小裝量效應(yīng)”,殘留空氣影響滅菌效果。4.2菌種的種數(shù)和時(shí)間應(yīng)盡量將同類物品放在一起滅菌,若必須將不同類物品裝放在一起,則以最難達(dá)到滅菌物品所需的溫度和時(shí)間為基準(zhǔn)。4.3空氣污染物排放物品裝放時(shí),上下左右相互間均隔一定距離以利蒸汽置換空氣;大型滅菌器,物品應(yīng)放于柜室或推車上的載物架上;無載物架的中小型滅菌器,可將物品放于網(wǎng)籃中。4.4菌的麻黃用于滅菌的大包放在上層,較易滅菌的小包放在下層;金屬物品放下層,織物包放上層,物品裝放不能貼靠門和四壁,以防吸入較多的冷凝水。4.5垂直位置原則金屬包應(yīng)平放,盤、碟、碗等應(yīng)處于豎立的位置;纖維織物應(yīng)使折疊的方向與水平面成垂直狀態(tài);玻璃瓶等應(yīng)開口向下或側(cè)放以利蒸汽進(jìn)入和空