動物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備很棒課件

1、(最新整理)動物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備很棒2021/7/261猜猜我是誰？2021/7/262我就是清脆可口，人見人愛的大白菜！2021/7/263十字花科四強(qiáng)雄蕊白菜甘藍(lán)融合一體2021/7/264再分化植物體細(xì)胞雜交技術(shù)利用什么原理？用什么方法可以誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合？一、原理：細(xì)胞膜具有流動性細(xì)胞的全能性二、誘導(dǎo)方法：離心 振動 電激 、聚乙二醇植物體細(xì)胞雜交技術(shù)有什么用途？三、用途：獲得雜種植株脫分化2021/7/2652021/7/266阜陽市城郊中學(xué) 劉恒振2021/7/267一、動物細(xì)胞融合有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。 兩個細(xì)胞正在融合 受精作用2021

2、/7/268(一)概念 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個或多 個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。（二）動物細(xì)胞融合的過程與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類似。雜交細(xì)胞:融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。一、動物細(xì)胞融合2021/7/269.原理：1、動物細(xì)胞融合的基本原理是什么？2、動物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)方式是什么？與植物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)方式有什么不同？ 與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動性。.誘導(dǎo)方式：物理法：電激、振動、離心化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）生物法：滅活的病毒例如：仙臺病毒2021/7/2610仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)

3、胞融合）2021/7/2611細(xì)胞A細(xì)胞B雜交細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法2021/7/2612滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動性）2021/7/2613(三)動物細(xì)胞融合的應(yīng)用1.突破有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。鼠雞、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、人雞、人蛙、酵母菌雞 、人胡蘿卜等3、重要用途：制備單克隆抗體。2021/7/2614懷孕早知道，優(yōu)生很需要。方法多多妙，單抗最最早。2021/7/2615（一）、什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并

4、能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 二、單克隆抗體2021/7/26161、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）2、抗體是如何產(chǎn)生的？B淋巴細(xì)胞抗原增殖分化成漿細(xì)胞3、一種B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生幾種抗體？一種2021/7/2617（二）獲得抗體的傳統(tǒng)方法1、把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需的抗體。2、缺點： 產(chǎn)量低，純度低，特異性差。2021/7/2618人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每一個B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。 1、請從以

5、上文字資料中找出單克隆抗體的概念用單個B淋巴細(xì)胞進(jìn)行（無性繁殖）克隆，得到的基因型相同的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。2021/7/26191、在體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細(xì)胞有沒有可能無限增殖？不可能2、我們學(xué)過的什么細(xì)胞具有這樣的能力？癌細(xì)胞3、有什么辦法讓B淋巴細(xì)胞也具有這樣的能力？細(xì)胞融合2021/7/2620一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖雜種細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)（三）、單克隆抗體的實驗原理：動物細(xì)胞融合創(chuàng)始人：米爾斯坦單克隆抗體既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體，柯勒2021/7/2621如何大量生產(chǎn)單克

6、隆抗體？利用B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性。利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有B淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞。利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。2021/7/2622應(yīng)用：動物細(xì)胞融合設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)雜種細(xì)胞單克隆抗體的制備單克隆抗體的特點：2021/7/2623（四）、單克隆抗體的制備過程2021/7/26244.過程：免疫動物注射抗原的目的是什么？獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用方法是什么？滅活的仙臺病毒如何進(jìn)行篩選？具有篩選作用的培養(yǎng)基（選擇培養(yǎng)基）？

7、種BB 、B瘤 、瘤瘤 、雜交細(xì)胞如何獲得大量的單克隆抗體？免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的篩選分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立單克隆抗體的大量制備2021/7/2625 ？ ？ 抗原 效應(yīng)B細(xì)胞篩選 篩選 （AA型、BB型）AB型雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞2021/7/2626過程：抗原小鼠效應(yīng)B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選多孔培養(yǎng)板單個細(xì)胞培養(yǎng)，篩選能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng)提取出單克隆抗體2021/7/2627考考你！1.在制備單克隆抗體的過程中，選用哪兩種細(xì)胞進(jìn)行融合？為什么選擇這兩種細(xì)胞？漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞漿細(xì)胞能產(chǎn)生單

8、一抗體，但不能無限增殖；骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，但不能產(chǎn)生單一抗體。2021/7/2628考考你！2、在這過程中進(jìn)行了幾次篩選？分別在哪個步驟進(jìn)行篩選？兩次篩選。第一次在B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合以后篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。2021/7/2629五、單克隆抗體的應(yīng)用 請同學(xué)們根據(jù)自己所收集的資料，談?wù)剢慰寺】贵w的應(yīng)用。、可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，簡易、快速的優(yōu)點、可用于疾病治療、可用于運載藥物（作為運載對應(yīng)疾病的藥物的 “生物導(dǎo)彈“。）“生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物2021/7/2630小結(jié)2021/7/2631 細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合 漿篩選 瘤

9、細(xì)胞 雜交細(xì)胞培養(yǎng)選出能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液或小鼠腹水中取出 單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞：既能大量增殖，又能產(chǎn)生 特定抗體。單克隆抗體：特異性強(qiáng)，靈敏性高，并 可大量制備。2021/7/2632植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合的比較三.細(xì)胞工程比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜流動性細(xì)胞增殖細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性的障礙2021/7/26331、動物

10、細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動物細(xì)胞融合中有特殊性的是（ ）A、融合的原理 B、融合的優(yōu)點C、融合的誘導(dǎo)手段 D、融合的過程2021/7/26342、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（ ）A、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B、制備單克隆抗體C、培育新物種 D、生產(chǎn)雜種細(xì)胞2021/7/26353、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A、經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B、不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 C、經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D、不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞2021/7/26364. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定

11、培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融 合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 A B C D 2021/7/26375、研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（ ）A利用單克隆抗體特異性地對抗癌細(xì)胞 B以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合2021/7/26386只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法（ ） APEG B滅活的病毒 C電刺激 D離心7、“生物導(dǎo)彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細(xì)胞 C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D.在單抗上連接抗癌藥物202

12、1/7/26398、下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，不正確的是（ ）AB淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不 需要滅活的仙臺病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又 能產(chǎn)生單克隆抗體C體外培養(yǎng)時，一個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生 抗體，但不能無限增殖D單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈 敏度高，優(yōu)越性明顯A2021/7/26409. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A B C D C2021/7

13、/2641在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。 雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。2021/7/2642思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。 誘導(dǎo)融合方法不同：動物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而動物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。 2021/7/26432.制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分