有關(guān)物質(zhì)方法驗(yàn)證方案

1、*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 1 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)8*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案20*年*月*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 2 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)驗(yàn)證方案的起草與審批驗(yàn)證方案的起草與審批驗(yàn)證小組成員驗(yàn)證小組成員部門(mén)人員職責(zé)驗(yàn)證小組組長(zhǎng)驗(yàn)證小組組長(zhǎng)部門(mén)人員職責(zé)負(fù)責(zé)組織起草驗(yàn)證方案并按批準(zhǔn)方案組織實(shí)施；督促驗(yàn)證人員做好記錄；負(fù)責(zé)各階段驗(yàn)證結(jié)果匯總及評(píng)價(jià)、組織起草驗(yàn)證報(bào)告；組織相關(guān)培訓(xùn) 方案審核方案審核審

2、核簽名及日期驗(yàn)證委員會(huì)方案批準(zhǔn)方案批準(zhǔn)批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期方案實(shí)施日期：方案實(shí)施日期：*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 3 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)目目 錄錄1.驗(yàn)證目的驗(yàn)證目的.42.方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍.43.標(biāo)準(zhǔn)品、供試品標(biāo)準(zhǔn)品、供試品.44.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估.45.驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn).46.驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟.46.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性.46.2 專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性.66.3 檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限與定量限.86.4 線性線性.96.5 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度.96.6 精密度精密度.106.6 范圍范圍

3、.106.7 耐用性耐用性.106.8 樣品測(cè)定樣品測(cè)定.117.偏差偏差.118.風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審.119.再驗(yàn)證再驗(yàn)證.1110.確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論.1111.更改歷史更改歷史.1212. 附錄附錄.12*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 4 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)1. 驗(yàn)證目的驗(yàn)證目的根據(jù)法規(guī)的要求，采用非藥典或其它法規(guī)未收載的分析方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。這個(gè)驗(yàn)證方案的目的是為驗(yàn)證提供具體方法參數(shù)、可接受標(biāo)準(zhǔn)和研究步驟。2. 方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍方法簡(jiǎn)介與

4、確認(rèn)范圍*原料有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法為自行開(kāi)發(fā)的液相室色譜方法。為確保方法的準(zhǔn)確性和可行性，為日常檢測(cè)方法提供依據(jù)，現(xiàn)對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證必須按照驗(yàn)證方案進(jìn)行，此次驗(yàn)證方案提供*原料含量分析方法驗(yàn)證驗(yàn)證，包括：專(zhuān)屬性、精密度、線性、范圍、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限&定量限、耐用性。3. 標(biāo)準(zhǔn)品、供試品標(biāo)準(zhǔn)品、供試品3.1 標(biāo)準(zhǔn)品 名稱(chēng)批號(hào)來(lái)源3.2 供試品 名稱(chēng)批號(hào)來(lái)源4. 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估按照質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理規(guī)程 ，質(zhì)量控制部和質(zhì)量管理部共同對(duì)分析方法進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，確定了需進(jìn)行方法確認(rèn)的項(xiàng)目。具體見(jiàn)下表：風(fēng)險(xiǎn)因素風(fēng)險(xiǎn)可能影響效應(yīng)現(xiàn)有控制措施SPDRPN風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別建議采取措施專(zhuān)屬性不具有專(zhuān)屬性分離度不好，影響

5、雜質(zhì)定量每次試驗(yàn)測(cè)試分離度33327中首次使用前，對(duì)專(zhuān)屬性進(jìn)行驗(yàn)證定量限 定量限 小的雜質(zhì)不能無(wú)33327中對(duì)該方法的定*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 5 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)與檢測(cè)限高被檢出量限進(jìn)行驗(yàn)證。精密度精密度差不同時(shí)間或人員測(cè)定的結(jié)果不一致每次測(cè)試前進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試33327中首次使用前，對(duì)精密度進(jìn)行驗(yàn)證準(zhǔn)確度回收率低雜質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn)確無(wú)33327中首次使用前，對(duì)準(zhǔn)確度進(jìn)行驗(yàn)證線性線性不好雜質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn)確無(wú)33327中首次使用前，對(duì)線性進(jìn)行驗(yàn)證范圍范圍窄濃度超過(guò)范圍后結(jié)果不準(zhǔn)確無(wú)33327中首次使用前，對(duì)范圍

6、進(jìn)行驗(yàn)證耐用性耐用性差參數(shù)微小變化對(duì)結(jié)果影響很大無(wú)33327中首次使用前，對(duì)耐用性進(jìn)行驗(yàn)證風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估人：評(píng)估日期：5. 驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目可接受標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)屬性空白無(wú)干擾，主峰與相鄰峰之間的分離度不小于1.5，峰純度應(yīng)不小于 0.990.檢測(cè)限與定量限0.05%線性R0.999準(zhǔn)確度回收率在 0.05%質(zhì)量指標(biāo)的 140%范圍內(nèi)精密度重復(fù)性 RSD%10.0%中間精密度 RSD%10.0%精密度：兩組數(shù)據(jù)平均檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差20.0%*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 6 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)范圍應(yīng)至少為指

7、標(biāo)的 80%120%耐用性評(píng)估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽 pH、有機(jī)相比例、流動(dòng)相比例、溶液放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響6. 驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟6.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性分離度測(cè)試液：取*產(chǎn)品分離度標(biāo)準(zhǔn)品 5mg，置于一比色管中，加稀釋液 10ml 溶解，在 95下水浴加熱 30 分鐘，放冷。標(biāo)準(zhǔn)液：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度。取分離度測(cè)試液進(jìn)樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品與*-3異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)不小于2.0。取標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品主峰拖尾因子應(yīng)不大于 2.

8、0，理論塔板數(shù)應(yīng)不低于 3000；標(biāo)準(zhǔn)液連續(xù)進(jìn)樣 6 次，主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 5.0%，保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 1.0%。6.2 專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性a) 溶劑空白：取空白進(jìn)樣，記錄色譜圖，溶劑對(duì)測(cè)定應(yīng)無(wú)干擾。b) 樣品液：取本品25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。c)雜質(zhì)1定位溶液：取雜質(zhì)1約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰

9、純度應(yīng)不小于0.990。d)雜質(zhì)2定位溶液：取雜質(zhì)2約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。e)雜質(zhì)3定位溶液：取雜質(zhì)3約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 7 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)f)雜質(zhì)4定位溶液：

10、取雜質(zhì)4約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。i)雜質(zhì)5定位溶液：取雜質(zhì)5約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。j)雜質(zhì)6定位溶液：取雜質(zhì)6約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0

11、.990。k)雜質(zhì)7定位溶液：取雜質(zhì)7約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。l)雜質(zhì)8定位溶液：取雜質(zhì)8約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。m)雜質(zhì)9定位溶液：取雜質(zhì)9約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀

12、釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。n)雜質(zhì) 10 定位溶液：取雜質(zhì) 10 約 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990。o) 高溫破壞試驗(yàn)：取在 60加熱 10 天的樣品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高溫破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。p) 高濕破壞實(shí)驗(yàn)：取在相對(duì)濕度為 90%5

13、%的條件下放置 10 天的樣品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高濕破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。q) 強(qiáng)光破壞試驗(yàn)：取經(jīng)取經(jīng)總照度不低于1.2106Lux.hr 強(qiáng)白光,近紫外能量不低于200w.hr/m2破壞的的樣品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 8 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)用稀釋液溶解

14、并稀釋至刻度，即得強(qiáng)光破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。r) 酸破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 鹽酸溶液1.00ml，25下放置 24 小時(shí)，然后用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得酸破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。s) 堿破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氫氧化鈉溶

15、液1.00ml，25下放置 24 小時(shí)，然后用 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得堿破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。t) 氧化破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%過(guò)氧化氫溶液 1ml，25下放置 24 小時(shí)，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得氧化破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。i)根據(jù)雜質(zhì) 110 的定位溶液

16、和*標(biāo)準(zhǔn)品溶液的主峰峰面積，計(jì)算響應(yīng)因子，以*標(biāo)準(zhǔn)品為 1.0 計(jì)，計(jì)算各雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子。6.3 檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限與定量限a) 定量限：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進(jìn)樣，獲得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(1020):1 時(shí)，相應(yīng)的濃度即為定量限濃度。定量限精密度：配制 6 個(gè)相同濃度的定量限溶液進(jìn)樣，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 5.0%。定量限應(yīng)不大于 0.05%。定量限準(zhǔn)確度：LOQ 儲(chǔ)備溶液：根據(jù) LOQ 測(cè)試結(jié)果

17、配制 LOQ 儲(chǔ)備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。LOQ 濃度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。同法配制 3 個(gè)。供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個(gè)。LOQ 回收率測(cè)試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。同法配制 3 個(gè)。分別取 LOQ 濃度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試液進(jìn)樣，計(jì)算雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的單位濃度峰面積和供*

18、制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 9 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)試液中所含雜質(zhì)的單位濃度峰面積。LOQ 回收率測(cè)試液各進(jìn)樣 3 針，計(jì)算回收率，每個(gè)回收率及平均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 15%?；厥章?%)=計(jì)算濃度100%/實(shí)際濃度。b) 檢測(cè)限：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進(jìn)樣，獲得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(35):1 時(shí)，相應(yīng)的濃度即為檢測(cè)限濃度。6.4 線性線性

19、a)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：取雜質(zhì) 1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7 約 15mg，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, 雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱(chēng)定，加乙腈 5ml 溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度。b)線性 L1 溶液：取檢測(cè)限與定量限項(xiàng)下的 LOQ 濃度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。c)線性 L2 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度

20、峰面積。 （相當(dāng)于 60%雜質(zhì)限度，也可以不做，但至少保證有5 個(gè)點(diǎn)）d)線性 L3 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 80%雜質(zhì)限度）e)線性 L4 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 100%雜質(zhì)限度）f)線性 L5 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 120%雜質(zhì)限度）g)線性 L6 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 7.0ml 至 25

21、ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 140%雜質(zhì)限度）進(jìn)樣，記錄色譜圖，以樣品濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。線性范圍為雜質(zhì)的定量限濃度至約 1.4 倍最大允許雜質(zhì)限度濃度，相關(guān)系數(shù) R 應(yīng)不小于 0.990，Y 軸截距應(yīng)在 100%響應(yīng)值的 25%以?xún)?nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 10%。6.5 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度a)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：取雜質(zhì) 1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7 約 15m

22、g，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, *制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 10 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱(chēng)定，加乙腈 5ml 溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度。b)LOQ 儲(chǔ)備溶液：根據(jù) LOQ 測(cè)試結(jié)果配制 LOQ 儲(chǔ)備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。c)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。同法配制 3 個(gè)。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。

23、（相當(dāng)于雜質(zhì)限度溶液）d)供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個(gè)。計(jì)算樣品中各雜質(zhì)的單位濃度峰面積，用于扣除回收率測(cè)試中扣除空白的依據(jù)。e)回收率測(cè)試液 1：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的限度)。f)回收率測(cè)試液 2：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)備液 7.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的限度的 1.4 倍)。i)回收率測(cè)試液 3：取*產(chǎn)品 25

24、mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。(也可以配制相當(dāng)于雜質(zhì)限度的 0.8 倍的溶液，但是為了減少工作量，還是最好做 LOQ 點(diǎn)的回收率)。分別取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試液、回收率測(cè)試液 1、回收率測(cè)試液 2、回收率測(cè)試液 3各連續(xù)進(jìn)樣 3 次，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算*產(chǎn)品的量，并計(jì)算回收率，每個(gè)回收率及平均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 15%?；厥章?%)=計(jì)算濃度100%/實(shí)際濃度。6.6 精密度精密度a)重復(fù)性：稱(chēng)取*產(chǎn)品樣品適量，照有關(guān)物質(zhì)檢查方法配制樣品溶液，同法配制 6份樣

25、品溶液，進(jìn)樣測(cè)試，各雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均應(yīng)不大于 10%。b) 中間精密度：不同儀器(Agilent 1200)、不同檢驗(yàn)人員(另一位化驗(yàn)員)、新配制的流動(dòng)相、新配制的樣品液及標(biāo)準(zhǔn)液，與重復(fù)性測(cè)試測(cè)同一批樣品，各雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均應(yīng)不大于 10%。c) 精密度測(cè)試結(jié)果：重復(fù)性測(cè)定結(jié)果的平均值與中間精密度測(cè)定結(jié)果的平均值之間的相對(duì)偏差不大于 20%。6.6 范圍范圍 根據(jù)線性、精密度和準(zhǔn)確度確定方法的范圍，在該濃度范圍內(nèi)，方法具有良好的精*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 11 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)密度

26、、線性和準(zhǔn)確度。范圍至少在 0.05%質(zhì)量指標(biāo)的 140%范圍內(nèi)。6.7 耐用性耐用性a) 色譜條件的影響：在其他條件不變情況下，單獨(dú)改變柱溫、流速、色譜柱、緩沖液 pH 值、有機(jī)相比例、流動(dòng)相比例等其中一個(gè)色譜條件，取分離度測(cè)試液分別進(jìn)樣，*產(chǎn)品與*雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 2.0。改變項(xiàng)目柱溫流速(ml/分鐘)色譜柱緩沖液pH 值甲醇、乙腈比例A、B 相初始比例設(shè)定值20300.851.05另一支2.803.2055:4545:5580:2070:30b) 溶液穩(wěn)定性：按本方法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液和分離度溶液，供試品溶液分別放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后進(jìn)樣測(cè)定，考

27、察溶液的穩(wěn)定性。要求標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積相對(duì) 0h 的增長(zhǎng)率在5%范圍內(nèi)，供試品中各雜質(zhì)的增長(zhǎng)相對(duì) 0h 不超過(guò)20%，且無(wú)新的雜質(zhì)產(chǎn)生，分離度溶液分離度不小于 2.0。則表明溶液在這段時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定，否則說(shuō)明溶液不穩(wěn)定，需根據(jù)溶液穩(wěn)定性結(jié)果考慮配制和進(jìn)樣時(shí)間。6.8 樣品測(cè)定樣品測(cè)定應(yīng)用本方法，對(duì) 3 批樣品進(jìn)行測(cè)定，樣品各雜質(zhì)均應(yīng)能夠符合限度要求。7.偏差偏差驗(yàn)證過(guò)程中如果出現(xiàn)偏差應(yīng)及時(shí)進(jìn)行調(diào)查和上報(bào)，并且采取適當(dāng)?shù)拇胧┻M(jìn)行處理，并及時(shí)記錄。如經(jīng)調(diào)查確定偏差的性質(zhì)會(huì)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果產(chǎn)生實(shí)質(zhì)影響，應(yīng)確定原因并采取必要措施后重新進(jìn)行驗(yàn)證。8.風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審經(jīng)分析，對(duì)上一步判斷的風(fēng)險(xiǎn)采取的

28、控制措施，若經(jīng)檢查確認(rèn)符合要求，則其相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)可降至為可接受風(fēng)險(xiǎn)。否則，需采取進(jìn)一步的措施降低風(fēng)險(xiǎn)。9.再驗(yàn)證再驗(yàn)證發(fā)生下列情形之一時(shí)，需進(jìn)行再驗(yàn)證。（1）生產(chǎn)工藝發(fā)生改變。 （2）檢驗(yàn)方法發(fā)生改變。10.確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告，*制藥股份有限公司文件編號(hào)：文件編號(hào)：題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案第第 12 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè)報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)。驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，確認(rèn)再驗(yàn)證周期。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括：確認(rèn)試驗(yàn)是否有遺漏？確認(rèn)試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？確認(rèn)記錄是否完整？確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對(duì)偏差說(shuō)明是否合理？是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)？11.更改歷史更改歷史12. 附錄附錄附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法guideline on the limits of genotoxic impurities版本號(hào)生效日期主要變更描述第 1 版本文檔為新訂*制藥股份有限公司附錄附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法原料有關(guān)物質(zhì)分析方法1 儀器：LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司） ，紫外檢測(cè)器。2 標(biāo)準(zhǔn)品及試劑 *標(biāo)準(zhǔn)品 來(lái)源:U