第三代液基制片技術(shù)——Eprep液基制片系統(tǒng)

1、sammys works 第三代液基細(xì)胞學(xué)制片術(shù)第三代液基細(xì)胞學(xué)制片術(shù) 韓國派氏e-prep液基產(chǎn)品 細(xì)胞學(xué)檢測發(fā)展史細(xì)胞學(xué)檢測發(fā)展史 n1917年巴氏細(xì)胞學(xué)的始祖papanicolaou發(fā)表。 n1928年papanicolaou首次發(fā)表了用陰道抹片診斷子宮癌的 文章。 n1943年， papanicolaou與traut合著陰道涂片診斷子宮癌 瘤一書，從此應(yīng)用陰道脫落細(xì)胞篩查宮頸癌的方法受到 推廣。 npapanicolaou的巴氏五級分類法，在一段相當(dāng)長的時間內(nèi) 作為一種診斷報(bào)告方式。 巴氏i級：完全正常. 巴氏ii級：多見于絕經(jīng)后或育齡伴有宮頸炎癥者,指個別細(xì)胞核 異質(zhì)明顯,但不支持惡

2、性. 巴氏iii級：可疑癌,需馬上做進(jìn)一步確診,大約有10%的幾率向 癌癥發(fā)展. 巴氏iv級：重度可疑癌,全面檢查. 巴氏v級：確定癌. 巴氏巴氏5級分類法主觀因素較多級分類法主觀因素較多,各級之間無嚴(yán)格的客觀標(biāo)準(zhǔn)各級之間無嚴(yán)格的客觀標(biāo)準(zhǔn) 巴氏涂片（巴氏涂片（pap smear） 宮頸脫落細(xì)胞涂片 ，是指從子宮頸部取少量的細(xì)胞樣品，放在玻璃片上， 然后在顯微鏡下研究是否異常。bethesda由美國國家癌癥研究所在地 bethesda召開會議定制的宮頸和引導(dǎo)細(xì)胞病理學(xué)診斷報(bào)告方法，其中包括 涂片滿意度的標(biāo)準(zhǔn)和診斷名稱的定義。 自60多年前問世以來，巴氏涂片使當(dāng)時宮頸癌病發(fā)率在世界范圍 內(nèi)下降了7

3、0% 90%。 巴氏涂片弊端巴氏涂片弊端 采集細(xì)胞數(shù)量不夠，有效細(xì)胞比例更少 轉(zhuǎn)移到玻片上細(xì)胞不具代表性 細(xì)胞堆積重疊，影響視線 粘液、雜質(zhì)、血細(xì)胞未除去，制片質(zhì)量差 人工操作，漏檢率高 傳統(tǒng)巴氏涂片有高達(dá)傳統(tǒng)巴氏涂片有高達(dá)55%假陰性假陰性 tbs（the bethesda system）診斷系統(tǒng)是一種描述性診斷， 1988年美國由50位病理學(xué)家在華盛頓馬里蘭州bethesda 城開會討論宮頸/陰道細(xì)胞學(xué)診斷報(bào)告方式。 tbs診斷系統(tǒng)診斷系統(tǒng) 反映了當(dāng)代對子宮頸癌及前驅(qū)病變的最新認(rèn) 識，提出了統(tǒng)一的診斷術(shù)語，旨在代替應(yīng)用 半個多世紀(jì)的巴氏5級報(bào)告系統(tǒng)； 是統(tǒng)一的，可重復(fù)的，并且富有靈活性的命

4、 名系統(tǒng)； 有利于病理細(xì)胞檢驗(yàn)醫(yī)生與臨床醫(yī)生的溝通。 反映了當(dāng)代對子宮頸癌及前驅(qū)病變的最新認(rèn)識， 提出了統(tǒng)一的診斷術(shù)語，旨在代替應(yīng)用半個多 世紀(jì)的巴氏5級報(bào)告系統(tǒng)； 是統(tǒng)一的，可重復(fù)的，并且富有靈活性的命名 系統(tǒng)； 有利于病理細(xì)胞檢驗(yàn)醫(yī)生與臨床醫(yī)生的溝通。 該診斷系統(tǒng)是目前宮頸細(xì)胞學(xué)最新分類和最權(quán)威該診斷系統(tǒng)是目前宮頸細(xì)胞學(xué)最新分類和最權(quán)威 的診斷標(biāo)準(zhǔn)。的診斷標(biāo)準(zhǔn)。 評估并報(bào)告細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的滿意度。（滿意和不滿意兩大類） 診斷術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)化，不再采用巴氏分級系統(tǒng)。引用術(shù)語：非 典型鱗狀細(xì)胞（asc）、鱗狀上皮內(nèi)病變（sil）和非典型 腺細(xì)胞（agc）。 提出適當(dāng)?shù)慕ㄗh，以利對病變進(jìn)一步評價。 宮頸癌

5、前病變，細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)中使用的不同專業(yè)術(shù)語宮頸癌前病變，細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)中使用的不同專業(yè)術(shù)語 細(xì)胞學(xué)分類 （用于篩查） 組織學(xué)分類 （用于診斷） 巴氏分類法tbscinwho 描述性分類 1級正常正常正常 2級asc-us asc-h 非典型非典型 3級lsilcin 1包括扁平疣凹空細(xì)胞 3級hsilcin 2中度非典型增生 3級hsilcin 3重度非典型增生 4級hsilcin 3原位癌 5級浸潤癌浸潤癌浸潤癌 cin：宮頸上皮瘤變，lsil：低度鱗狀上皮內(nèi)病變，hsil：高度鱗狀上皮內(nèi)病變， asc-us：意義未明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞，asc-h：非典型鱗狀上皮細(xì)胞，不排 除高度鱗狀上

6、皮病變 n薄層制片細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)（thinprep cytologic test, tct )于 1996年獲得美國食品與藥品管理局（fda）認(rèn)證。 n薄層制片細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是通過標(biāo)本采集、細(xì)胞混勻、細(xì) 胞的負(fù)壓過濾膜采集、細(xì)胞轉(zhuǎn)移，制成薄層的玻片；然后 涼干或烘干，常規(guī)巴氏染色。 n該技術(shù)也被定格為膜式技術(shù)。具有代表的廠家有美國新柏 式tct 液液基薄層制片術(shù)（模式）基薄層制片術(shù)（模式） n液基細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)（liquid-based cytologic test,lct ) 于1998年獲得美國食品與藥品管理局（fda）認(rèn) 證。 n液基細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，通過標(biāo)本采集及保存、細(xì) 胞混勻、分離提取診斷細(xì)

7、胞、全自動制片及染色 等過程制作細(xì)胞薄片，全過程均在液體狀態(tài)下完 成，故稱為液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)。 n該技術(shù)為沉降式原理技術(shù)。代表公司有美國bd公 司的lct，國產(chǎn)廣州安必平公司的lbp. 液基薄層制片術(shù)液基薄層制片術(shù)（沉淀式）（沉淀式） 液基細(xì)胞學(xué)制片術(shù)優(yōu)點(diǎn)液基細(xì)胞學(xué)制片術(shù)優(yōu)點(diǎn) 相對于巴氏涂片： 將采集的細(xì)胞保存至保存液中，可收集全部細(xì)胞 轉(zhuǎn)移到切片上的細(xì)胞均勻化，具有代表性 細(xì)胞平整分布、成薄層，無重疊 保存液有效去除粘液、血液、雜質(zhì)，染色出制片結(jié)果清晰，容易診斷 液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)的應(yīng)用液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)的應(yīng)用 婦科：婦科：宮頸疾病診斷 應(yīng)用已非常普遍、1999年進(jìn)入中國已有十幾年歷史 非非婦科：婦科

8、：胸水、腹水、心包液、漿膜腔沖洗液、尿液、痰液、纖維支氣管鏡 刷檢和組織穿刺 相對于婦科應(yīng)用，開展相對晚，開展不夠成熟 液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的婦科應(yīng)用液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的婦科應(yīng)用 在全球，女性的惡性腫瘤中宮頸癌的發(fā)病位居第二，僅次于乳腺 癌，在婦科的惡性腫瘤中發(fā)病率最高。 在中國，每年有8萬女性死于宮頸癌。 早期發(fā)現(xiàn)，可以改變癌癥患者的命運(yùn)。 hpv（人乳頭瘤病毒) 感染是導(dǎo)致宮頸癌的罪魁禍?zhǔn)祝?-哈拉爾德楚爾豪森這一發(fā)現(xiàn)已獲得2008年度諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎 。 hpv持續(xù)感染是宮頸癌的主要致病因素。 99.7%宮頸癌患者存在hpv感染。 子宮頸癌早期治療的5年生存率接近100%， 晚期治療5

9、年生存率為20-50%。 進(jìn)展進(jìn)展 進(jìn)展 一過性感染持續(xù)感染 hpv 正常宮頸 炎癥 癌前病 變 癌 消退消退 感染 數(shù)據(jù)來源：thomas c. wright, jr., m.d., mark schiffman, m.d. adding a test for human papillomavirus dna to cervical-cancer screening. the new england journal of medicine. 2003, 490. 肉眼觀察 子宮頸脫落細(xì)胞巴氏涂片 薄層液基細(xì)胞學(xué)涂片法 hpv dna檢測 陰道鏡檢查 熒光鏡檢法 組織病理診斷 宮頸癌檢測方法宮

10、頸癌檢測方法 美國癌癥協(xié)會（acs）、美國陰道鏡和宮頸病理學(xué)會（asccp）、美國臨床病 理學(xué)會（ascp）宮頸癌篩查最新指南 人群人群篩查方法的建議篩查方法的建議說明說明 21歲以下女性歲以下女性無需篩查 21-29歲女性歲女性每3年一次細(xì)胞學(xué) 30-65歲女性歲女性每5年一次細(xì)胞學(xué)和hpv聯(lián)合檢測不推薦單獨(dú)hpv檢測 65歲以上女性歲以上女性 每3年一次細(xì)胞學(xué) ，此前篩查充分陰性，則無需篩查 既往有cin2、cin3或ais， 應(yīng)繼續(xù)常規(guī)的該年齡段的 篩查，至少進(jìn)行20年 全子宮切除術(shù)后女全子宮切除術(shù)后女 性性 無需篩查 針對沒有宮頸，且在既往 20年中無cin2,、cin3、ais 和宮

11、頸癌病史者 接受接受hpv疫苗的女疫苗的女 性性 依照各年齡段的建議（與未接受免 疫的婦女相同） 宮頸宮頸癌篩查人群及方法癌篩查人群及方法 modified from saslow d, solomon d, lawson hw, killackey m, kulasingam sl, cain j, et al. american cancer society, american society for colposcopy and cervical pathology, and american society for clinical pathology screening guidel

12、ines for the prevention and early detection of cervical cancer. ca cancer j clin. 2012;62(3):147- 72. hpv檢測較細(xì)胞學(xué)檢查更敏感，但特異性較低。不建議對不建議對1000人份/ 月 500人份/月 200人份/月 無病理科無病理科 方法學(xué)方法學(xué) thinprep 泰普 模式 surepath 安必平 沉降式 賽涂 利普 離心涂 片法 方法學(xué)各有優(yōu)劣，不同醫(yī)生偏好不同。目前沉降式多以全自動制片染色 為主。 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) 目前大部分省份具有收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)，收費(fèi)條碼為27080004，詳見收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)文件

13、 省份省份收費(fèi)收費(fèi)省份省份收費(fèi)收費(fèi) 上海150重慶190 浙江120四川208 江蘇150湖南170/140 江西140湖北180 福建180海南150 廣東200北京150 安徽170天津190 云南150河南150 廣西150吉林180 山西150遼寧180 陜西160黑龍江180 貴州？青海180 山東？甘肅180 韓國派氏韓國派氏 e-rep液基細(xì)胞處理液基細(xì)胞處理系統(tǒng)系統(tǒng) 第三代液基制片系統(tǒng)第三代液基制片系統(tǒng)雙層過濾膜雙層過濾膜&沉降式制片沉降式制片 韓國派氏公司2010年成立于韓國 2010年獲得gmp以及醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證。 主要生產(chǎn)經(jīng)營產(chǎn)品為液基產(chǎn)品。 目前在韓國、中國、東南亞

14、、西歐、南非、俄國等有業(yè)務(wù)銷售* 。 該公司為新起的新興公司，品牌價值不高。 2011年正式進(jìn)入中國，并于2011年有產(chǎn)品銷售至中國市場。 2013年獲得儀器和婦科試劑醫(yī)療器械注冊證。 目前在中國有不到10家終端客戶，月銷售超10000測試* 非婦科注冊估計(jì)于2014年年中通過審批 全自動制片機(jī)e-prep已研發(fā)完畢，正在報(bào)證注冊 韓國派氏公司介紹韓國派氏公司介紹 派派氏液基細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)（氏液基細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)（liquid based cytology，lbc） 模式制片：雙層過濾膜，模式雙層過濾膜，模式+沉降式沉降式 半自動制片 制片速度：每次2片，1小時/120片 孔徑20mm 細(xì)胞數(shù)量

15、：不少于5萬個細(xì)胞。取決于標(biāo)本的質(zhì)量，可通 過機(jī)器調(diào)節(jié)細(xì)胞的薄厚、多少。 高25cm 長30cm 寬25cm 派氏液基檢測系統(tǒng)組成派氏液基檢測系統(tǒng)組成 儀器：儀器：e-prep 1000 細(xì)胞保存及輸送用液體 乙醇成分 含血液分離劑 保存細(xì)胞形態(tài) 運(yùn)輸檢測體時使用 mif20過濾瓶 直徑20mm 過濾式及沉淀式 試劑耗材：保存分解液試劑耗材：保存分解液+過濾瓶過濾瓶 其他耗材其他耗材 tct專用防脫載玻片、蓋玻片專用可卸宮頸刷 染色液染色液 巴氏染色巴氏染色液液 蘇木素(harris)染液 橘黃g 染液 ea36 染液或ea50 染液 he染色液染色液 蘇木素 伊紅 其他常規(guī)病理科耗材、試劑其

16、他常規(guī)病理科耗材、試劑 乙醇、封片液、二甲苯 玻璃器皿、玻片架、鑷子 液基細(xì)胞學(xué)操作步驟液基細(xì)胞學(xué)操作步驟 1. 采樣采樣 2. 前處理（婦科震蕩即可，非婦科需要消化震蕩離心）前處理（婦科震蕩即可，非婦科需要消化震蕩離心） 3. 上載玻片、過濾瓶、加載樣本上載玻片、過濾瓶、加載樣本 4. 制片制片 5. 固定、染色固定、染色 6. 閱閱片觀察、發(fā)布結(jié)果片觀察、發(fā)布結(jié)果 手工手工 手工手工 自動自動 1.1.收集收集樣樣本本 6.6.顯顯微微鏡閱鏡閱片片 2.前前處處理（震理（震蕩蕩） 4. 4. 制片制片 3. 3. 上上載過濾載過濾 瓶瓶、載載玻片、玻片、 加加載樣載樣本（本（3 3 mlm

17、l） 5. 5. 固定染色固定染色 制片步驟制片步驟 第一第一層過濾層過濾膜膜 第二第二層過濾層過濾膜膜 1 1過濾過濾& & 抽吸抽吸 粘液和粘液和雜質(zhì)雜質(zhì) 宮頸細(xì)宮頸細(xì)胞胞 3. 3. 插插入玻片入玻片 2. 2. 過濾瓶過濾瓶下移下移 4. 4. 過濾瓶過濾瓶上升上升 6. 6. 制片完成制片完成 e-prep 20mm 5. 5. 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移細(xì)細(xì)胞胞 制片制片原理（專利雙層過濾膜原理（專利雙層過濾膜+沉降式）沉降式） 新柏氏（新柏氏（thin prep 2 000） 韓國佰達(dá)因韓國佰達(dá)因(cell prep plus) 韓國派氏韓國派氏(e-prep)bd surepath 意大利賽涂（

18、意大利賽涂（cyt oneph） 原理過濾膜式 過濾膜式 （空氣壓縮技術(shù)） 過濾模過濾模+沉降式沉降式 （雙層過濾膜）（雙層過濾膜）沉降式離心甩片 保存液主成分甲醇乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇 制片孔徑面積2220201317 是否需要離心視情況視情況視情況必須必須 每輪制片數(shù)量1片1片2片1-48片1-6片？ 制片速度/時30片120片120片40片60片 自動化半自動制片全自動制片半自動制片半自動制片自動制片染色一體半自動制片 所需耗材數(shù)量5種3種4種種9種6種 制片質(zhì)量 配套耗材軟件耗材有、tis系統(tǒng)耗材有、軟件無耗材有、軟件無耗材有、軟件無耗材有、軟件無 制造商 美國賽迪(豪烙捷收 購) 韓國

19、佰達(dá)因medi max pathtch 美國tripath imagin g（bd收購） 意大利hospitek 經(jīng)銷商英碩力達(dá)科為？上海復(fù)星上海復(fù)星直銷？ 北京康思潤業(yè)生物 技術(shù)有限公司 比較比較vs進(jìn)口進(jìn)口 韓國派氏韓國派氏(e-prep) 泰普泰普(tib 1000/ti b 1800) 泰康（泰康（tct2000/30 00/tky-lcta ） 安必平（安必平（lbp）麗拓麗拓（lts-3000a） 原理 過濾模過濾模+沉降式沉降式 （雙層過濾膜）（雙層過濾膜） 過濾模式（仿新 柏氏）/沉淀式 （仿bd） 過濾模式（仿新柏 氏）/沉淀式（仿b d） 沉降式沉降式 保存液主成分乙醇乙醇

20、?？ 制片孔徑面積20mm13mm20mm/13mm13mm13mm 是否需要離心視情況視情況/必須視情況/必須必須必須 每輪制片數(shù)量2片1片/1-24片1片/1-24片1-24片1-8片 制片速度/時120片30片30片50片30片 自動化半自動制片半自動制片 半自動制片/半自 動制片，自動染 色一體 半自動制片/半自 動制片，自動染色 一體 半自動制片、自 動染色 半自動制片、自 動染色 制片質(zhì)量 配套耗材軟件耗材有、軟件無耗材有、軟件無耗材有、軟件無耗材有、軟件無耗材有、軟件無 制造商pathtch福州泰普湖北泰康醫(yī)療達(dá)安收購珠海麗拓 比較比較vs國產(chǎn)國產(chǎn) 數(shù)據(jù)比較解讀一：制片原理數(shù)據(jù)比

21、較解讀一：制片原理 過濾膜式過濾膜式沉降式沉降式離心甩片離心甩片過濾過濾&沉降式沉降式 第二代第三代第三代第三代 通過保存液消化裂 解紅細(xì)胞、粘液。 操作非常方便，快 速 負(fù)壓抽吸原理，沒 有針對性分離細(xì)胞， 并且只有細(xì)胞，閱 片者需要培訓(xùn)。 通過梯度密度離心去除不需 要血液粘液，富集更多有效 細(xì)胞。 操作步驟多，復(fù)雜。 重力自然沉降，不改變細(xì)胞 形態(tài)。 病態(tài)細(xì)胞沉降快，有效細(xì)胞 更多。 制片類似巴氏涂片包括輔助 判斷的診斷成分（腫瘤因 子、有機(jī)體、細(xì)菌、白 細(xì)胞）方便閱片 操作步驟 多，復(fù)雜。 制片類似 過濾模式 融合過濾模式和 沉降式，制片快 速，制片效果好。 獨(dú)特雙層過濾膜， 即通過第一層膜 除去了粘液雜質(zhì) 不必要成分，同 時第二層保留了 有效的診斷成分。 甲醇基質(zhì)保存液甲醇基質(zhì)保存