微生物實驗室培養(yǎng)

1、 微生物的培養(yǎng)和應用微生物的培養(yǎng)和應用課題課題1 1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉請判斷： 1.微生物都是原核生物微生物都是原核生物 （ ） 2.微生物肉眼都看不見微生物肉眼都看不見 （ ）微生物微生物包括哪五類包括哪五類：真菌真菌原生動物原生動物 原核原核 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界真核真核一 培養(yǎng)基及無菌技術 1.培養(yǎng)基可以分為哪些類型？ 2.培養(yǎng)基的基本營養(yǎng)成分分別是什么？ 3.無菌技術的方法包含哪些內容？一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基1 1、概念：、概念： 人們按照微生物對人們按照

2、微生物對營養(yǎng)物質營養(yǎng)物質的不同需求，的不同需求，配置出供其配置出供其生長繁殖生長繁殖的營養(yǎng)基質。的營養(yǎng)基質。 一般都含有一般都含有 四類物質，四類物質，此外還要滿足微生物生長對此外還要滿足微生物生長對 、 以及以及 的的要求。要求。 2 2、營養(yǎng)成分：、營養(yǎng)成分：碳源、氮源、水、無機鹽碳源、氮源、水、無機鹽 pH pH 特殊營養(yǎng)物質特殊營養(yǎng)物質 O O2 2 3 3、分類：、分類： 按照物理性質劃分培養(yǎng)基按照物理性質劃分培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基主要用于微生物主要用于微生物的的分離分離、鑒定鑒定等等主要用于觀察微生物主要用于觀察微生物的運動、保藏菌

3、種等的運動、保藏菌種等主要用于工業(yè)生產主要用于工業(yè)生產培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類 按用途劃分按用途劃分基礎培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基：鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :含有一般微生物生長繁殖所需的基本營含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質的培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）養(yǎng)物質的培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）用來將某種或某類微生物從混雜的微生物用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中群體中分離出來的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中加加入特殊營養(yǎng)物質或化學物質入特殊營養(yǎng)物質或化學物質，有利于特定有利于特定微生物的生長，同時抑制其它微生物的生微生物的生長，同時抑制其它微生物的生長長。如。如 的培養(yǎng)基的

4、培養(yǎng)基。選擇選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基。微用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基。微生物產生某種代謝產物，與培養(yǎng)基中的生物產生某種代謝產物，與培養(yǎng)基中的特殊化學物質發(fā)生特殊化學物質發(fā)生特定的化學反應特定的化學反應，產，產生明顯的特征變化。生明顯的特征變化。以尿素為唯一氮源、以尿素為唯一氮源、選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有

5、機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 例例1關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是: A.是碳源的物質不可能同時是氮源是碳源的物質不可能同時是氮源 B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.除水以外的無機物只提供無機鹽除水以外的無機物只提供無機鹽 D.無機氮源也能提供能量無機氮源也能提供能量二、無菌技術二、無菌技術（1 1）對實驗操作的）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手空間、操作者的衣著和手，進行，進行 。（2 2）將用于微生物培養(yǎng)的）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行等器具進行 . .（3 3）為避免周

6、圍環(huán)境中微生物的污染，）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作實驗操作應在應在酒精燈火焰酒精燈火焰 附近進行附近進行。（4 4）實驗操作時應）實驗操作時應避免避免已經滅菌處理的材料用具已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品與周圍的物品 相接觸相接觸。 清潔和清潔和消毒消毒滅菌滅菌目的：防止實驗室的培養(yǎng)物目的：防止實驗室的培養(yǎng)物 ；同時避免操作者自身被微生物感染。同時避免操作者自身被微生物感染。 被其他微生物污染被其他微生物污染消毒消毒滅菌滅菌概念概念指使用指使用較為溫和較為溫和的物理或化的物理或化學方法僅殺死物體表面或內學方法僅殺死物體表面或內部部的的 微生物微生物( (不包括不包括 ) )指使用

7、指使用強烈強烈的理化因素的理化因素殺死物體內外殺死物體內外 微生微生物，包括物，包括 。常用常用方法方法適用適用對象對象操作空間、液體、雙手等操作空間、液體、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃接種環(huán)、接種針、玻璃器皿，培養(yǎng)基等器皿，培養(yǎng)基等部分部分芽孢和孢子芽孢和孢子所有所有芽孢和孢子芽孢和孢子煮沸消毒法、煮沸消毒法、 巴氏消毒法巴氏消毒法 化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法、 紫外線紫外線消毒法消毒法灼燒滅菌、灼燒滅菌、 干熱滅菌干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌煮沸煮沸消毒消毒法：法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：化學藥劑：化學藥劑：紫外線：紫外線：針對不耐高溫的液體針對不耐高溫的液體接種室、超凈工作臺接種

8、室、超凈工作臺培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿.吸管等玻璃器皿吸管等玻璃器皿耐高溫、需保持干燥耐高溫、需保持干燥灼燒滅菌：灼燒滅菌：干熱滅菌：干熱滅菌：高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌：接種環(huán)等金屬工具接種環(huán)等金屬工具實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手培養(yǎng)基培養(yǎng)基1 1、消毒方法、消毒方法2、滅菌方法、滅菌方法 例例2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是: A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.消滅雜菌消滅雜菌 C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板三、微生物培養(yǎng)的實驗操作三、微生物培養(yǎng)的實驗操作1、制

9、備培養(yǎng)基、制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基純化大腸桿菌純化大腸桿菌1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050左右時，才能用來倒平板。左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？用手觸摸，剛剛不燙手時用手觸摸，剛剛不燙手時2.2.為什么需要使錐形瓶的為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰瓶口通過火焰？灼燒滅菌，防止瓶口的微生物的污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物的污染有關問題有關問題防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。3.3.為什么將為什么將平板倒置平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基

10、濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌平板劃線法平板劃線法: :稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法: :(1)(1)接接種種方方法法.連續(xù)劃線，連續(xù)劃線，.逐步稀釋逐步稀釋.梯度稀釋，梯度稀釋，.分別涂布分別涂布.將接種環(huán)放在火將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到焰上灼燒，直到接

11、種環(huán)接種環(huán)_在在_旁冷旁冷卻接種環(huán)，并卻接種環(huán)，并打開棉塞打開棉塞 將試管口通過火焰將試管口通過火焰 .將已將已_的接種環(huán)伸的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液入菌液中蘸取一環(huán)菌液 左手將皿蓋打開一條縫隙，右手左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內，板內，劃劃_條平行線，條平行線，蓋上皿蓋。注意蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基不要劃破培養(yǎng)基。.將試管通過火將試管通過火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷卻冷卻三至五三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的第一區(qū)域劃線的_開始開始往第二區(qū)域內劃線。重復以上往第二區(qū)域內劃線

12、。重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內劃操作，在三、四、五區(qū)域內劃線。注意線。注意不要將最后一區(qū)的劃不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連線與第一區(qū)相連。末端末端燒紅燒紅將平板將平板_放放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 倒置倒置 1).1).為什么在操作的第一步以及每次劃線之為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒每次劃

13、線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 2).2).在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等

14、其冷卻后再進行劃線？冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3).3).在作第二次以及其后的劃線操作時，在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數目比線答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。的菌落。將涂布器浸將涂布器浸在盛有酒

15、精在盛有酒精的燒杯中的燒杯中 取少量稀釋液滴取少量稀釋液滴加到培養(yǎng)基表面加到培養(yǎng)基表面 待酒精燃盡后待酒精燃盡后冷卻冷卻8 810s 10s 將沾有少量酒將沾有少量酒精的涂布器在精的涂布器在火焰上引燃火焰上引燃灼灼燒燒用涂布器將菌液均勻地用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉動培養(yǎng)皿，使布時可轉動培養(yǎng)皿，使涂布均勻涂布均勻稀稀釋釋涂涂布布平平板板法法(3)(3)菌種培養(yǎng)：菌種培養(yǎng)：將接種的培養(yǎng)基（至少將接種的培養(yǎng)基（至少3 3個）和一個未個）和一個未接種的培養(yǎng)基接種的培養(yǎng)基倒置放入倒置放入3737的恒溫箱中。的恒溫箱中。(4)(4)實驗結果觀察實驗結果觀察: :

16、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？ 菌落的形態(tài)、大小、顏色？菌落的形態(tài)、大小、顏色？(5)(5)菌株的保存方法菌株的保存方法4 4冰箱保藏冰箱保藏甘油管藏（甘油管藏（-20-20）臨時保存：臨時保存：長期保存：長期保存：固體斜面固體斜面純化大腸桿菌的實驗是否需要設置對照實驗？純化大腸桿菌的實驗是否需要設置對照實驗？ 1. 用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時時() 可以用相同的培養(yǎng)基可以用相同的培養(yǎng)基 都需要使用接種針進行接種都需要使用接種針進行接種 都需要在酒精燈火焰旁進行接種都需要在酒精燈火焰旁進行接種 都可以

17、用來計數活菌都可以用來計數活菌 A.B.C.D.C編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml2 2右表是某微生物培右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據此回答：養(yǎng)基成分，請據此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是養(yǎng)的微生物類型是 （2 2）若不慎將過量）若不慎將過量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此

18、培養(yǎng)基，如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 . .用于培養(yǎng)用于培養(yǎng) 金黃色葡萄金黃色葡萄球菌球菌. 自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機物含碳有機物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2OO），該培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營養(yǎng)成分共有）表中營養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是裝前，要進行的是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應該增加的）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應該增加的成分是

19、成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 調整調整pHpH 依微生物的生長需要確定依微生物的生長需要確定 瓊脂（或凝固劑瓊脂（或凝固劑） 四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌落生長，后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落

20、的特點，則說明接種操作是符合要求的；如并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未果培養(yǎng)基上出現了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。達到要求，需要分析原因，再次練習。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現這一點，并能觀察到其他一些細微的及時觀察記錄的同學會發(fā)現這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要

21、是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。本課題知識小結本課題知識小結: :1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存課題課題2 2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數一、篩選菌株一、篩選菌株無機鹽無機鹽碳源碳源氮源氮源凝固劑凝固劑尿素是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基尿素是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基二、統計菌落數目二、統計菌落數目用什么方法統計？用什么方法統計？稀釋涂

22、布平板法稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數顯微鏡直接計數一般選擇菌落數在一般選擇菌落數在 的平板進行計數。的平板進行計數。統計菌落數往往比活菌的實際數目統計菌落數往往比活菌的實際數目 。 30-300低低（酵母菌）血球板計數法（酵母菌）血球板計數法 2.2.計算公式計算公式 每克樣品中的菌落數每克樣品中的菌落數（C CV V）M M，其中，其中C C代表代表某一稀釋度下平板上生長的某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數平均菌落數，V V代表涂布代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（平板時所用的稀釋液的體積（mLmL），），M M代表稀釋倍數。代表稀釋倍數。 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法統計菌落數目統計菌落數

23、目1.1.理論依據：理論依據：恰當的稀釋度恰當的稀釋度是成功地統計菌落數目的關鍵。是成功地統計菌落數目的關鍵。為了保證結果準確，通常將為了保證結果準確，通常將幾個稀釋度幾個稀釋度下的菌液都下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數在涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數在3030300300的平的平板進行計數。板進行計數。三、設置對照三、設置對照目的：目的：排除無關變量（非測試因素）的影響，排除無關變量（非測試因素）的影響，提高實驗結果的可信度。提高實驗結果的可信度。(1)(1)空白對照：空白對照：培養(yǎng)基是否有雜菌污染培養(yǎng)基是否有雜菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照：牛肉膏蛋白胨培

24、養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照： 選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用。 選擇培養(yǎng)基上的菌落數較少。選擇培養(yǎng)基上的菌落數較少。四、實驗設計四、實驗設計土壤土壤取樣取樣制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基樣品樣品稀釋稀釋涂布涂布培養(yǎng)培養(yǎng)觀察觀察統計統計 1. 1.取樣時，一般要鏟去表層土。取樣時，一般要鏟去表層土。 2.2.分別制備分別制備 的的選擇性培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基和牛肉膏牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基蛋白胨培養(yǎng)基（判斷選擇培養(yǎng)基是篩選出分解尿素的細菌）（判斷選擇培養(yǎng)基是篩選出分解尿素的細菌） 3.3.不同的微生物要采用不同的稀釋度。不同的微生物要采用不同的稀釋度。 4.4.每個稀釋度需倒每個稀釋度需倒6 6個平板

25、：個平板： 4 4個選擇性培養(yǎng)基，個選擇性培養(yǎng)基，3 3個涂布，個涂布，1 1個空白；個空白； 2 2個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，一個涂布，一個空白。個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，一個涂布，一個空白。以尿素為唯一氮源以尿素為唯一氮源 將待測樣品經一系列將待測樣品經一系列1010倍稀釋，然后選擇倍稀釋，然后選擇三個稀釋度三個稀釋度的菌液，的菌液，分別取分別取0.1 0.1 mLmL接種到已制備好的平板上，將接種到已制備好的平板上，將同一稀釋度同一稀釋度加到加到三三個或三個以上的平板上；個或三個以上的平板上；培養(yǎng)后，培養(yǎng)后，計算出同一稀釋度菌落平均計算出同一稀釋度菌落平均數數。三重復組三重復組求平均值求平均值使

26、結果更使結果更準確準確五、實驗結果的分析、評價五、實驗結果的分析、評價(1)(1)空白對照：空白對照：是否有雜菌污染是否有雜菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照： 選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用。選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用。 選擇培養(yǎng)基上的選擇培養(yǎng)基上的菌落數較少菌落數較少。 結果：結果： 酚紅指示劑變酚紅指示劑變_，初步鑒定該細菌能夠分解尿素初步鑒定該細菌能夠分解尿素 操作：操作：在以在以_為唯一氮源的培養(yǎng)基中為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入加入 。尿素尿素（鑒別培養(yǎng)基）（鑒別培養(yǎng)基）紅色紅色六、實驗結果的鑒定六、實驗結果的鑒定酚紅指示劑酚紅指示劑菌落細菌

27、的菌落特征細菌的菌落特征因種而異因種而異 課題課題2 2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數一、篩選菌株一、篩選菌株無機鹽無機鹽碳源碳源氮源氮源凝固劑凝固劑尿素是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基尿素是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基二、統計菌落數目二、統計菌落數目用什么方法統計？用什么方法統計？稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數顯微鏡直接計數一般選擇菌落數在一般選擇菌落數在 的平板進行計數。的平板進行計數。統計菌落數往往比活菌的實際數目統計菌落數往往比活菌的實際數目 。 30-300低低（酵母菌）血球板計數法（酵母菌）血球板計數法 2.2.計算公式計算公式 每克樣品中的菌落數每克

28、樣品中的菌落數（C CV V）M M，其中，其中C C代表代表某一稀釋度下平板上生長的某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數平均菌落數，V V代表涂布代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（平板時所用的稀釋液的體積（mLmL），），M M代表稀釋倍數。代表稀釋倍數。 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法統計菌落數目統計菌落數目1.1.理論依據：理論依據：恰當的稀釋度恰當的稀釋度是成功地統計菌落數目的關鍵。是成功地統計菌落數目的關鍵。為了保證結果準確，通常將為了保證結果準確，通常將幾個稀釋度幾個稀釋度下的菌液都下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數在涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數在3030300300的平的

29、平板進行計數。板進行計數。三、設置對照三、設置對照目的：目的：排除無關變量（非測試因素）的影響，排除無關變量（非測試因素）的影響，提高實驗結果的可信度。提高實驗結果的可信度。(1)(1)空白對照：空白對照：培養(yǎng)基是否有雜菌污染培養(yǎng)基是否有雜菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對照： 選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用選擇培養(yǎng)基是否有選擇作用。 選擇培養(yǎng)基上的菌落數較少。選擇培養(yǎng)基上的菌落數較少。四、實驗設計四、實驗設計土壤土壤取樣取樣制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基樣品樣品稀釋稀釋涂布涂布培養(yǎng)培養(yǎng)觀察觀察統計統計 1. 1.取樣時，一般要鏟去表層土。取樣時，一般要鏟去

30、表層土。 2.2.分別制備分別制備 的的選擇性培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基和牛肉膏牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基蛋白胨培養(yǎng)基（判斷選擇培養(yǎng)基是篩選出分解尿素的細菌）（判斷選擇培養(yǎng)基是篩選出分解尿素的細菌） 3.3.不同的微生物要采用不同的稀釋度。不同的微生物要采用不同的稀釋度。 4.4.每個稀釋度需倒每個稀釋度需倒6 6個平板：個平板： 4 4個選擇性培養(yǎng)基，個選擇性培養(yǎng)基，3 3個涂布，個涂布，1 1個空白；個空白； 2 2個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，一個涂布，一個空白。個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，一個涂布，一個空白。以尿素為唯一氮源以尿素為唯一氮源 將待測樣品經一系列將待測樣品經一系列1010倍稀釋，然后選擇倍稀釋，然后選擇三個稀釋度三個稀釋度的菌液，的菌液，分別取分別取0.1 0.1 mLmL接種到已制備好的平板上，將接種到已制備好的平板上，將同一稀釋度同一稀釋度加到加到三三個或三個以上的平板上；個或三個以上的平板上；培養(yǎng)后，培養(yǎng)后，計算出同一稀釋度菌落平均計算出同一稀釋度菌落平均數數。三重復組三重復組求平均值求平均值使結果更使結果更準確準確五、實驗結果的分析、評價五、實驗結果的分析、評價(1)(1)空白對照：空白對照