【黃瓜枯萎病生防細(xì)菌的篩選實(shí)驗(yàn)探究報(bào)告6700字（論文）】

黃瓜枯萎病生防細(xì)菌的篩選實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告摘要近年來(lái)，由于生防菌防治枯萎病清潔高效，易于人工控制，并且相比于嫁接、施用農(nóng)藥等物理化學(xué)方法成本低，持效期長(zhǎng)，因此，利用生物學(xué)方法防治黃瓜枯萎病逐漸走進(jìn)人們的視野。本研究為了篩選出對(duì)黃瓜枯萎病具有防治效果的拮抗細(xì)菌，從黃瓜和辣椒根圍土壤采樣，并對(duì)樣本進(jìn)行細(xì)菌分離得到了183株細(xì)菌，其中42株具有產(chǎn)纖維素酶活性，16株具有產(chǎn)嗜鐵素活性。通過(guò)平板拮抗實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5株細(xì)菌具有抑制枯萎病生長(zhǎng)的作用。在該5株拮抗細(xì)菌中，2株同時(shí)具有上述酶活性，2株均不具備上述酶活性，1株只具有產(chǎn)嗜鐵素活性，且5株細(xì)菌拮抗病原菌活力大小與產(chǎn)酶活性之間無(wú)相關(guān)性。因此，針對(duì)特定病原菌，生防菌株的篩選還需要考慮更多可能存在的影響因素，以提高篩選效率。關(guān)鍵詞：黃瓜枯萎?。晦卓辜?xì)菌；纖維素酶；嗜鐵素目錄TOC\o"1-3"\h\u1緒論 12材料與方法 42-1材料 42.-1-1樣品的來(lái)源 42-1-1培養(yǎng)基的配制 42-2菌種分離 42-2-1土壤樣品處理 42-2-2菌種分離 42-3測(cè)定項(xiàng)目與方法 52-3-1酶活性的檢測(cè) 52-3-2平板拮抗真菌活性篩選 53結(jié)果與分析 63-1嗜鐵素和 63-2平板拮抗真菌活性 8參考文獻(xiàn) 91緒論隨著人口的快速增長(zhǎng)，經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們對(duì)于食品的需求也不斷加大，對(duì)食材品質(zhì)要求也是同樣水漲船高。其中，黃瓜作為一種富含大量維生素，同時(shí)口感清脆，口味清爽的蔬菜，成為了經(jīng)常出現(xiàn)在餐桌上的角色。我國(guó)耕地面積世界排名第三，目前全世界黃瓜總栽培面積達(dá)到146.67萬(wàn)hm2，其中我國(guó)栽培面積達(dá)到33.33萬(wàn)hm2以上，達(dá)到世界產(chǎn)量的五分之一，因此對(duì)于黃瓜種植也同時(shí)需要加大重視[1]。黃瓜的種植生產(chǎn)需要光照充足，空氣流通的生長(zhǎng)環(huán)境，如果操作不得當(dāng)，導(dǎo)致空氣不流通，濕度較大的話，很有可能會(huì)產(chǎn)生各種各樣的病蟲(chóng)害。黃瓜苗期和成熟期會(huì)出現(xiàn)的病蟲(chóng)害比較多，大致可以分為以下四類：真菌性病害，細(xì)菌性病害，生理性病害以及病毒性病害[2]。其中枯萎病對(duì)于黃瓜種植生產(chǎn)威脅最大。黃瓜枯萎病，又稱萎蔫病，蔓割病，死秧病，是一種典型的土壤傳染，通過(guò)根部或者頸部進(jìn)入黃瓜組織，寄生在維管束內(nèi)大量繁殖，堵塞導(dǎo)管的系統(tǒng)性疾病[3]，其發(fā)病率一般為10-20%，嚴(yán)重的可達(dá)到50%以上。因?yàn)樵摬『τ砂胫鷣嗛T(mén)鐮孢屬的尖孢鐮刀菌引起，主要存在方式為寄生，所以黃瓜枯萎病屬于真菌性疾病。尖孢鐮刀菌并不只單單侵染黃瓜植株，它有五個(gè)常見(jiàn)的?；停狐S瓜、西瓜、甜瓜、絲瓜以及葫蘆。其中，黃瓜?；蛯ｉT(mén)在成熟期和苗期侵染黃瓜植株[4,5]。隨著栽培面積的不斷擴(kuò)大，尤其是現(xiàn)在很多栽培選擇在大棚中進(jìn)行，空氣不流通，陽(yáng)光不充足，加上潮濕悶熱的環(huán)境，就給了枯萎病真菌良好的生長(zhǎng)環(huán)境，導(dǎo)致枯萎病的發(fā)病率不斷上升。如果黃瓜種植期間染上了枯萎病，同時(shí)又沒(méi)有受到正確的處理的話，一般會(huì)造成20-30%的減產(chǎn)，如果染病情況嚴(yán)重，有可能會(huì)絕收[6]。因此探索出高效清潔同時(shí)又不會(huì)對(duì)黃瓜產(chǎn)量產(chǎn)生過(guò)于嚴(yán)重影響的防治措施便成為了黃瓜培養(yǎng)過(guò)程中重要環(huán)節(jié)[7]。對(duì)于防治黃瓜枯萎病，有各種各樣的方案，總體可分為物理防治方法，化學(xué)防治方法以及生物防治方法三大類。其中，預(yù)防枯萎病而采取的物理治理方法并不多，常見(jiàn)的主要有輪作和嫁接兩個(gè)方式。輪作，顧名思義，就是種完一輪黃瓜之后，再種植非瓜類作物，然后下一期再種植黃瓜，然后循環(huán)下去。因?yàn)椴煌闹参锲渖硇再|(zhì)結(jié)構(gòu)一般不相同，不適用于枯萎病菌的寄生，這對(duì)于病原菌的生長(zhǎng)繁殖可以起到很大程度的抑制作用[3]。另一種物理防治方法就是嫁接。一般會(huì)將南瓜作為砧木，以優(yōu)良黃瓜品種作為接穗培養(yǎng)，不讓黃瓜扎根于有病菌侵害的土壤，預(yù)防枯萎病的發(fā)生。以上兩種防治方法中，用輪作方式來(lái)抑制枯萎病菌生長(zhǎng)的做法一般發(fā)病率較低，但是操作成本較大，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致作物收成不穩(wěn)定。然而用嫁接的方式抑制發(fā)病的方式可以杜絕黃瓜作物苗期感染枯萎病，但是因?yàn)辄S瓜會(huì)產(chǎn)生不定根，如果栽培偏深而把接種處理在土壤中，或者整架落蔓時(shí)莖蔓著地接觸土壤，往往因?yàn)榧藿犹幃a(chǎn)生不定根扎入土壤中失去嫁接防病的意義[8]。所以物理防治存在著防治方式較單一，預(yù)防效果受影響因素較多，同時(shí)對(duì)于作物的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)也會(huì)產(chǎn)生很大影響的弊端。關(guān)于化學(xué)防治方法，大部分農(nóng)田里還是通過(guò)施放農(nóng)藥來(lái)達(dá)到預(yù)防或者抑制枯萎病的目的。目前使用的農(nóng)藥有速克靈，農(nóng)用鏈霉素[9]，多菌靈等。但是，因?yàn)檫@些農(nóng)藥殺菌劑，容易造成殘留，而且長(zhǎng)時(shí)間使用會(huì)使病原菌產(chǎn)生耐藥性，造成防治效果逐漸降低，同時(shí)農(nóng)藥產(chǎn)生的殘留會(huì)被人們吸收進(jìn)入人體，造成各種疾病，并且由于枯萎病是土傳疾病，如果大面積實(shí)行土壤藥劑處理，操作難度太大，操作成本昂貴[10]，所以近年來(lái)，高效清潔的生物防治逐漸引起了人們的關(guān)注。生物防治，顧名思義，就是通過(guò)生物學(xué)的方法利用遺傳育種或者基因工程相結(jié)合的技術(shù)培育出新的抗病品種，或者接種拮抗菌，來(lái)達(dá)到預(yù)防黃瓜枯萎病的目的[11,12]。生物防治目前主要有用到一下兩種手段：1.誘導(dǎo)抗性；2.接種有益菌[13-15]。誘導(dǎo)抗性防治，就是利用被弱化的或者無(wú)致病性病原菌株接種到黃瓜幼苗上，誘導(dǎo)黃瓜對(duì)枯萎病菌產(chǎn)生抗性，從而培育出具有抗性的黃瓜品種[16]。該技術(shù)不僅可以應(yīng)用于黃瓜生產(chǎn)，對(duì)于其他能夠患上枯萎病的農(nóng)作物，例如甘薯，西瓜，番茄等，都有防治效果。在日本的甘薯產(chǎn)區(qū)，利用誘導(dǎo)抗性防治枯萎病的田間防效已達(dá)到83%-90%。雖然培育出來(lái)的品種具有良好的抗病性，但是這種培育方式存在著培育周期過(guò)長(zhǎng)，并且隨著培育代數(shù)增加，防效還會(huì)逐漸下降的缺點(diǎn)。因此，現(xiàn)代生防技術(shù)更多的是使用接種有益菌的方式。當(dāng)下用來(lái)接種的有益菌大致可以分為兩種，細(xì)菌和真菌。真菌主要有木霉屬真菌，非致病尖孢鐮刀菌，從枝菌根真菌，淡紫擬青霉等[17]。其中木霉菌極易分離和培養(yǎng)，繁殖速度快，能迅速占領(lǐng)空間，競(jìng)爭(zhēng)養(yǎng)分，對(duì)于多種病原真菌具有重寄生作用，同時(shí)又有很強(qiáng)的纖維素分解能力，對(duì)于枯萎病菌的抑制作用很強(qiáng)，被認(rèn)為是極具價(jià)值的植病生防因子。但是木霉菌單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)定殖能力不強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖易受環(huán)境影響，導(dǎo)致其防治效果穩(wěn)定性不佳。非致病性尖孢鐮刀菌的防治機(jī)理主要為通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)生態(tài)位和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式對(duì)致病菌株的直接拮抗作用和通過(guò)寄主作用的間接拮抗作用[18]。叢枝菌根真菌廣泛分布于農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)中，可以與大部分植物根系形成菌根，加強(qiáng)植物對(duì)土壤當(dāng)中營(yíng)養(yǎng)成分的吸收，從而促進(jìn)植物生長(zhǎng)繁殖。相比于真菌，細(xì)菌在植物病蟲(chóng)害的防治方面也具有十分突出的優(yōu)點(diǎn)：1.細(xì)菌種類繁多，生長(zhǎng)繁殖速度驚人；2.許多細(xì)菌存在于植物的根部和地上部分，與植物的生理狀態(tài)相適宜；3.細(xì)菌大部分可以人工培養(yǎng)，容易控制，在生產(chǎn)操作中也較容易實(shí)現(xiàn)4.有些細(xì)菌在防治病害的同時(shí)還可以分泌有益因子增加作物的產(chǎn)量。其作用機(jī)理主要為與病原菌競(jìng)爭(zhēng)生態(tài)位，競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)，產(chǎn)生抗菌因子等。由于黃瓜枯萎病病原菌為真菌，其細(xì)胞壁中含有纖維素，幾丁質(zhì)等物質(zhì)，因此接種可分泌纖維素酶的細(xì)菌可通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)纖維素等生存資源的方式達(dá)到防治黃瓜枯萎病的效果?？僧a(chǎn)生嗜鐵素的細(xì)菌防治機(jī)理可以簡(jiǎn)述為：鐵元素是微生物生長(zhǎng)繁殖當(dāng)中必不可少的一種元素，病原菌大部分本身并不能或者很少產(chǎn)生嗜鐵素，只能通過(guò)寄生宿主，利用宿主的嗜鐵素吸收土壤中的鐵元素，用于自身的生長(zhǎng)繁殖。而通過(guò)接種可以自身分泌嗜鐵素的細(xì)菌，可以讓細(xì)菌與病原菌競(jìng)爭(zhēng)鐵元素，因?yàn)椴≡旧聿荒芑蚝苌俜置谑辱F素，其產(chǎn)生的嗜鐵素也會(huì)被有益菌所利用，而生防菌產(chǎn)生的的嗜鐵素卻不能被病原菌利用，從而病原菌因?yàn)槿鄙勹F元素而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖[19]，由此達(dá)到防治病害的效果[15,20]。為了獲得能夠防治枯萎病菌的生防菌，需要用最優(yōu)化的方式篩選出最穩(wěn)定最合適細(xì)菌菌種[21]。目前篩選生防菌用到的主要手段是根據(jù)其代謝產(chǎn)物活性大小和與病原菌的拮抗作用強(qiáng)弱來(lái)篩選[22]。本次實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)目的性菌株初分離，結(jié)合菌株產(chǎn)生嗜鐵素活性和菌株的纖維素酶活性測(cè)定，以及對(duì)黃瓜枯萎病病原菌的平板拮抗活性，旨在篩選出能夠防治黃瓜枯萎病的生防菌株。2材料與方法2材料2-1-1樣品的來(lái)源土壤樣品：2016年9月在淮安丁集鎮(zhèn)的蔬菜大棚，隨機(jī)分別選取5處黃瓜和辣椒的根圍土壤，另外各取一份非根圍土壤做對(duì)照。供試真菌：枯萎病原菌（Fusariumoxysporum）。2-1-2培養(yǎng)基的配制2-1-2-1LB培養(yǎng)基：瓊脂15g，酵母浸粉5g，氯化鈉10g，胰蛋白胨10g，定容至1000ml，pH7.2[4]。2-2-2-2KB培養(yǎng)基：蛋白胨20g，甘油10ml，硫酸鎂1.5g，磷酸氫二鉀1.5g，瓊脂15g，定容至1000mL，pH7.2。2-2-2-3纖維素酶活性測(cè)定培養(yǎng)基：蛋白胨10g，羧甲基纖維素鈉10g，酵母粉10g，磷酸二氫鉀1g，瓊脂18g，氯化鈉5g，定容至1000mL，pH7.0。2-2-2-4WA培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g葡萄糖10g，氯化鈉5g，瓊脂20g，定容至1L，pH=6.8。2-2-2-5PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂15~20克，定容至1000mL。2-2菌種分離2-2-1土壤樣品處理將滅菌的LB和KB培養(yǎng)基均勻的倒在培養(yǎng)皿上，待其變冷凝固后，將土壤樣品5g溶于45mL滅菌水中，搖勻后進(jìn)行梯度稀釋至10-5。分別吸取10-3，10-4，10-5三個(gè)梯度100μL涂布在已凝固的培養(yǎng)皿上，做了5組平行樣品。做好標(biāo)記放入28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)下培養(yǎng)2天。培養(yǎng)完成后將平板取出，數(shù)菌落數(shù)并記錄。2-2-2菌種分離每種樣品各選一個(gè)有足夠合適菌群數(shù)的培養(yǎng)皿，用接種環(huán)從分離培養(yǎng)皿上蘸取菌種，以劃線的方式將其劃在相應(yīng)的培養(yǎng)基培養(yǎng)皿上，每個(gè)培養(yǎng)皿可以接三個(gè)菌種，劃線方式如下（圖1）所示。將接好的平板做好標(biāo)記在室溫下培養(yǎng)2天，利用滅菌牙簽挑取單菌落用液體培養(yǎng)基在28℃下擴(kuò)大培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后吸取菌液和80%滅菌甘油按照1:1體積混合，然后采用-70℃低溫保存。通過(guò)初篩和復(fù)篩，最后篩選出183株細(xì)菌。圖1菌株平板劃線培養(yǎng)法2-3測(cè)定項(xiàng)目與方法2-3-1酶活性的檢測(cè)2-3-1-1纖維素酶活性的檢測(cè)：對(duì)篩選出的183株細(xì)菌參照GhoseT.K(1987)方法測(cè)定纖維素酶活性。把準(zhǔn)備好的菌株用滅菌牙簽接到纖維素酶活性測(cè)定玻璃板上(酵母粉10g，蛋白胨10g，羧甲基纖維素鈉10g，氯化鈉5g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀1g，定容至1000mL，pH7.0)，30℃培養(yǎng)48h后，用1g/L的剛果紅染1h后，倒掉染液，用1M的氯化鈉浸泡1h。檢測(cè)是否有透明圈。2-3-1-2嗜鐵素活性檢測(cè)：用篩選出的183株細(xì)菌，參照Shinetal等人(2001)的方法測(cè)定嗜鐵素。A溶液：60.5mg鉻天青S溶于50ml去離子水10ml三價(jià)鐵溶液(1mML氯化鐵3.6H2O，10mL鹽酸為溶劑)和73mg十六烷基三甲基溴化銨溶于40ml去離子水溶液混合定容至100ml，pH調(diào)至中性，121℃滅菌20min。B溶液:900mlWA培養(yǎng)基，12g50%(W/V)的NaOH溶液將培養(yǎng)基pH調(diào)至6.8，121℃滅菌20min。A，B液混合倒平板，接菌，30℃培養(yǎng)3天進(jìn)行觀察。2-3-2平板拮抗真菌活性篩選將病原真菌Fusariumoxysporum，在potato-dextroseagar（PDA）培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在28℃恒溫培養(yǎng)一周后，菌落基本覆蓋培養(yǎng)皿。用打孔器取下菌塊，接種到LB培養(yǎng)皿上，將生長(zhǎng)真菌的一面貼在容器的中間。使用滅菌的牙簽將細(xì)菌接入進(jìn)行拮抗培養(yǎng)，細(xì)菌分布在真菌塊周圍大約2厘米處，每各細(xì)菌間留有一定的距離，一個(gè)一個(gè)培養(yǎng)皿接7到8個(gè)細(xì)菌菌種。所有菌種都要做好標(biāo)記，將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，注意培養(yǎng)皿必須倒置。3結(jié)果與分析3-1嗜鐵素和纖維素酶活性由表1可以看出，能夠產(chǎn)生嗜鐵素的細(xì)菌絕大部分來(lái)自于能夠在LB培養(yǎng)基上生存的細(xì)菌，只有一株細(xì)菌是可以在KB培養(yǎng)基上生存的；另外，10株是從辣椒根圍土壤和中分離得到，另外6株細(xì)菌是從黃瓜根圍土壤中分離得到。通過(guò)分析可知，由于KB培養(yǎng)基中所加入鐵元素的含量很低甚至沒(méi)有，所以通過(guò)分泌嗜鐵素來(lái)吸收鐵離子生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌無(wú)法在KB培養(yǎng)基上生存，而LB培養(yǎng)基中因?yàn)榧尤肓私湍附郏渲泻械奈⒘吭亟o細(xì)菌提供了鐵離子，于是需要鐵離子來(lái)生長(zhǎng)的細(xì)菌就可以正常存活，因此可分泌嗜鐵素的細(xì)菌才會(huì)絕大部分都是由LB培養(yǎng)基培養(yǎng)的。另外，有學(xué)者研究得到[1,23]，由于黃瓜果實(shí)的生長(zhǎng)過(guò)程中需要鐵元素的參與，而相比之下辣椒的果實(shí)生長(zhǎng)過(guò)程當(dāng)中需要的鐵元素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于黃瓜，因此大部分需要鐵離子才能生長(zhǎng)的細(xì)菌更容易在辣椒的根圍土壤中生存，避免辣椒爭(zhēng)奪鐵離子，所以相比之下在黃瓜根圍土壤當(dāng)中生存的較少。表1嗜鐵素活性篩選結(jié)果菌株編號(hào)菌株來(lái)源嗜鐵素活性（水解圈半徑）mm菌株編號(hào)菌株來(lái)源嗜鐵素活性（水解圈半徑）mmH2-12KH3-19LH3-1LH3-7LH3-8LHCK-8LL1-1LL1-3L黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜辣椒辣椒2.62.0L2-3LL3-3LL4-4LL4-6LL4-8LL5-10LL5-2LL5-4L辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒2.02.5表2表明，具有纖維素酶活性的42株細(xì)菌中，有31株細(xì)菌是來(lái)自于黃瓜根圍土壤，只有11株是來(lái)自于辣椒根圍土壤。另外，有26株都是在LB培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的，其余16株細(xì)菌是在KB培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。初步推測(cè)由于黃瓜生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生很多的不定根以及藤蔓，這些藤蔓和不定根在黃瓜成熟時(shí)會(huì)隨著果實(shí)一起掉落，因此很多可以分解纖維素的細(xì)菌會(huì)利用這些掉落的藤蔓，分解其中的纖維素作為自身生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)；而相比較下，辣椒根圍土壤中的纖維素較少，所以其具有纖維素酶活性的細(xì)菌較少。表2纖維素酶活性篩選結(jié)果菌株編號(hào)菌株來(lái)源纖維素酶活性（水解圈半徑）mm菌株編號(hào)菌株來(lái)源纖維素酶活性（水解圈半徑）mm菌株編號(hào)菌株來(lái)源纖維素酶活性（水解圈半徑）mmH1-11KH1-6KH2-22KH2-23KH2-25KH2-29KH2-3KH3-11KH3-12KH3-16KH3-1KL1-1KL3-1KL3-2K黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜辣椒辣椒辣椒4.81.02.01.01.03.02.55.0L3-3KL5-1KH1-13LH1-16LH1-17LH1-18LH2-17LH2-1LH2-2LH2-9LH3-10LH3-18LH4-12LH4-2L辣椒辣椒黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜5.53.02.02.01.01.51.05.9H4-4LH4-9LHCK-14LHCK-15LHCK-16LHCK-17LHCK-18LHCK-1LL1-1LL1-2LL3-3LL4-5LL5-10LL5-3L黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜黃瓜辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒辣椒6.92.03.52.02.04.02.52.03.03.58.0AB圖2分離的細(xì)菌產(chǎn)纖維素酶和嗜鐵素活性(A、纖維素酶；B、嗜鐵素)3.2平板拮抗真菌活性表3平板拮抗真菌活性檢測(cè)結(jié)果菌株標(biāo)號(hào)F.oxysporum(抑菌圈半徑)mm菌株產(chǎn)纖維素酶活性（水解圈半徑）mm菌株產(chǎn)嗜鐵素活性（水解圈半徑）mmH4-7LL1-1LL1-3LL3-6LL5-10L4.03.03.06.04.0-6.5--3.5-5.03.0-2.0 圖3分離的細(xì)菌對(duì)枯萎病菌的拮抗活性從表3可以看出，5種細(xì)菌中，2種細(xì)菌具有產(chǎn)纖維素酶的活性，3種細(xì)菌具有產(chǎn)嗜鐵素的活性，且5種可拮抗病原菌的細(xì)菌都是從可在LB培養(yǎng)基生長(zhǎng)的細(xì)菌當(dāng)中篩選得到。因此可以推測(cè)，有上述2種活性的細(xì)菌具有拮抗病原菌生長(zhǎng)的可能。并且根據(jù)對(duì)比可知，拮抗作用的大小與細(xì)菌的嗜鐵素活性或纖維素酶活性并無(wú)相關(guān)性，只能看出只要存在這2種活性，就能一定程度上抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖。表中還有2類細(xì)菌并不存在本實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的2種活性，但是仍然對(duì)病原菌產(chǎn)生的拮抗作用，推測(cè)可能是由于細(xì)菌與病原菌在其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如碳源和氮源方面的競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致。3.3結(jié)論本實(shí)驗(yàn)分離得到183株根圍細(xì)菌，其中42株具有產(chǎn)纖維素酶活性，16株具有產(chǎn)嗜鐵素活性。通過(guò)平板拮抗實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5株細(xì)菌具有抑制枯萎病生長(zhǎng)的作用，在該5株拮抗細(xì)菌中，2株同時(shí)具有上述酶活性，2株均不具備上述酶活性，1株只具有產(chǎn)嗜鐵素活性，且5株細(xì)菌拮抗病原菌活力大小與產(chǎn)酶活性之間無(wú)對(duì)應(yīng)關(guān)系。因此，針對(duì)特定病原菌，生防菌株的篩選還需要考慮更多可能存在影響的因素，以提高篩選效率。參考文獻(xiàn)[1] 何曉明,林毓娥,陳清華,等.不同類型黃瓜的營(yíng)養(yǎng)成分分析及初步評(píng)價(jià)[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,(04):15-17.[2] 文切木·艾爾肯.黃瓜種植過(guò)程中的常見(jiàn)病害及防治方法[J].南方農(nóng)業(yè),2016,10(21):60-61.[3] 羅文輝,黃忠明,吳運(yùn)華.黃瓜枯萎病的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2007,(19):92-93.[4] 王亞娟,張顯,杜勝利.黃瓜枯萎病與抗性遺傳育種進(jìn)展[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2005,14(5):168-172.[5] 許田芬.西瓜病蟲(chóng)害的種類及生物學(xué)特性研究[D].蘇州大學(xué)農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治,2008.[6] 朱育菁,車建美,肖榮鳳,等.尖孢鐮刀菌的生長(zhǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2007,23(8):373-376.[7] 周開(kāi)勝.厭氧還原土壤滅菌法抑制西瓜?；图怄哏牭毒鶾J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,(5):1006-1011.[8] 張立寧.嫁接黃瓜枯萎病防治[J].農(nóng)業(yè)知識(shí)（瓜果菜）,2009,(6):27.[9] 何潤(rùn)云.混合農(nóng)藥防治黃瓜枯萎病效果及穩(wěn)定性試驗(yàn)[J].長(zhǎng)江蔬菜,2012,(2):69-70.[10] 袁玉娟,胡江,凌寧,等.施用不同生物有機(jī)肥對(duì)連作黃瓜枯萎病防治效果及其機(jī)理初探[J].植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào),2014,(02):372-379.[11] 劉艷,王振軍.黃瓜枯萎病生物