分子技術(shù)模板試卷

1、.博士班分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課模擬試卷1、你想采用PCR技術(shù)擴(kuò)增pEGFP-N1中綠熒光蛋白（GFP）的序列，通過基因A中的BamH1位點(diǎn)將GFP序列插入基因A的編碼序列中，并保證全長融合蛋白的表達(dá)。請(qǐng)根據(jù)下列信息設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增GFP的引物。 A B .GCCAGTGGGATCCTGATTGCC. Ala Ser Gly Ilu Arg Ilu Ala GGATCC為BamH1位點(diǎn)2、 你在做一個(gè)DNA連接反應(yīng)。經(jīng)酶切回收的質(zhì)粒載體大小為5055 bp、1:50稀釋后測(cè)OD2600.2；插入DNA片段大小為675 bp、1:40稀釋后測(cè)OD2600.1。請(qǐng)按載體DNA與插入DNA片段克分子數(shù)比為1

2、:3和載體DNA總量約0.15 x 10-12 mole計(jì)算，完成下列工作表（每個(gè)核苷酸殘基的平均分子量以330計(jì)）：10x BufferVector DNAInsert DNAH2OT4 ligaseTotal Volume2 ml ml ml ml1 ml20 ml3、下圖是一個(gè)質(zhì)粒圖譜，標(biāo)明其主要構(gòu)件和作用。并根據(jù)構(gòu)建特征，指出該載體的類型和功能特征。提示：pIRES-EGFP contains the internal ribosome entry site (IRES) of the encephalomyocarditis virus (ECMV) between the MCS

3、and the EGFP (enhanced green fluorescent protein) coding region. This permits both the gene of interest (cloned into the MCS) and the EGFP gene to be translated from a single bicistronic mRNA.4、 你從大鼠腦組織中克隆了一個(gè)新基因，并已知是一種膜蛋白，根據(jù)cDNA序列得知氨基酸殘基為882個(gè)，同時(shí)你已制備了特異性單克隆抗體。下圖分別是針對(duì)原核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物、真核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物和大鼠組織樣本的免疫印跡結(jié)果：1、

4、 原核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物2、 原核細(xì)胞對(duì)照3、 真核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物4、 真核細(xì)胞對(duì)照5、 大鼠腦皮層組織6、 大鼠心臟組織請(qǐng)解釋結(jié)果，并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證你的判斷。5、 SARS病毒全基因組測(cè)序和相關(guān)蛋白的鑒定已完成。你想利用pETBlue-2載體表達(dá)SARS棘蛋白（surface spike glycoprotein）作進(jìn)一步研究。你已有SARS病毒RNA、原核表達(dá)載體pETBlue-2、其他相關(guān)試劑和實(shí)驗(yàn)設(shè)備；并知道以下相關(guān)信息如下：SARS棘蛋白的編碼序列（下列為SARS基因組部分序列，棘蛋白序列從21492到25259 bp）：21421 gtaggcttat cattagagaa aacaaca

5、gag ttgtggtttc aagtgatatt cttgttaaca21481 actaaacgaa catgtttatt ttcttattat ttcttactct cactagtggt agtgaccttg 21541 accggtgcac cacttttgat gatgttcaag ctcctaatta cactcaacat acttcatcta 21601 tgaggggggt ttactatcct gatgaaattt ttagatcaga cactctttat ttaactcagg 21661 atttatttct tccattttat tctaatgtta cagggtttc

6、a tactattaat catacgtttg 21721 gcaaccctgt catacctttt aaggatggta tttattttgc tgccacagag aaatcaaatg 21781 ttgtccgtgg ttgggttttt ggttctacca tgaacaacaa gtcacagtcg gtgattatta 21841 ttaacaattc tactaatgtt gttatacgag catgtaactt tgaattgtgt gacaaccctt 21901 tctttgctgt ttctaaaccc atgggtacac agacacatac tatgatattc

7、 gataatgcat 21961 ttaattgcac tttcgagtac atatctgatg ccttttcgct tgatgtttca gaaaagtcag 22021 gtaattttaa acacttacga gagtttgtgt ttaaaaataa agatgggttt ctctatgttt 22081 ataagggcta tcaacctata gatgtagttc gtgatctacc ttctggtttt aacactttga 22141 aacctatttt taagttgcct cttggtatta acattacaaa ttttagagcc attcttacag

8、22201 ccttttcacc tgctcaagac atttggggca cgtcagctgc agcctatttt gttggctatt 22261 taaagccaac tacatttatg ctcaagtatg atgaaaatgg tacaatcaca gatgctgttg 22321 attgttctca aaatccactt gctgaactca aatgctctgt taagagcttt gagattgaca 22381 aaggaattta ccagacctct aatttcaggg ttgttccctc aggagatgtt gtgagattcc 22441 ctaata

9、ttac aaacttgtgt ccttttggag aggtttttaa tgctactaaa ttcccttctg 22501 tctatgcatg ggagagaaaa aaaatttcta attgtgttgc tgattactct gtgctctaca 22561 actcaacatt tttttcaacc tttaagtgct atggcgtttc tgccactaag ttgaatgatc 22621 tttgcttctc caatgtctat gcagattctt ttgtagtcaa gggagatgat gtaagacaaa 22681 tagcgccagg acaaact

10、ggt gttattgctg attataatta taaattgcca gatgatttca 22741 tgggttgtgt ccttgcttgg aatactagga acattgatgc tacttcaact ggtaattata 22801 attataaata taggtatctt agacatggca agcttaggcc ctttgagaga gacatatcta 22861 atgtgccttt ctcccctgat ggcaaacctt gcaccccacc tgctcttaat tgttattggc 22921 cattaaatga ttatggtttt tacaccac

11、ta ctggcattgg ctaccaacct tacagagttg 22981 tagtactttc ttttgaactt ttaaatgcac cggccacggt ttgtggacca aaattatcca 23041 ctgaccttat taagaaccag tgtgtcaatt ttaattttaa tggactcact ggtactggtg 23101 tgttaactcc ttcttcaaag agatttcaac catttcaaca atttggccgt gatgtttctg 23161 atttcactga ttccgttcga gatcctaaaa catctgaaa

12、t attagacatt tcaccttgct 23221 cttttggggg tgtaagtgta attacacctg gaacaaatgc ttcatctgaa gttgctgttc 23281 tatatcaaga tgttaactgc actgatgttt ctacagcaat tcatgcagat caactcacac 23341 cagcttggcg catatattct actggaaaca atgtattcca gactcaagca ggctgtctta 23401 taggagctga gcatgtcgac acttcttatg agtgcgacat tcctattgga

13、 gctggcattt 23461 gtgctagtta ccatacagtt tctttattac gtagtactag ccaaaaatct attgtggctt 23521 atactatgtc tttaggtgct gatagttcaa ttgcttactc taataacacc attgctatac 23581 ctactaactt ttcaattagc attactacag aagtaatgcc tgtttctatg gctaaaacct 23641 ccgtagattg taatatgtac atctgcggag attctactga atgtgctaat ttgcttctcc

14、23701 aatatggtag cttttgcaca caactaaatc gtgcactctc aggtattgct gctgaacagg 23761 atcgcaacac acgtgaagtg ttcgctcaag tcaaacaaat gtacaaaacc ccaactttga 23821 aatattttgg tggttttaat ttttcacaaa tattacctga ccctctaaag ccaactaaga 23881 ggtcttttat tgaggacttg ctctttaata aggtgacact cgctgatgct ggcttcatga 23941 agcaat

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16、aaa caaatcgcca accaatttaa caaggcgatt agtcaaattc 24241 aagaatcact tacaacaaca tcaactgcat tgggcaagct gcaagacgtt gttaaccaga 24301 atgctcaagc attaaacaca cttgttaaac aacttagctc taattttggt gcaatttcaa 24361 gtgtgctaaa tgatatcctt tcgcgacttg ataaagtcga ggcggaggta caaattgaca 24421 ggttaattac aggcagactt caaagcct

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19、 attaacgctt 24961 ctgtcgtcaa cattcaaaaa gaaattgacc gcctcaatga ggtcgctaaa aatttaaatg 25021 aatcactcat tgaccttcaa gaattgggaa aatatgagca atatattaaa tggccttggt 25081 atgtttggct cggcttcatt gctggactaa ttgccatcgt catggttaca atcttgcttt 25141 gttgcatgac tagttgttgc agttgcctca agggtgcatg ctcttgtggt tcttgctgca 25201 agtttgatga ggatgactct gagccagttc tcaagggtgt caaattacat tacacataaa25261 cgaacttatg gatttgttta tgagattttt tactcttgga tcaattactg cacagccagtpETBlue-2載體圖譜和MCS區(qū)的序列細(xì)節(jié)（提示：這是一個(gè)克隆和表達(dá)型載體，插入基因的表達(dá)靠T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，與用于重組子篩選的E.coli啟動(dòng)子方向相反。因而，插入多克隆位點(diǎn)的編碼序列的