臨床血液學檢驗操作規(guī)程G

1、臨床血液學檢驗標準操作規(guī)程文件編號編制部門檢驗科發(fā)布日期2004 年 9 月 28 日實施日期2004 年 10 月 8 日版本2.0頁數(shù)共 X 頁編制張淑芳審核梁勇批準朱才義文件受控號文件修訂稿修 訂 記 錄修訂 版次修訂 日期頁碼對應(yīng) 條款修訂內(nèi)容批準淄博萬杰腫瘤醫(yī)院檢驗科1. 血液一般檢驗1.1適用范圍適用于檢驗科血液常規(guī)檢驗操作1.2基本操作規(guī)程1.2.1血液標本采集1.2.1.1末稍血標本采集：(1)采血部位：成人以左手無名指為宜，嬰幼兒通常自拇指或足跟兩側(cè)采血。(2)輕輕按摩采血部位，使其自然充血。用 75%酒精棉球消毒局部皮膚，待干。(3)緊捏刺血部位，用一次性無菌刺血針穿刺取血

2、。動作應(yīng)迅速，深度約 23 ，稍加擠壓，以血液能流出為宜。(4)用干棉球擦去第一滴血，按需要依次采血。(5)采血完畢，用消毒干棉球壓住傷口止血片刻。 參考：葉應(yīng)嫵等主編 .全國臨床檢驗操作規(guī)程 (第二版) .第 1 頁 .1997.1.2.1.1靜脈血標本采集： 靜脈血標本采集主要由申請檢驗科室的護士完成(參見相應(yīng)操作規(guī)程) 。 真空(負壓)采血技術(shù)已經(jīng)成為歐美國家血液采集技術(shù)標準，中華醫(yī)學會檢驗 醫(yī)學分會鼓勵在全國推廣真空(負壓)采血技術(shù)。1.2.2血液常規(guī)檢驗(1)標本接收和標本采集1)血常規(guī)檢驗采用2抗凝的靜脈血或末梢血標本。2)血常規(guī)檢驗應(yīng)盡量采用靜脈血標本；對特殊患者(如新生兒、必須

3、為治療 保留靜脈血管的腫瘤患者等) ，可以采用末梢血標本。3)檢驗人員在接收臨床血常規(guī)檢驗標本時，應(yīng)對送檢標本和檢驗申請單進行 認真核查，并對不合格標本和不合格檢驗申請單作相應(yīng)處理。(2)基本操作步驟1)對檢驗申請單和標本管作對應(yīng)編號；2)將血標本充分混勻；3)按照血細胞分析儀操作規(guī)程上機檢測、打印結(jié)果。(3)結(jié)果分析和報告1)檢驗人員應(yīng)參照血常規(guī)檢驗參考值指標和臨床診斷審核檢驗結(jié)果。如發(fā)現(xiàn) 與臨床診斷不符的檢驗結(jié)果，或有以下異常結(jié)果，應(yīng)對標本進行復(fù)查：A. 血紅蛋白低于 100 或高于 180B. 白細胞低于 3.0X109或高于 20X109(新生兒例外)C. 血小板低于 80X109或高

4、于 450X109D. 白細胞分類比例異常，且與臨床診斷不符2)急診血常規(guī)檢驗應(yīng)在標本送達后半小時內(nèi)發(fā)出檢驗報告。123 手工法血細胞分析123.1 白細胞計數(shù) 取小試管一支，加白細胞稀釋液 0.38。用微量吸管準確吸取末稍血 20，擦去管尖外部余血，將吸管插入試管中稀釋 液底部，輕輕將血放出，并吸取上層清液反復(fù)嗽洗吸管二次，最后用手搖動試 管混合。 充池，靜置 23，待白細胞下沉后，用低倍鏡計數(shù)四角4 個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)。 計算 白細胞=4 個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)X50X106參考值：成人4X109 10X109兒童5X109 12X109新生兒15X109 20X109參考：葉應(yīng)嫵等主編

5、.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 45 頁.1997.1.2.3.2 白細胞分類計數(shù)（1）采血后推制厚薄適宜的血膜片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分。 推好的血膜在空氣中待干，天氣寒冷或潮濕時，應(yīng)于 37r保溫促干，以免細胞 變形縮小。染色1） 瑞氏-姬姆薩法：平置血膜片于染色架上，滴加染液 35 滴，使其迅速蓋滿 血膜約 1后，滴加緩沖液 510 滴，輕輕搖動玻片或?qū)恃禋?，與染 液充分混合，510后用水沖去染液待干。2） 選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域，在油鏡下計數(shù) 100 個白細胞，按 其形態(tài)特征進行分類計數(shù)，求出各類細胞所占比值（百分率）。參考值細胞類別成人中性粒細胞 桿

6、狀核 分葉核1% 5%50% 70%嗜酸性粒細胞0.5% 5%嗜堿性粒細胞0% 1%淋巴細胞20% 40%單核細胞3% 8%（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 56 頁.1997.）1.2.3.3 血小板計數(shù)（1）取清潔試管，加入血小板（草酸銨法）稀釋液 0.38。準確吸取毛細管血 20，擦去管尖附著血液，置于血小板稀釋液內(nèi)，立即充分 混勻，待完全溶血后，再次混勻 1。 取上述均勻的血小板懸液 1 滴，注入血球計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi)。 靜置 1015，使血小板下沉。 用高倍鏡計數(shù)中央 1 個大方格（400 個小格）內(nèi)血小板，乘以 0.2X109即為每 升血液內(nèi)血小板數(shù)。（在相差顯微鏡或暗視野顯

7、微鏡下進行血小板計數(shù)，效果 更佳）（6）參考值：100300X109（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 22 頁.1997.）123.4 嗜酸性粒細胞直接計數(shù)（1）操作1） 小試管中加液或乙醇-伊紅稀釋液 0.38。2） 常法取末稍 20，加入管內(nèi)混勻，待紅細胞溶解后兩側(cè)充池。3） 靜置 35，用低倍鏡（必要時用高倍鏡）鏡下計數(shù)10 個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)。計算與報告10 個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)X20X106=嗜酸性粒細胞參考值：50300X10（50300）（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 11 頁.1997.）1.2.3.5 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（1）基本操作1） 于小管中滴加

8、 1 滴 1%的煌焦油藍生理鹽水溶液。2） 加入末稍血 2 滴于上述試管中混勻。3） 靜置 1520 后，取用 1 滴制成薄血片。4）油鏡下檢查 1000 個紅細胞中網(wǎng)積紅細胞數(shù)，以百分率或絕對值報- 參考值：成人0.51.5%新生兒3.06.0%（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 1415 頁.1997.）1.2.3.6 嗜堿性點彩紅細胞計數(shù)（1）基本操作1） 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定 3。2） 堿性亞甲基藍染液 12，水洗、待干。3） 油鏡下檢查 1000 個紅細胞中嗜堿性點彩紅細胞數(shù)，以百分率報告。（2）參考值：V0.01%（V100/ 106紅細胞）（參考全國臨床

9、檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 16 頁.1997.）1.2.3.7 異常紅細胞檢查（1）大小異常正常紅細胞大小一致，直徑為 69，在各種貧血時，紅細胞可出現(xiàn)大小不一，凡直徑10者稱大細胞，15 者稱巨紅細胞，常見于巨幼細胞性貧血、肝臟 疾病等；直徑V6 者稱小細胞，多見于缺鐵性貧血病。（2）形態(tài)異常1）球形紅細胞紅細胞直徑通常V6，厚度增加，通常2.6，因而紅細胞呈小圓球形， 細胞中心區(qū)血紅蛋白含量較正常紅細胞多，常見于下列疾病：A.遺傳性球形紅細胞增多癥；B.自身免疫性溶血性貧血；C.異常血紅蛋白病(及病等)2)橢圓形紅細胞 紅細胞呈橢圓形，橫徑縮短，長徑增大，有時可呈畸形。正常人血液中也可見

10、到，但最多不超過 15%。這種紅細胞增多見于：A.遺傳性橢圓形紅細胞增多癥，一般要高于 25%50%才有診斷價值。B.大細胞性貧血，可達到 25%。C.其他各類貧血都可有不同程度的增多。3)靶形紅細胞比正常紅細胞扁薄， 中心有少許血紅蛋白， 部分可與周圍的血紅蛋白連接， 邊緣部染色深，故呈靶狀。主要見于：A.地中海貧血；B.嚴重缺鐵性貧血；C.一些血紅蛋白病(血紅蛋白 C、D、E、S 病)；D.肝病、脾切除后阻塞性黃疸等。4)鐮形紅細胞 細胞狹長似鐮刀，也可呈麥粒狀或冬青葉樣。主要見于遺傳性鐮形紅細胞 增多癥。5)口形紅細胞紅細胞淡染區(qū)呈裂口狀狹孔。正常V4%。增高見于：A.口形紅細胞增多癥；

11、B.急性乙醇中毒。6)棘形紅細胞 棘形紅細胞是一種帶刺狀的紅細胞，刺呈針刺狀或尖刺狀，見于：A.棘紅細胞增多癥(遺傳性血漿B-脂蛋白缺乏癥)，可高達 70%80%B.嚴厲重肝病或制片不當。7)皺縮紅細胞 紅細胞表面有圓形棘樣突起，可見于干燥太慢的血片，也可見一于急性鉛 中毒，尿中毒癥等病人的血片上。8)鋸齒細胞 也稱刺毛細胞，形態(tài)和皺縮細胞相似。主要見于尿毒癥、微血管病性溶血 性貧血、丙酮酸激酶缺乏癥、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥等。9)裂片細胞 指紅細胞碎片，包括盔形紅細胞等，多見于、微血管病性溶血性貧血和心 原溶血性貧血等紅細胞破碎綜合征。其他也見于化學中毒、腎功能不全、血栓性血小板減少性紫癜

12、等。(3)染色異常1)著色過淺 紅細胞中心淡染區(qū)擴大，多見于缺鐵性貧血、地中海貧血及其他血紅蛋白 病。2)著色過深中心淡染區(qū)不見，著色過深，多見于先天性溶血性貧血及大細胞性貧血患 者。3)嗜多色性紅細胞 紅細胞染成灰藍色、灰紅色、淡灰色，較正常紅細胞稍大。這是一種尚未 完全成熟的紅細胞，多染性物質(zhì)是核糖體，隨著細胞的成熟而逐漸消失，主要見增生性貧血。(4)結(jié)構(gòu)異常1)嗜堿性點彩紅細胞 用亞甲基藍染色，成熟紅細胞胞漿內(nèi)有散在的深藍色嗜堿性顆粒，外周血 中有點彩紅細胞增多，表示貧血時骨髓再生旺盛或有紊亂現(xiàn)象。某些重金 屬中毒時，可大量出現(xiàn)。2)卡波環(huán)成熟紅細胞漿內(nèi)有染成紫紅色的細線狀環(huán)，呈圓形或

13、8 字形，可能是殘留 核模所致，見于惡性貧血、溶血性貧血、鉛中毒等。3)豪-周小體的核碎塊 成熟紅細胞中含有紫紅色圓形小體，大小不等，數(shù)量不一，可能是殘留的 核染色質(zhì)微粒。見于增生性貧血、脾切除后、巨幼細胞性貧血、惡性貧血 等。4)有核紅細胞 正常人血片中不見， 溶血性貧血、 急慢性白細胞病、 紅白血病、 髓外造血 及嚴厲重缺氧等常見到。(參考全國臨床檢驗操作規(guī)程 (第二版). 第 1718 頁. 1997. )1.2.3.8 異常白細胞形態(tài)檢查在外周血象中， 除了各類白血病幼稚細胞外， 通常能見到一些細胞形態(tài)上的異常 變化。(1)中性粒細胞1)核象變化：反映中性粒細胞的成熟程度，正常血象中有

14、少量桿狀核細胞出 現(xiàn)，它與分葉核細胞之間的比值約占 1:13。A. 核左移：是指桿狀核細胞增多，常見于感染 .如晚幼粒、中幼粒等細胞 增多為核左移，多見于類白細胞病反應(yīng)或白血病。 再生性左移伴白細胞總數(shù)增高的核左移，常見于急性化膿性感染，如大葉性肺炎等。退行性左移白細胞總數(shù)不增高或減低的核左移，常見于嚴重感染， 機體低抗力低下時，如傷寒伴感染中毒性休克的敗血癥等。B. 核右移：是指不僅分葉核粒細胞增多，且分葉過多、常見 4 葉、5 葉(正 常時多分 3葉)，這是造血功能衰退或造血物質(zhì)缺乏的表現(xiàn)。常見于 營養(yǎng)性巨幼細胞性貧血和使用抗代謝藥物后。此外，疾病進行時突然 出現(xiàn)核象右移，表示預(yù)后不良。2

15、)毒性變化：嚴重感染、惡性腫瘤、各種重金屬或藥物中毒、大面積燒傷等 癥時，中性粒細胞可出現(xiàn)形態(tài)變異。A. 細胞大小不均：為骨髓內(nèi)幼稚粒細胞發(fā)生不規(guī)則和分裂增殖所致。B.毒性顆粒：胞漿中部分或全部顆粒變粗，著色深，顆粒的分布及大小 不等，可能為中性顆粒成熟過程中發(fā)生變性所致。C.空泡：可在胞漿或核中出現(xiàn)，常為多個。被認為是細胞脂肪變性后末 能著色所致。D.體：胞漿內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性點、線、梨形或云霧狀物質(zhì)，可能為核漿發(fā)育 不平衡所致，為細胞嚴重毒性變的表現(xiàn)。E.核棘突：胞核有各種形態(tài)的芽狀突出，臨床意義尚不明確，可能中毒、 癌轉(zhuǎn)移、嚴重的放射損傷等有關(guān)。3）退行性變：表現(xiàn)為胞體腫大，結(jié)構(gòu)模糊，邊緣不清

16、。胞核可呈固縮、腫脹、 破碎、溶解等變化，退行變可以細胞衰老死亡的表現(xiàn)。淋巴細胞淋巴細胞形態(tài)變異在多種疾病，如各病毒感染，傳染性單核細胞增多癥最為常 見，此外瘧疾、過敏性疾病、淋巴結(jié)炎等亦可見，統(tǒng)稱為異型淋巴細胞。傳染 性單核細胞增多癥患者血液中?？沙霈F(xiàn) 3 種異型淋巴細胞，即空泡型、不規(guī)則 型和幼稚型。（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 67 頁.1997.） 123.9 機器檢測見 1.2.4 紅細胞沉降率（血沉）試驗（1）基本操作1） 血沉檢驗采用 3.8%枸櫞酸鈉 1:4 抗凝靜脈血（如：抗凝劑 0.4 +靜脈血 1.6，或抗凝劑 0.6 +靜脈血 2.4 ）。2） 對檢驗申請單

17、和標本管作對應(yīng)編號后，將標本充分混勻。3） 用血沉管將血液吸取到“ 0”刻度處，將管直立于血沉架上，室溫中靜置1小時，觀察并記錄結(jié)果。參考值男：V15 60女：V20 60（參考全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）.第 14 頁.1997.）3.出凝血檢驗3.1 檢驗科目前開展的出凝血檢驗項目包括：（1）血小板檢查（血小板計數(shù)和平均血小板體積測定）；（2）二聚體測定；3P 試驗（血漿硫酸魚精蛋白副凝固時間試驗）（凝血酶原時間）（部分活化凝血活酶時間）（纖維蛋白原）（7）（國際標準比值）（以上第（4）（7）項合稱“出凝血四項”檢驗）3.2標本要求3.2.1血小板檢查采用2抗凝的靜脈血或末梢血標本；其他

18、出凝血檢驗采用 3.2% （109 ）枸櫞酸鈉按 1: 9 比例抗凝的靜脈血標本（0.2 3.2%枸櫞酸鈉 + 1.8 靜 脈血）。3.2.2標本應(yīng)在采血后半小時內(nèi)送檢（條件許可時應(yīng)盡量在實驗室采集） ，采血時應(yīng) 一針見血，應(yīng)避免止血帶壓迫時間太長引起血漿成份改變，標本運送過程應(yīng)減 少機械振動，以免引起溶血（應(yīng)鼓勵全院臨床科室采用真空采血管和配套使用 一次性采血針）。3.2.3部分治療藥物可能會導(dǎo)致出凝血試驗結(jié)果異常，對于正接收藥物治療（如肝素 溶栓治療）的患者，臨床醫(yī)師在申請檢驗時應(yīng)在檢驗申請單上注明臨床診斷及 治療現(xiàn)狀。3.2.4溶血的標本（抽血不順利等原因造成）、血球壓積明顯異常的標本（如從患者 輸液管抽取的血標本等）、血漿成份發(fā)生明顯改變的標本（如血透患者的血標 本、乳糜血標本等）以及標本量太少或抽血后放置時間太長（如超過2 小時）的血液標本，不適合作出凝血檢驗