葡萄糖的耐量實(shí)驗(yàn)

關(guān)于葡萄糖的耐量實(shí)驗(yàn)糖尿病的發(fā)病機(jī)制治療方法病因:胰島素分泌不足及胰島素受體缺陷所致的代謝性疾病.

由于胰島素調(diào)節(jié)血糖水平,故糖尿病患者的血糖水平升高.

是常見(jiàn)的內(nèi)分泌紊亂性疾病分類

:I型糖尿病II型糖尿病繼發(fā)性糖尿病第2頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天癥狀:(三多一少)

多飲多食多尿消瘦治療方法:口服藥物治療常用的有：化學(xué)類有促胰島素分泌劑、雙胍類、AGI等；胰島素治療適應(yīng)癥：①1型糖尿病患者，由于自身胰島β細(xì)胞功能受損，胰島素分泌絕對(duì)不足，在發(fā)病時(shí)就需要胰島素治療，而且需終生胰島素替代治療以維持生命和生活。約占糖尿病總?cè)藬?shù)5%。②2型糖尿病患者在生活方式和口服降糖藥聯(lián)合治療的基礎(chǔ)上，如果血糖仍然未達(dá)到控制目標(biāo)，即可開(kāi)始口服藥物和胰島素的聯(lián)合治療。一般經(jīng)過(guò)較大劑量多種口服藥物聯(lián)合治療后HbA1c仍大于7.0%時(shí)，就可以考慮啟動(dòng)胰島素治療。第3頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)第4頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上OGTT主要適用于下列情況:（1）無(wú)糖尿病癥狀，空腹血糖異常，或偶爾出現(xiàn)糖尿，或有明顯糖尿病家族史者；（2）有糖尿病癥狀，血糖水平不夠糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（3）妊娠期或甲狀腺功能亢進(jìn)出現(xiàn)糖尿者；（4）不明原因腎病與視網(wǎng)膜病者。第5頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天(5)肥胖、血脂紊亂、高血壓，高尿酸血癥者；(6)屢發(fā)皮膚癤腫、皮膚感染，泌尿系感染者。第6頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰阜y(cè)定血清葡萄糖濃度的原理掌握血糖變化的臨床生理意義掌握口服葡萄糖耐量試驗(yàn)的原理，適用人群和臨床意義。第7頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)原理葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）是一種葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)，用于檢查人體胰島素B細(xì)胞功能和機(jī)體對(duì)糖的調(diào)節(jié)能力。正常人進(jìn)食后血糖都會(huì)暫時(shí)性升高，30~60分鐘后可升到最高峰，但一般不超過(guò)8.9mmol/L，2小時(shí)左右又會(huì)回到空腹水平。這種現(xiàn)象稱為耐糖現(xiàn)象。第8頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天若內(nèi)分泌失調(diào)或神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，則調(diào)節(jié)功能失常，食入大量糖后血糖濃度可急劇上升，短時(shí)間不能恢復(fù)到原值，稱為耐糖失?，F(xiàn)象。所以觀察耐糖現(xiàn)象可以了解調(diào)節(jié)血糖的各種機(jī)能是否健全。第9頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天血清葡萄糖濃度測(cè)定方法1、GOD-POD法(酶測(cè)法)2、鄰甲苯胺法3、其他方法舉例(福林—馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法)第10頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、GOD-POD法：以過(guò)氧化物酶作指示酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，同時(shí)釋放過(guò)氧化氫。過(guò)氧化物酶（POD）催化過(guò)氧化氫氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。

偶聯(lián)反應(yīng)也作偶連反應(yīng)、耦聯(lián)反應(yīng)、氧化偶聯(lián)，是由兩個(gè)有機(jī)化學(xué)單位進(jìn)行某種化學(xué)反應(yīng)而得到一個(gè)有機(jī)分子的過(guò)程.

第11頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天反應(yīng)方程式:

GOD

葡萄糖+O2+H2O————葡萄糖酸+2H2O2

POD2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚————紅色醌類化合物第12頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、鄰甲苯胺法：葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的Suchiff堿。Suchiff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比與進(jìn)行同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液相比較，即可求出樣品中葡萄糖的含量。由于鄰甲苯胺只與醛糖作用顯色，故此種測(cè)定方法不受血液中其他還原物質(zhì)的干擾，測(cè)定時(shí)也無(wú)需除去血漿或血清中的蛋白質(zhì)。第13頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天反應(yīng)方程式:

[H+]葡萄糖——5-羥甲基-2-呋喃甲醛+3H2O

加熱5-羥甲基-2-呋喃甲醛+鄰甲苯胺——Schiff堿+H2O第14頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、其他方法舉例福林—馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法：在熱堿溶液中的葡萄糖可將高鐵氰化鉀還原為低鐵氰化鉀，后者再與硫酸高鐵鹽作用生成亞鐵氰化鐵（普魯士藍(lán)），與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，即可求出血糖含量。其反應(yīng)如下：第15頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天血糖測(cè)定方法歸納:血糖的測(cè)定方法按測(cè)定原理可分為無(wú)機(jī)化學(xué)方法、有機(jī)化學(xué)方法和生物化學(xué)方法三類。此外，還有固相酶法、電化學(xué)法及質(zhì)譜法等。常用的是分光光度法和酶學(xué)方法。分光光度法中常見(jiàn)的是鄰甲苯胺法，是利用葡萄糖在加熱的有機(jī)酸溶液中與某些芳香族胺類，可生成有色衍生物這一原理建立的。酶學(xué)方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脫氫酶法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同ATP反應(yīng)，產(chǎn)生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脫氧酶存在時(shí)，同NADP＋作用．產(chǎn)生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，NADPH在340nm有吸收峰。第16頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化β葡萄糖產(chǎn)生葡萄糖酸內(nèi)酯和雙氧水的反應(yīng)而建立。血糖的酶法測(cè)定是利用酶的特異性催化而建立起來(lái)的，具有高度的特異性，同時(shí)，可以避免使用化學(xué)方法中的一些有害試劑等。操作過(guò)程簡(jiǎn)便，便于自動(dòng)化檢測(cè)第17頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天應(yīng)用GOD-POD法測(cè)定血糖濃度來(lái)檢測(cè)葡萄糖耐量第18頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)器材與試劑:器材：5ml移液管50或100ul微量可調(diào)式移液器721E分光光度計(jì)1cm比色皿37℃恒溫水浴第19頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天試劑:1、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）稱取無(wú)水磷酸氫二鈉8.67g及無(wú)水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，調(diào)pH7.0，定容至1L。2、酶試劑取過(guò)氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4℃保存，可穩(wěn)定存放3個(gè)月。3、酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。4、酶酚混合試劑將酶試劑及酚溶液等量混合，4℃可以存放1個(gè)月。第20頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天5、12mmol/L苯甲酸溶液取苯甲酸1.4g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。6、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液（100mmol/L）稱取已干燥恒重的無(wú)水葡萄糖1.802g，溶于約70ml12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用，葡萄糖為單糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平衡向左移動(dòng)）7、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（5mmol/L）吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。

第21頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天血清中葡萄糖溶度的測(cè)定項(xiàng)目空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管血清/ml————0.020葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml——0.020——蒸餾水/ml0.020————酶-酚混合試劑/ml3.003.003.00第22頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天混勻，置37℃水浴中，保溫25min，在波長(zhǎng)510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度。計(jì)算公式:

血清葡萄糖濃度=（A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn)）*5mmol/L參考值:

空腹血清葡萄糖的濃度:3.89~6.11mmol/L第23頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)前受試者應(yīng)充分休息，避免體力活動(dòng)，試驗(yàn)中亦不能吸煙、喝咖啡，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。葡萄糖氧化酶對(duì)β-D葡萄糖高度特異，溶液中葡萄糖約36%為α型，64%為β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應(yīng)。新配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液主要是α型，故需放置2h以上（最好過(guò)夜），待變旋平衡后方可應(yīng)用。第24頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天葡萄糖氧化酶法可以直接測(cè)定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測(cè)定尿液葡萄糖含量。因?yàn)槟蛞褐心蛩岬雀蓴_性物質(zhì)濃度過(guò)高，可干擾過(guò)氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。因紅細(xì)胞的酵解將導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低，建議測(cè)定樣品以草酸鉀-氟化鈉做抗凝劑以抑制糖酵解。嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無(wú)蛋白血濾液，然后再進(jìn)行測(cè)定。第25頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床意義:生理性高血糖:可見(jiàn)攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺素分泌增加時(shí)。病理性高血糖（1）糖尿病：病理性高血糖常見(jiàn)于胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足的糖尿病患者。（2）內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進(jìn)，引起的各種對(duì)抗胰島素的激素分泌過(guò)多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。第26頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）顱內(nèi)壓增高：顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等，引起血糖增高。（4）脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。生理性低血糖：見(jiàn)于饑餓和劇烈運(yùn)動(dòng)。病理性低血糖：特發(fā)性功能性低血糖最多見(jiàn)，依次是藥源性、肝源性和胰島素瘤等。第27頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床診斷:正常耐糖量：空腹血糖<6.1mmol/L，口服1小時(shí)內(nèi)血糖值升高至最高峰，但不超過(guò)11.1mmol/L，2小時(shí)后血糖水平（2hPG）基本恢復(fù)空腹水平，即2hPG<7.8mmol/L。各次尿液中均未檢出糖。空腹血糖損害（IFG）：6.1mmol/L≤FPG＜7.0mmol/L，2小時(shí)后血糖水平＜7.8mmol/L。糖耐量減退（IGT）:FPG＜7.0mmol/L以及7.8mmol/L≤2hPG＜11.1mmol/L第28頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天糖尿?。篎PG≥7.0mmol/L,2hPG≥11.1mmol/L。耐量增加

見(jiàn)于腎上腺皮質(zhì)功能減退患者，垂體前葉功能減退、甲狀腺功能減退及胰島素分泌過(guò)多。其曲線特征是：（1）空腹血糖值低于正常值；（2）服糖后不出現(xiàn)血糖高峰；（3）1小時(shí)內(nèi)血糖即可恢復(fù)原值第29頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天診斷條件靜脈（全血）

mmol/l毛細(xì)血管

mmol/l靜脈（血漿）

mmol/l糖尿病空腹≥6.1≥6.1≥7.0

服糖后2