微生物基礎(chǔ)知識與GMP衛(wèi)生管理培訓(xùn)

1、2015年10月微生物基礎(chǔ)知識與微生物基礎(chǔ)知識與GMPGMP衛(wèi)衛(wèi)生管理培訓(xùn)生管理培訓(xùn)山東科源制藥有限公司山東科源制藥有限公司 陳兆偉陳兆偉目 錄一一、微生物基礎(chǔ)知識簡介、微生物基礎(chǔ)知識簡介二二、GMPGMP衛(wèi)生管理規(guī)定衛(wèi)生管理規(guī)定三、三、20152015版版中國藥典中國藥典微生物限微生物限 度檢查修訂內(nèi)容度檢查修訂內(nèi)容微生物的定義和特點定義：微生物是一類肉眼不能直接看見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能觀察到的微小生物的總稱。特點：微生物具有形體微小、結(jié)構(gòu)簡單；繁殖迅速、容易變異；種類繁多、分布廣泛等特點。微生物的種類微生物類群十分龐雜，主要包括細菌、放線細菌、放

2、線菌、真菌（霉菌、酵母菌）、菌、真菌（霉菌、酵母菌）、立克次體、螺旋體、枝原體、衣原體與病毒病毒等，還包括顯微藻類和原生動物。幾種主要微生物的比較類型真菌細菌 立克次體 衣原體枝原體病毒直徑（m）15.00.52.00.20.50.20.3 0.20.250.25可見性光鏡光鏡光鏡光鏡勉強可見光鏡勉強可見電鏡細菌有多大？細菌的繁殖條件(1) (1) 充足的營養(yǎng)物質(zhì)充足的營養(yǎng)物質(zhì) （碳源、氮源、無機鹽、水碳源、氮源、無機鹽、水）(2)(2) 適宜的酸堿度適宜的酸堿度(3)(3) 合適的溫度合適的溫度(4)(4) 必要的氣體環(huán)境（必要的氣體環(huán)境（COCO2 2 和氧氣）和氧氣）繁殖最適條件對比微生

3、物微生物酸堿度酸堿度溫度溫度細菌細菌pH7.0pH7.07.57.53737真菌真菌( (霉菌、酵母菌）霉菌、酵母菌）pH4.5pH4.56.06.022222828微生物的分類按細胞核有無可分為兩大類：1.非細胞型微生物（不具細胞結(jié)構(gòu)） 無細胞結(jié)構(gòu)，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，由單一核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)衣殼組成，必須在活細胞內(nèi)增殖。 如：病毒、噬菌體、類病毒和朊病毒埃博拉病毒 virus-ebola致死率致死率50%-90%50%-90%禽流感病毒流感病毒噬菌體微生物的分類l2.原核細胞型：單細胞生物，細胞核分化程度低，只有DNA盤繞而成的擬核，無核仁和核膜。 如：如：細菌、放線菌、螺旋體

4、、立克次體、衣原體、枝原體等細菌的形態(tài)金黃色葡糖球菌Staphylococcus aureus大腸埃希菌Escherichia coli 銅綠假單孢菌Pseudomonas aeruginosa沙門菌 Salmonella枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis生孢梭菌 Clostridium 放 線 菌微生物的分類3.細胞型微生物真核細胞型真核細胞型：細胞核的分化程度高，有核膜、有核膜、核仁和染色體核仁和染色體，能進行有絲分裂。如：真菌（酵母菌、念珠菌、霉菌）、藻類等。真菌的分類真菌單細胞：呈圓形或卵圓形。如酵母菌、白色念珠菌。多細胞：由菌絲和孢子組成，并交織成團，稱絲狀菌或霉菌。結(jié)

5、構(gòu)復(fù)雜，個體較大的，如蘑菇。酵母菌白色念珠菌霉菌 Mold是一些絲狀真菌的通稱，其菌體由分枝或不分枝的菌絲構(gòu)成，許多菌絲交織成團。 大?。壕z直徑約210m，比一般的桿菌及放線菌菌絲約寬幾到幾十倍。 黑曲霉可引起燒傷病人皮膚感染或真菌性肺部感染青霉菌及其菌落霉菌繁殖方式是霉菌的主要繁殖方式，孢子數(shù)量大，具一定抗性，繁殖能力極強繁殖能力極強, ,一條菌絲可產(chǎn)生很多個孢子，孢子又可生長發(fā)育為菌絲，所以潔凈室一旦發(fā)生霉菌污染，必須立即采取措施，否則擴散越廣越難控制。真菌對熱的抵抗力不強，一般即被殺死，對干燥、日光、紫外線和一些化學(xué)消毒劑有抵抗力，但對對2.52.5碘酒、碘酒、1010甲醛、過氧乙酸則

6、較敏感。甲醛、過氧乙酸則較敏感。 芽孢某些細菌到一定的生長階段，在細胞內(nèi)形成一個圓形、橢圓形或圓柱形的、對不良環(huán)境條件具較強抗性的休眠體，稱為。能形成芽孢的細菌均為革蘭氏陽性菌 芽孢在條件適宜時，芽孢可形成新的菌體。一個細菌只形成一個芽孢，一個芽孢也只能形成一個菌體。芽孢芽孢的形成不是細菌的繁的形成不是細菌的繁殖方式殖方式，而是營養(yǎng)缺乏的一種反應(yīng)，是細是細菌的休眠狀態(tài)菌的休眠狀態(tài)。藥品生產(chǎn)中需控制的微生物在藥品生產(chǎn)過程中，根據(jù)GMP中潔凈度級別要求以及產(chǎn)品質(zhì)量標準要求，對物料、產(chǎn)品、生產(chǎn)環(huán)境需進行控制的污染（有害）微生物主要為 。微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動、植物發(fā)生病害發(fā)生病害

7、，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物病原微生物。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染污染是造成生產(chǎn)失敗、產(chǎn)品腐敗變質(zhì)、 成品不合格的重要因素不合格的重要因素。 第二十條：凡在潔凈區(qū)工作的人員（包括清潔工和設(shè)備維修工）應(yīng)當定期培訓(xùn)，使無菌藥品的操作符合要求。培訓(xùn)的內(nèi)容應(yīng)當包括衛(wèi)生和微生物方面的基礎(chǔ)知識。未受培訓(xùn)的外部人員（如外部施工人員或維修人員）在生產(chǎn)期間需進入潔凈區(qū)時，應(yīng)當對他們進行特別詳細的指導(dǎo)和監(jiān)督第二十九條：所有人員都應(yīng)當接受衛(wèi)生要求的培訓(xùn)，企業(yè)應(yīng)當建立人員衛(wèi)生操作規(guī)程，最大限度地降低人員對藥品生產(chǎn)造成污染的風(fēng)險。法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年

8、版法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版第三十條：人員衛(wèi)生操作規(guī)程應(yīng)當包括與健康、衛(wèi)生習(xí)慣及人員著裝相關(guān)的內(nèi)容。生產(chǎn)區(qū)和質(zhì)量控制區(qū)的人員應(yīng)當正確理解相關(guān)的人員衛(wèi)生操作規(guī)程。企業(yè)應(yīng)當采取措施確保人員衛(wèi)生操作規(guī)程的執(zhí)行。第三十一條企業(yè)應(yīng)當對人員健康進行管理，并建立健康檔案。直接接觸藥品的生產(chǎn)人員上崗前應(yīng)當接受健康檢查，以后每年至少進行健康檢查 第三十二條：企業(yè)應(yīng)當采取適當措施，避免體表有傷口、第三十二條：企業(yè)應(yīng)當采取適當措施，避免體表有傷口、患有傳染病或其他可能污染藥品疾病的人員從事直接接觸藥患有傳染病或其他可能污染藥品疾病的人員從事直接接觸藥品的生產(chǎn)。如品的生產(chǎn)。如 皮癬、真菌感染的皮膚病等

9、皮癬、真菌感染的皮膚病等 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版第三十三條第三十三條參觀人員參觀人員和未經(jīng)培訓(xùn)的人員未經(jīng)培訓(xùn)的人員不得進入生產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)區(qū)和質(zhì)量控制區(qū)質(zhì)量控制區(qū)，特殊情況確需進入的，應(yīng)當事先對個人衛(wèi)生、更衣等事項進行指導(dǎo)第三十五條進入潔凈生產(chǎn)區(qū)的人員不得化妝和佩帶飾物。第三十五條進入潔凈生產(chǎn)區(qū)的人員不得化妝和佩帶飾物。摘下個人飾物：耳環(huán)、手表、戒指、項鏈等。不得留長指甲摘下個人飾物：耳環(huán)、手表、戒指、項鏈等。不得留長指甲提醒：進入潔凈區(qū)人員不得化妝，否則需清洗去除化妝品提醒：進入潔凈區(qū)人員不得化妝，否則需清洗去除化妝品法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版人體是一個永不休止

10、的污染媒介。 人是藥廠中最不清潔的成份，是最大的污染源。 為什么著重強調(diào)人員的衛(wèi)生？我體檢過了, 沒問題!人每人每2424小時就會脫小時就會脫落皮膚表面上最外落皮膚表面上最外層的皮細胞。這等層的皮細胞。這等于每天高達于每天高達109109（ 10001000，000000，000000） =10=10億億個細胞的數(shù)個細胞的數(shù)量。量。你知道么？人員衛(wèi)生未洗的手未洗的手 清水漂洗的清水漂洗的手手 人員衛(wèi)生洗凈的手洗凈的手 洗凈的手洗凈的手( (用皂液用皂液) () (用消毒劑用消毒劑) ) 人員衛(wèi)生難以覺察的口腔微滴（說話、噴嚏）難以覺察的口腔微滴（說話、噴嚏）人員衛(wèi)生坐著不動能產(chǎn)生10萬個顆粒/

11、分鐘走能產(chǎn)生500萬個顆粒/分鐘跑能產(chǎn)生1500萬個顆粒/分鐘人員衛(wèi)生怎么控制？根據(jù)污染源查找解決方法根據(jù)污染源查找解決方法第二十四條第二十四條工作服及其質(zhì)量應(yīng)當與生產(chǎn)操作的要工作服及其質(zhì)量應(yīng)當與生產(chǎn)操作的要求及操作區(qū)的潔凈度級別相適應(yīng)，其式樣和穿著方求及操作區(qū)的潔凈度級別相適應(yīng)，其式樣和穿著方式應(yīng)當能夠滿足式應(yīng)當能夠滿足-保護產(chǎn)品和人員的要求。保護產(chǎn)品和人員的要求。方法：方法：清洗清洗+ +包裹包裹法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版1.1.根據(jù)不同潔凈區(qū)要求，穿戴不同衣服根據(jù)不同潔凈區(qū)要求，穿戴不同衣服包裹物件包括：包裹物件包括： 帽子、口罩、眼罩、無菌服、鞋子帽子、口罩、眼罩、無菌

12、服、鞋子/ /鞋套、手套鞋套、手套包裹部位：包裹部位：頭發(fā)頭發(fā)+ +皮膚皮膚法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手洗手第一第一步：步： 用用清水潤清水潤濕雙手及濕雙手及手腕以上手腕以上1010厘米厘米法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第二步：洗手第二步： 均勻涂上均勻涂上洗手液洗手液法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第三步：洗手第三步： 掌心相對，掌心相對，手指并攏手指并攏相互摩擦相互摩擦 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第四步：洗手第四步：手心對手背手心對手背沿指縫相沿指縫相互摩擦交互摩擦交換進行換進行

13、法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第五步：洗手第五步：掌心相對，掌心相對，雙手交叉，雙手交叉，沿指縫相沿指縫相互摩擦互摩擦法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第六步：洗手第六步：彎曲各手指彎曲各手指關(guān)節(jié)，在關(guān)節(jié)，在另一手掌另一手掌旋轉(zhuǎn)搓擦，旋轉(zhuǎn)搓擦，交換進行交換進行 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第七步：洗手第七步：一手握另一一手握另一手大拇指手大拇指旋轉(zhuǎn)搓擦，旋轉(zhuǎn)搓擦，交換進行交換進行 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第八步：洗手第八步： 搓洗手腕，搓洗手腕，交換進行。交換進行。 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第九步：洗手第

14、九步： 將手及將手及手腕用水手腕用水沖洗干凈沖洗干凈法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版洗手第十步：洗手第十步： 將手及手將手及手腕在干手腕在干手器下吹干器下吹干法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更換潔凈服： 從上到下需要將從上到下需要將頭發(fā)、胡須等相頭發(fā)、胡須等相關(guān)部位遮蓋、包關(guān)部位遮蓋、包裹。穿上合適的裹。穿上合適的鞋子和鞋子和/ /或鞋套?；蛐?。附錄第二十四條：附錄第二十四條： 正確穿戴潔凈服，必須包蓋全部頭發(fā)、胡須及腳部，并能阻留人體脫落物；口罩要罩住口鼻；潔凈鞋應(yīng)能遮蓋住全腳。并定期按規(guī)定清洗。離開潔凈室，必須脫掉潔凈服裝。 法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版

15、法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：不能佩戴手表、首飾法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：不能佩戴手表、首飾法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：鞋套不能有破損法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版更衣：鞋套不能有破損法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版定時或在任何關(guān)鍵操作前，應(yīng)消毒手套法規(guī)要求-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版填寫批記錄后，手套要及時消毒2015版中國藥典-微生物限度檢查法1.方法的修訂2.標準的修

16、訂2015版中國藥典微生物限度檢查修訂內(nèi)容 1.三部微生物檢查重疊內(nèi)容整合修訂前：一個通則 微生物限度檢查法修訂后：三個通則 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法 非無菌藥品微生物限度標準2015版藥典微生物檢查法修訂內(nèi)容-環(huán)境要求潔凈環(huán)境檢測修訂前:單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行監(jiān)測。修訂后:單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期進行監(jiān)測。2015版藥典微生物檢查法修訂內(nèi)容-計數(shù)法修訂后 需氧菌總數(shù) 胰酪大豆胨瓊脂（TSA） 霉菌及酵母菌總數(shù) 沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）修訂前 細菌數(shù) 營養(yǎng)瓊脂 霉菌及酵母菌數(shù) 玫瑰紅鈉瓊脂 2015版藥典微生物檢查法修訂內(nèi)容-控制菌檢查法控制菌檢查法修訂后耐膽鹽的革蘭氏陰性菌、大腸埃希菌、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌修訂前大腸菌群、大腸埃希菌、 沙門菌、 銅綠假單胞菌、 金黃色葡萄球菌、 梭菌、白色念珠菌 2015版藥典微生物檢查法修訂內(nèi)容-結(jié)果判斷微生物計數(shù)法和控制菌檢查法結(jié)果判斷 不再規(guī)定復(fù)試，通過實驗室調(diào)查、回顧、分析結(jié)果的準確性。 限度標準以指數(shù)方式表示：101cfu： 可接受的最大限度為20；102cfu： 可接受的最大限度為200；依此類推。2015版中