NF-κB, S100B 在新生兒腦損傷中的早期診斷價(jià)值.doc

NF-B、S100B在新生兒腦損傷中的早期診斷價(jià)值趙建美（南通大學(xué)附屬醫(yī)院兒科，江蘇南通226001）摘要目的檢測(cè)母妊娠期高血壓疾病兒臍帶組織核轉(zhuǎn)錄因子kB（NF-kB）、S100B的表達(dá)及臍血S100B水平，探討NF-kB、S100B在母妊娠期高血壓疾病兒腦損傷中的早期診斷價(jià)值。方法將97例母妊娠期高血壓疾病所生新生兒納入實(shí)驗(yàn)組，并據(jù)其生后第37天或糾正胎齡40周后37天的20項(xiàng)新生兒神經(jīng)行為測(cè)定(NBNA)評(píng)分分為兩組：35分為腦損傷組，35分為非腦損傷組；同時(shí)選取20例健康母親所生正常新生兒作為對(duì)照組?；仡櫺苑治銎淠殠ЫM織NF-kB、S100B的表達(dá)及臍血S100B水平。免疫組化法檢測(cè)臍帶組織NF-kB、S100B表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)臍血S100B蛋白。對(duì)照組、非腦損傷組及腦損傷組間臍帶組織NF-kB、S100B和臍血S100B數(shù)值比較采用單因素方差分析；NF-kB、S100B與NBNA間相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)系數(shù)表達(dá)。繪制ROC曲線并計(jì)算相應(yīng)的曲線下面積，以評(píng)估NF-kB、S100B對(duì)母妊娠高血壓疾病兒腦損傷的早期診斷價(jià)值。結(jié)果1.NF-B在臍帶組織存在表達(dá)，腦損傷組與非腦損傷組臍帶組織NF-B表達(dá)無顯著性差異（p0.05），但兩組臍帶組織NF-B表達(dá)與正常對(duì)照組間均有顯著性差異（p0.05）。2.S100B在臍帶組織存在表達(dá)，腦損傷組、非腦損傷組及正常對(duì)照組間臍帶組織S100B表達(dá)無顯著性差異（p0.05）；腦損傷組臍血S100B蛋白水平較非腦損傷組顯著增高，非腦損傷組臍血S100B蛋白水平也較正常對(duì)照組間顯著增高（p0.05）。3.母妊娠高血壓疾病兒臍血S100B蛋白水平與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.596(p0.01)。4.臍血S100B蛋白R(shí)OC曲線下面積為0.992，以95.04pg/ml作為S100B的最佳截取值時(shí)，診斷腦損傷的特異度94%、靈敏度95.7%。結(jié)論1.NF-B作為轉(zhuǎn)錄因子，參與了母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷的發(fā)生、發(fā)展。2.臍血S100B蛋白水平基本不受臍帶組織S100B蛋白表達(dá)的影響，臍血S100B蛋白對(duì)早期診斷母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷具有特異性價(jià)值。關(guān)鍵詞：妊娠高血壓疾??；S100B；核轉(zhuǎn)錄因子kB；腦損傷SignificanceofNuclearFactorkappaB，S100BproteinforearlydiagnosisofbraindamageinneonatesZHAOJianmeiDepartmentofPediatrics,AffiliatedHospitalofNantongUniversity,JiangsuNantong226001AbstractObjectiveToobservethesignificanceofnuclearfactorkappaB基金項(xiàng)目：南通大學(xué)附屬醫(yī)院院級(jí)課題作者簡(jiǎn)介：趙建美(1971-)，女，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。E-mail：（NF-kB）,S100BproteininumbilicalcordandS100Bproteinincordbloodforearlydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.Methods97neonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancywereselectedascasegroupandtheywereperformedNeonatalBehavioralNeurologicalAssessment(NBNA)attheageof37daysoffull-termnewbornsorthecorrectedageofpreterminfants.AccordingtoNBNAscores,theyweredividedintobraindamagegroup(NBNAscores35)andnon-braindamagegroup(NBNAscores35).20healthyneonateswereselectedintohealthycontrolgroupatthesametime.ImmunohistochemistrywasusedtomeasuretheexpressionofNF-kBandS100Binumbilicalcordandenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)wasusedtodetecttheumbilicalcordbloodlevelsofS100Bprotein.ThecomparisonsoftheexpressionofNF-kB,S100BintheumbilicalcordandtheconcentrationofserumS100Binumbilicalcordbloodamonghealthycontrolgroup,non-braindamagegroupandbraindamagegroupweremadebyOne-WayAnova.ThecorrelationbetweenS100BandNBNAwasexpressedbyPearsoncorrelationcoefficient.ThevalueofumbilicalcordserumS100BproteintoearlydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancywereevaluatedbydrawingROC-curveandcalculatingthecorrespondingareasunderthemrespectively.Results1.NF-kBwasexpressingintheumbilicalcord.TheexpressionofNF-kBinbraindamagegrouphadnosignificantdifferencethanthatinnon-braindamageandtheexpressionofNF-kBinthetwogroupswerebothsignificantlyhigherthanthatinhealthycontrolgroup(p0.05).2.S100Bwaspresentinumbilicalcordbutnosignificantdifferencewasfoundinbraindamagegroup,non-braindamagegroupandhealthycontrolgroup(p0.05).ThecordbloodlevelsofS100Bproteininbraindamagegroupweresignificantlyhigherthanthatinnon-braindamagegroup,andthecordbloodlevelsofS100Bproteininnon-braindamagegroupwerealsohigherthanthatinhealthycontrolgroup(p0.05).3.Incasegroup,theumbilicalcordserumS100BconcentrationwasnegativelycorrelatedwiththevalueofNBNAscoresandthecorrelationcoefficientwas-0.596.4.ThecorrespondingareasunderROC-curveoftheumbilicalcordserumS100Bproteinconcentrationwas98.2%.Takingthecordlevel95.07pg/mlofS100Bproteinastheoptimalcutoffvalue,thesensitivityoftheumbilicalcordserumS100Bproteinwas99.2%todiagnosebraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisordercomplicatingpregnancyandthespecificityofwhichwas94%.Conclusions1.NF-kBisinvolvedinthemechanismofhypoxic-ischemicbraindamageinneonateswhosemotherhadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.2.S100BproteinincordbloodcouldnotbeaffectedbytheexpressionofS100Binumbilicalcord,cordbloodlevelsofS100Bproteinhavethevalueofearlyandspecificallydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.Keywordshypertensivedisordercomplicatingpregnancy；S100Bprotein；NuclearFactorkappaB；braindamage妊娠期高血壓疾?。╤ypertensivedisordercomplicatingpregnancy,HDCP）是妊娠期最常見的合并癥，發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，對(duì)胎兒可造成不同程度的危害，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害，可直接影響胎兒的生存及遠(yuǎn)期預(yù)后。母妊娠期高血壓疾病兒發(fā)生缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD）的幾率顯著增加,已得到廣泛證實(shí)1。目前腦損傷的診斷主要依靠新生兒生后臨床觀察、新生兒神經(jīng)行為測(cè)定（neuonatalbehavioralneurologicalassessment,NBNA）、影像學(xué)及電生理檢查等，尚缺乏早期診斷的特異性生化指標(biāo)。核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB(nuclearfactor-kappaB,NF-B)是目前發(fā)現(xiàn)的與炎癥有關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明NF-B可能通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥蛋白表達(dá)參與大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)多核白細(xì)胞浸潤(rùn)過程2。同時(shí)，一些實(shí)驗(yàn)證明阻止NF-B的活化能減輕神經(jīng)功能缺損，減少中性粒細(xì)胞的滲出以及局灶腦缺血損傷所導(dǎo)致的NF-B的移位。大量研究認(rèn)為各種體液中S100B蛋白水平，可作為診斷HIBD的特異性生化指標(biāo)3。但國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)S100B的表達(dá)不僅限于神經(jīng)系統(tǒng)，胎盤、臍帶組織也有表達(dá)4,5,認(rèn)為血液等體液中S100B蛋白可能受這些組織分泌的影響，從而對(duì)S100B作為神經(jīng)特異源性蛋白的腦損傷診斷價(jià)值產(chǎn)生了懷疑。本實(shí)驗(yàn)擬測(cè)定母妊娠高血壓疾病新生兒臍血及臍帶組織NF-B、S100B的表達(dá)，對(duì)其生后7天或糾正胎齡40周后7天行新生兒神經(jīng)行為測(cè)定（NBNA），再回顧性分析其臍血與臍帶組織NF-B、S100B表達(dá)變化與NBNA之間的關(guān)系，探討NF-B、S100B在母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷中的作用及其相互關(guān)系，為臨床早期診斷、早期干預(yù)提供理論基礎(chǔ)。1材料與方法1.1一般資料1.1.1實(shí)驗(yàn)組將2009年9月至2010年9月本院或市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)科母妊娠高血壓疾?。ǜ鶕?jù)樂杰主編的婦產(chǎn)科學(xué)妊娠期高血壓疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)6,其中母妊娠期高血壓35例、母輕度子癇前期32例、母重度子癇前期30例）所生新生兒97例納入實(shí)驗(yàn)組，其中男57例，女40例；足月兒78例，早產(chǎn)兒19例；胎齡31.2440周，平均孕周(37.431.81)周；體重1.753.9kg，平均(3.230.47)kg；剖宮產(chǎn)60例，自然分娩37例；其母無感染、貧血、糖尿病等其它影響循環(huán)代謝的疾病。所有足月兒生后7天、早產(chǎn)兒糾正胎齡40周后7天采用鮑秀蘭制定的新生兒神經(jīng)行為神經(jīng)(NBNA)20項(xiàng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)7進(jìn)行評(píng)分，NBNA35分為非腦損傷組，NBNA35分為腦損傷組。1.1.2對(duì)照組同期隨機(jī)收集20例健康母親所生正常新生兒為對(duì)照組，其中男12例,女8例；足月兒17例，早產(chǎn)兒3例；胎齡3240周,平均孕周(37.311.91)周；體重1.73.9kg，平均(3.200.44)kg；剖宮產(chǎn)11例,自然分娩9例；其母孕期體健，無妊娠期高血壓疾病、感染、貧血、糖尿病等影響循環(huán)代謝的疾病。所有新生兒生后7天、早產(chǎn)兒糾正胎齡40周后7天也行NBNA，其NBNA評(píng)分均37分。1.2實(shí)驗(yàn)方法所有研究對(duì)象均在斷臍后取臍靜脈血2ml，并取近胎兒臍帶根部的臍帶組織約1cm，采血時(shí)避免溶血。所有血標(biāo)本裝入不加抗凝劑的試管中，室溫放置，半小時(shí)內(nèi)放入離心機(jī)4000r/min離心10min，留取上清液-80C冰箱保存，一年后同批檢測(cè)S100B蛋白水平。測(cè)定結(jié)果前冰凍標(biāo)本在28C過夜緩融，檢測(cè)前將標(biāo)本恢復(fù)到室溫(20C28C)。血清S100B蛋白采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按說明書由專人完成。所有臍帶組織放入4多聚甲醛溶液中，固定48h后，依次進(jìn)行酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋。測(cè)定結(jié)果時(shí)取母妊娠期高血壓疾病非腦損組及腦損傷組臍帶各6根及6根正常臍帶作正常對(duì)照，進(jìn)行石蠟切片，厚度4m，石蠟切片脫蠟至水后，分別做NF-B、S100B免疫組化標(biāo)記，操作步驟嚴(yán)格按說明書由專人完成。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各計(jì)量資料均采用Stata11.5統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組一般資料中胎齡與出生體重以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(XS)表示，數(shù)值比較及兩兩比較采用單因素方差分析；性別及生產(chǎn)方式比較采用2檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(XS)表示，腦損傷組、非腦損傷組與對(duì)照組臍帶組織NF-B、S100B和臍血S100B數(shù)值比較及組間兩兩比較采用單因素方差分析及Dunnetts檢驗(yàn)；S100B、NBNA間相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)系數(shù)表達(dá)；繪制ROC曲線并計(jì)算相應(yīng)的曲線下面積，分析臍血S100B的特異度、靈敏度。2結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)組（腦損傷組、非腦損傷組）與對(duì)照組間胎齡、出生體重、性別及分娩方式的比較母妊娠高血壓疾病兒腦損傷組、非腦損傷組間胎齡、出生體重、性別比例及分娩方式間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。(表1、2)表1腦損傷組、非腦損傷組與對(duì)照組間胎齡、出生體重比較組別例數(shù)胎齡出生體重對(duì)照組2037.311.913.230.47非腦損傷組5037.461.863.220.43腦損傷組4737.401.773.170.45F0.0490.186p0.050.05注：三組胎齡、出生體重比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ANOVA檢驗(yàn)，p0.05）。表2腦損傷組、非腦損傷組與對(duì)照組間性別、生產(chǎn)方式比較組別例數(shù)性別生產(chǎn)方式男女剖宮產(chǎn)自然分娩對(duì)照組20128119非腦損傷組5030203020腦損傷組472720301720.080.48p0.050.05注：性別、出生體重在三組間兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（卡方檢驗(yàn)，p0.05）。2.2實(shí)驗(yàn)組（腦損傷組、非腦損傷組）與對(duì)照組臍帶NF-kB水平比較臍帶組織NF-kB表達(dá)的光密度值在正常對(duì)照組為0.4470.005，在母妊娠高血壓疾病兒非腦損傷組為0.4550.007、腦損傷組為0.4600.006。臍帶組織NF-kB表達(dá)的強(qiáng)弱在母妊娠高血壓疾病兒腦損傷組、非腦損傷組間無顯著性差異(#p0.05)，非腦損傷組與正常對(duì)照組間有顯著性差異(*p0.05)，腦損傷組與正常對(duì)照組間也有顯著性差異(p0.05)。（表3，圖1）表3三組臍帶組織NF-kB陽(yáng)性表達(dá)序號(hào)光密度值平均光密度值對(duì)照組10.44820.44030.4510.4470.00540.44350.45260.447非腦損傷組10.45620.44730.4480.4550.007*40.46750.45560.459腦損傷組10.46020.46930.4500.4600.006#40.45550.46260.461F6.36p0.05注：與對(duì)照組比較*p0.05,與非腦損傷組比較#p0.05,與對(duì)照組比較p0.05對(duì)照組非腦損傷組腦損傷組圖1三組臍帶組織NF-kB的陽(yáng)性表達(dá)免疫組化染色(X400)2.3實(shí)驗(yàn)組（腦損傷組、非腦損傷組）和對(duì)照組臍帶組織S100B表達(dá)的比較經(jīng)免疫組化染色，臍帶組織S100B表達(dá)的光密度值在正常對(duì)照