斐林試劑和雙縮脲試劑應該如何使用

1、斐林試劑和雙縮脲試劑應該如何使用 一道高考試題帶來的思考人教版必修1分子與細胞中斐林試劑為質(zhì)量濃度為0.1%NaOH 和0.05%CuS4組成，使用時兩者先要1:1混合；雙縮脲試劑為質(zhì)量濃 度為0.1%NaOI和0.01%CuSC組成，使用時先要加雙縮脲試劑 A液(0.1%NaOH 1ml，再滴加 3-4 滴雙縮脲試劑 B(0.01%CuSO。筆者在看到2017年一道高考試題的D選項時產(chǎn)生了疑問，高考 試題如下：2017全國I卷2.下列關(guān)于細胞結(jié)構(gòu)與成分的敘述，錯誤的是()A. 細胞膜的完整性可用臺盼藍染色色法進行檢測B. 檢測氨基酸的含量可用雙縮脲試劑進行顯色C. 若要觀察處于細胞分裂中期的

2、染色體可用醋酸洋紅液染色D. 斐林試劑是含有Cf的堿性溶液，可被葡萄糖還原成磚紅色 疑問：既然斐林試劑和雙縮脲試劑的成分相同， 原理都是堿性條件下 的Cf與還原糖和蛋白質(zhì)反應，那么在檢測還原糖和蛋白質(zhì)時斐林試 劑和雙縮脲試劑能否互換使用，與加入NaOH和 CuSQ的量和先后順序 有無關(guān)系呢？為了解答疑問，筆者分別做了還原糖和蛋白質(zhì)的檢測實 驗。一、還原糖的檢測待測組織樣液：早酥梨研磨液實驗步驟與實驗結(jié)果：組織-組別12345678-2ml早酥梨研磨液樣液檢測試劑0.1%NaOH 和 0.05%CuSQ0.1%NaOH0.01%CuSQ0.05%CuSO4試劑用量0.5mlNaOH；0.5mlC

3、uSQ0.5ml NaOH;0.5mlCuSC40.5mlNaOH；0.5mlCuSQ0.5mlNaOH； 4滴CuSQ4滴NaOH；0.5mlCuSC40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；1mlCuSO41mlCuSQ試劑使 用順序NaOH 和CuSQ混合先加NaOH后加CuSQ先加CuSQ后加NaOHNaOH和CuSQ混合NaOH和CuSO4混合NaOH 和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合條件5065 C水浴加熱現(xiàn)象磚紅色 沉淀磚紅色 沉淀磚紅色沉淀磚紅色 沉淀 （顏色 淺）磚紅色沉淀棕色磚紅色 沉淀（顏色 淺）藍色結(jié)果分析：1. 從1、2、3組實驗結(jié)果來看斐

4、林試劑中無論 NaOH和CuSO昆合使用， 還是先加NaOHB加CuSO,或者先加CuSO后加NaOH都會出現(xiàn)磚紅色 沉淀，并且顏色差異不明顯；2. 比較1、4、5組結(jié)果，CuSO勺用量對顏色深淺的影響較大，而NaOH 的用量對顏色影響不明顯；3. 分析1、6、7組結(jié)果，適當提高質(zhì)量濃度為0.01%CuSO勺用量也可 以出現(xiàn)磚紅色沉淀。結(jié)論：1. 用斐林試劑和雙縮脲試劑都能檢測還原糖；2. 檢測還原糖時與NaOH和CuSQ使用順序沒有太大關(guān)系；3. 如果不營造堿性環(huán)境，不會出現(xiàn)磚紅色；4. 在堿性環(huán)境中，如果Cf的濃度過低，不會出現(xiàn)磚紅色，隨著 Cf濃度的提高逐漸出現(xiàn)磚紅色，并且顏色會逐漸加深

5、。二、蛋白質(zhì)的檢測待測組織樣液：蛋清稀釋液實驗步驟和實驗結(jié)果：組別1234567組織樣液2ml蛋清稀釋液檢測試劑0.1%NaOH 和 0.01%CuSQ0.1%NaOH0.05%CuSQ0.01%CuSQ試劑用量1mlNaOH； 2滴CuSQ0.5mlNaOH； 2滴CuSQ3滴NaOH；2滴CuSC41mlNaOH； 2滴CuSO41滴 NaOH;2滴CuSQ3滴NaOH；2滴CuSQ2滴CuSQ試劑使用 順序先加NaOH 后 加 CuSQNaOH 和CuSQ混合先加CuSQ 后 加 NaOH先加NaOH 后 加 CuSQ混合先加CuSQ后加NaOH先加CuSQ后加NaOH現(xiàn)象紫色紫色紫色紫

6、色（深）紫色（深）紫色（深）藍色現(xiàn)象分析：1. 從第7組結(jié)果得出如果不制造堿性環(huán)境，不會產(chǎn)生紫色；2.1、2、3組比較只要能制造堿性環(huán)境，都能出現(xiàn)紫色，與NaOH和CuSO的添加順序無關(guān)；3.從4、5、6組可以看出斐林試劑也能檢測蛋白質(zhì)， 而且紫色要比1、2、3組要深。結(jié)論：1. 斐林試劑和雙縮脲試劑都能檢測蛋白質(zhì)；2. 無論先加NaOH還是先加CuSO或者兩者混合加入都能產(chǎn)生紫色；3. 使用0.05%CuSO要比使用0.01%CuS4產(chǎn)生的紫色顏色更深，更接近于藍色。原理分析：在堿性條件下，cf氧化性增強，能夠氧化還原糖中的醛基，同 時cf被還原為磚紅色的CuO沉淀，只要保證營造堿性條件，有足夠 多的CcT被還原為CuO就能出現(xiàn)磚紅色沉淀。雙縮脲試劑原本是檢測 雙縮脲（NHkCO-NH-CO-NH的試劑，而蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CO-NH-） 的結(jié)構(gòu)和雙縮脲的結(jié)構(gòu)非常相似，在堿性條件下與 CiT產(chǎn)生紫色的絡 合物，所以可以用雙縮脲試劑檢測三肽或三肽以上的化合物， 在堿性 條件下Cf與蛋白質(zhì)中的肽鍵形成紫色的絡合物。實驗綜合分析：1. 斐林試劑和雙縮脲試劑都能檢測還原糖和蛋白質(zhì)；2. 在檢測還原糖時如果用0.01%CuSO需要加大用量，否則可能不會 產(chǎn)生磚紅色或者顏色太淺；3. 在檢測蛋白質(zhì)時用0.01%CuSO是紫色淺，易于觀察；而用 0.05%CuSO時顏色太重，反倒不宜觀