滅菌工藝及設(shè)備驗(yàn)證課件

1、滅 菌工藝及滅菌設(shè)備驗(yàn)證黑龍江省所姜連閣 2013年1月一般指沒(méi)有活體微生物存在的藥品。在藥品制劑類(lèi)別中，無(wú)菌藥品也可稱為無(wú)菌制劑無(wú)菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無(wú)菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）附錄1.無(wú)菌藥品 無(wú)菌藥品基 本 概 念？106 100（1） 10-6（10-3）無(wú)菌保證水平（Sterility Assurance Level）-SAL基 本 概 念采用濕熱滅菌法的SAL不得大于10-6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬(wàn)分之一采用無(wú)菌生產(chǎn)的SAL不得大于10-3無(wú)菌生產(chǎn)工藝僅限于臨床必需注射給藥而確實(shí)無(wú)法耐受終端滅菌的產(chǎn)品,適用于粉針劑或部分小容

2、量注射劑SAL定義-產(chǎn)品經(jīng)滅菌/除菌后微生物殘存的概率。評(píng)價(jià)滅菌（無(wú)菌）工藝的效果，該值越小，表明產(chǎn)品中微生物存在的概率越小。無(wú)菌制劑主要有：注射劑植入劑、沖洗劑、眼內(nèi)注射溶液、眼內(nèi)插入劑供手術(shù)、傷口、角膜穿通傷用的眼用制劑，用于手術(shù)、創(chuàng)傷、燒傷或潰癢等的軟膏劑、乳膏劑、氣霧劑、噴霧劑局部用散劑、耳用制劑、鼻用制劑、凝膠劑基 本 概 念注射劑藥途徑特 點(diǎn) 基 本 概 念直接進(jìn)入組織或血液吸收快作用迅速可靠注射液注射用無(wú)菌粉末注射用濃溶液肌肉注射靜脈注射注射劑與其他劑型相比 無(wú)菌制劑,質(zhì)量要求高生產(chǎn)過(guò)程控制嚴(yán)格注射劑-將藥物制成無(wú)菌溶液、混懸液或臨用前制成液體的無(wú)菌粉末供注入人體的制劑. 是臨床

3、上使用廣泛的制劑。無(wú)菌無(wú)熱原無(wú)不溶性微粒高純度 無(wú)菌藥品特點(diǎn)？基 本 概 念微生物微粒藥物降解（氧化、水解）基 本 概 念過(guò)濾、消毒、滅菌工藝控制（PH、溫度、時(shí)間、空氣）注射劑生產(chǎn)的基本要求合理的廠房、設(shè)備、措施設(shè)計(jì)合格的人員合理的生產(chǎn)方法、步驟和控制方法工藝驗(yàn)證和方法滅菌工藝驗(yàn)證生產(chǎn)場(chǎng)所設(shè)施設(shè)備重要的支持系統(tǒng)原材料包裝材料產(chǎn)品設(shè)計(jì)分析化驗(yàn)規(guī)程儀器校準(zhǔn)操作人員驗(yàn)證過(guò)的工藝 硬 件軟 件人 員微生物基礎(chǔ)知識(shí)真核微生物原核微生物病毒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)微生物無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)微生物-是指一類(lèi)體積微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，大多是單細(xì) 胞的，必須用光學(xué)顯微鏡觀察形態(tài)的微小生物的通稱。肉眼看不見(jiàn)、看不清楚的微小生物三型 八大類(lèi)

4、特點(diǎn) 無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu) 病毒（亞病毒和朊粒） 無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單，體積最微小，能通過(guò)細(xì)菌濾器；由單一核酸（DNA或RNA）和蛋白質(zhì)外殼組成；必須寄生在活的易感細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁 殖。 原核細(xì)胞細(xì)菌放線菌螺旋體支原體衣原體立克次體 僅有原始核，無(wú)核膜、無(wú)核仁，染色體僅為單個(gè)缺乏完整的細(xì)胞器。 真核細(xì)胞 真菌 細(xì)胞核分化程度較高，有典型的核結(jié)構(gòu)（有核膜、核仁、多個(gè)染色體，由DNA和組蛋白組成）；通過(guò)有絲分裂進(jìn)行繁殖；胞漿內(nèi)有多種完整的細(xì)胞器。 微生物基礎(chǔ)知識(shí)個(gè)體小，作用大。分布廣，種類(lèi)多。生長(zhǎng)繁殖快，代謝強(qiáng)。易變異。微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物生物學(xué)特征20min植物葉子表面附生微生物- 皮膚上含細(xì)菌-洗過(guò)后幾小

5、時(shí)之內(nèi)-人的腸道內(nèi)微生物-糞便中細(xì)菌-一般人每個(gè)噴嚏的飛沫-感冒患者一個(gè)噴嚏-微生物基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介約100萬(wàn)個(gè)/克。約10萬(wàn)個(gè)/cm2恢復(fù)到原來(lái)的數(shù)量約100萬(wàn)億大約占糞便干重的1/3含4500-150000個(gè)含8500萬(wàn)個(gè)（有傳染性）微生物無(wú)處不在常見(jiàn)微生物微生物基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介種類(lèi)基本特點(diǎn)生長(zhǎng)條件細(xì)菌0.5 5 m，生長(zhǎng)態(tài)時(shí)不耐熱，部分能形成耐熱芽孢.30-35 oC, 1-2天真菌5 m 50 m，形成芽孢隨空氣擴(kuò)散，不耐熱,但難用消毒劑消毒20-25oC, 3-5天病毒小于0.1 m，一般不耐熱，0.22m過(guò)濾不了微 生 物 分 布 特 點(diǎn)G+G-氣源性微生物革蘭氏陽(yáng)性菌較多可形成芽孢，難以

6、殺滅藥品生產(chǎn)需要HVAC水源性則革蘭氏陽(yáng)性菌居多不會(huì)生成孢子，會(huì)形成細(xì)菌內(nèi)毒素耐熱性差微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠體。生物指示劑均為革蘭氏陽(yáng)性菌，滅菌用BI為非致病菌。細(xì)菌芽胞的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母細(xì)胞孢子壁的形成生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞摘自 /microbes/spores.asp內(nèi)生孢子產(chǎn)生于 Gram+ 細(xì)菌: 芽孢桿菌屬Bacillus 梭菌屬Clostridium 僅含核酸及少量萌發(fā)必需物，皮層含DPA和Ca2+復(fù)合物，能抵御各種惡劣環(huán)境，可休眠上百萬(wàn)年。真菌孢子因不具上述特性，而不耐熱。（DPA：吡啶二羧酸）常用的滅菌方法二種：物理滅菌法和化學(xué)滅菌法物理滅菌技術(shù)是利用蛋白質(zhì)與

7、核酸具有遇熱、射線不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線和過(guò)濾方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)稱為物理滅菌法，亦稱物理滅菌技術(shù)。該技術(shù)包括干熱滅菌、濕熱滅菌、除菌過(guò)濾法和輻射滅菌等?；瘜W(xué)滅菌法系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法，可分為氣體滅菌劑和液體滅菌劑，如環(huán)氧乙烷屬于氣體滅菌劑的一類(lèi)。一旦溫度超過(guò)上限，微生物細(xì)胞中主要的蛋白質(zhì)、酶及核酸便會(huì)被永久性破壞，細(xì)胞膜被融解，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。熱力學(xué)滅菌是使用最普遍并且研究最為徹底的滅菌方式。 滅 菌 基 本 原 理滅 菌 基 本 原 理微生物的耐熱性可按下列順序排列(耐熱性從高到低):絕大多數(shù)細(xì)菌45不能生長(zhǎng)，80100可被迅速殺滅。

8、需氧菌中的芽胞桿菌屬 厭氧菌中的梭狀芽胞桿菌屬具有較強(qiáng)的耐熱性物理/化學(xué)條件 在較高溫度下生長(zhǎng)有二價(jià)陽(yáng)離子溫度和相對(duì)濕度在90 125之間，相對(duì)濕度在20% 50%時(shí)，細(xì)菌芽胞表現(xiàn)出最大的耐熱性當(dāng)相對(duì)濕度超出這一范圍時(shí)，芽胞的耐熱性將會(huì)迅速下降。濕度對(duì)芽胞破壞性過(guò)程起促進(jìn)作用，所以濕熱滅菌較干熱滅菌較低溫度。 影響熱力滅菌的因素濕熱滅菌法系指物質(zhì)在滅菌器內(nèi)利用高壓蒸汽或其他熱力學(xué)滅菌手段殺滅細(xì)菌。（一定壓力下的蒸氣進(jìn)行滅菌，也采用過(guò)熱水噴淋或浸沒(méi)）。濕熱滅菌法系導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵性蛋白質(zhì)和酶發(fā)生熱變性或凝固。具有穿透力強(qiáng)，傳導(dǎo)快，滅菌能力甚強(qiáng)?！舅梢簯B(tài)變成氣態(tài)時(shí)，會(huì)吸收大量的熱能(540cal

9、/g)，氣態(tài)冷凝成液態(tài)時(shí)，會(huì)釋放相等的能量(即汽化熱)】。因此應(yīng)盡可能使用飽和蒸汽進(jìn)行滅菌。濕熱滅菌是一種十分經(jīng)濟(jì)有效的方法。用于藥品、藥品的溶液、玻璃器械、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣、敷料以及其他遇高溫與濕熱不發(fā)生變化或損壞的物質(zhì)，均可選用。常見(jiàn)濕熱滅菌器包括脈動(dòng)真空滅菌器（或稱預(yù)真空滅菌器）、蒸汽-空氣混合物滅菌器和過(guò)熱濕熱滅菌水滅菌器等。濕 熱 滅 菌干熱滅菌是指在非飽和濕度下進(jìn)行的熱力學(xué)滅菌。滅菌介質(zhì)通常為被滅菌品所處濕度下的熱空氣干熱滅菌是使微生物氧化而不是蛋白質(zhì)變性，這就是干熱滅菌之所以要求相對(duì)較高溫度的原因。利用干熱滅菌工藝滅菌溫度高、時(shí)間長(zhǎng)的這一特點(diǎn)如170-250，甚至更高，可使干熱滅菌

10、同時(shí)具備除熱原的功用。干熱是去熱原最為有效的方法之一。干熱去熱原工藝進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)證明該工藝能使標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。 在制藥工業(yè)中，干熱滅菌被廣泛用于不耐受高壓蒸氣的熱穩(wěn)定性物品的滅菌。如玻璃、金屬設(shè)備、器具，不需濕氣穿透的油脂類(lèi)（甘油、油類(lèi)、凡士林、石蠟），耐高溫的粉末化學(xué)藥品（滑石粉、磺胺類(lèi)藥物）等，但不適用于橡膠、塑料及大部分藥品。革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的脂多糖-內(nèi)毒素。低劑量?jī)?nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致人體發(fā)熱反應(yīng)，故而也稱之為熱原。 干 熱 滅 菌使用范圍可分為試驗(yàn)室器具用，生產(chǎn)制劑用，生產(chǎn)器具用干熱滅菌設(shè)備。按使用方式分為連續(xù)式和批量式，批量式干熱滅菌設(shè)備如干熱烘箱，可用于內(nèi)毒素檢驗(yàn)用玻璃

11、、金屬器具的滅菌和除熱原，以及生產(chǎn)設(shè)備部件、生產(chǎn)器具的滅菌除熱原；連續(xù)干熱滅菌設(shè)備，如隧道烘箱，可用于小容量注射劑的生產(chǎn)。按加熱方式可分為：以輻射加熱為主的熱輻射式干熱滅菌機(jī)和以對(duì)流加熱為主的熱層流加熱式干熱滅菌機(jī)等。 干 熱 滅 菌在特定溫度下，任一時(shí)間點(diǎn)的芽胞死亡特性僅與這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的芽胞濃度相關(guān)。微生物的熱致死特性Y軸及X軸均為普通座標(biāo)（示意）t N102030101001000半對(duì)數(shù)座標(biāo)Y軸：微生物取對(duì)數(shù)X軸：時(shí)間為10進(jìn)制普通座標(biāo)tlgN102030123無(wú)菌的影響因素可用下式表示: PNSU=N0-DR PNSU指非無(wú)菌品概率N0指滅菌前產(chǎn)品的污染水平DR指滅菌時(shí)的殺滅水平。 最終產(chǎn)

12、品的無(wú)菌質(zhì)量取決于兩個(gè)因素滅菌前的含菌量控制滅菌工藝的殺滅效果。微生物的熱致死特性：受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程dN/dtK(N0Nt) N0為t0時(shí)，存活的微生物數(shù)； Nt為t時(shí)被殺滅的微生物數(shù)； N為t時(shí)存活的微生物數(shù) K為常數(shù)。將上式積分得到：lgNt lgN0(K2.303)t專(zhuān) 業(yè) 名 詞D值在一定溫度下將微生物數(shù)量殺滅90%或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間z值滅菌溫度系數(shù) 即指使微生物D值改變(增加或減少)一個(gè)對(duì)數(shù)單位時(shí)，溫度應(yīng)變化(降低或升高)的度數(shù)。是耐熱曲線或熱致死時(shí)間曲線斜率的負(fù)倒數(shù)FTT滅菌時(shí)間 指滅菌程序賦予被滅菌品在T下的等效滅菌時(shí)間F0標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間 將121作為標(biāo)準(zhǔn)

13、滅菌溫度，當(dāng)z設(shè)定為10時(shí)，滅菌程序賦予被滅菌品121下的等效滅菌時(shí)間它是分析滅菌工藝效果的重要生物學(xué)參數(shù)。并且其數(shù)值可通過(guò)殘存曲線法或陰性分?jǐn)?shù)法加以確定。lgN0lgNtlg（N0Nt）t(K2.303)lgl01,所以D= t=2.303K.即：D是直線斜率的負(fù)倒數(shù)D 值越大，該溫度下微生物的耐熱性就越強(qiáng)，在滅菌中就越難殺滅。lgNt1234t1t2D對(duì)某一種微生物而言，在其他條件保持不變的情況下，D 值隨滅菌溫度的變化而變化。滅菌溫度升高時(shí)，直線方程的斜率變大，即使微生物殺滅90所需的時(shí)間就短滅菌溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌效果的時(shí)間就長(zhǎng)115121125lgNtlgN=1D125D121D1

14、15微生物名稱溫度介 質(zhì)D值min嗜熱脂肪桿菌105葡萄糖87.811032.011511.71212.4微生物名稱溫度介 質(zhì)D值min梭狀芽孢桿菌105葡萄糖1.3注射用水2.1微生物名稱溫度介 質(zhì)D值min嗜熱脂肪桿菌121葡萄糖乳酸林格液2.1葡萄糖2.4注射用水3.0微生物名稱溫度介 質(zhì)D值min梭狀芽孢桿菌105葡萄糖1.3嗜熱脂肪桿菌注射用水2.1在濕熱滅菌條件下，實(shí)驗(yàn)測(cè)得細(xì)菌芽胞的z值在8-12之間濕熱滅菌計(jì)算時(shí)z通常取10；干熱滅菌計(jì)算時(shí)Z通常取20，去熱原時(shí)Z通常取54 。 Z=直線斜率的負(fù)倒數(shù), 其中:D1指溫度為T(mén)1時(shí)的D值， D2指溫度為T(mén)2時(shí)的D值。tT（）D1D21

15、21117TD Z=-T/D =(Tl-T2)/log10 (D2/D1)，F(xiàn)0D l21LgNFTDTLgN達(dá)到同樣滅菌效果時(shí)，LgN 等值lgNtLgNoLgNt121117LgNFTFo指在某一溫度T()下滅菌1min 所獲得的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間所以 F0FTD121DTL= D121/Di =10 (Ti-121)/ZTi指各個(gè)滅菌時(shí)段的溫度標(biāo)準(zhǔn)參照溫度（121）Z10。100滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)于121 滅菌0.008分鐘，即Fo值為0.008分鐘。105滅菌40分鐘時(shí)，F(xiàn)o約為 1分鐘，能使D值為1分鐘的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)單位116下滅菌lmin 對(duì)芽孢殺滅效果只有標(biāo)準(zhǔn)滅菌狀態(tài)下的321

16、21下滅菌lmin 相當(dāng)于116下滅菌3.16min滅菌溫度 滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59可用滅菌率計(jì)算FT值=F0L=8/0.316=25.3F0=10 (Ti-T121)/Z dt=10 (116-121)/10 *25.3=8根據(jù)梯形規(guī)則，將整個(gè)滅菌過(guò)程(包括升溫、保溫和冷卻階段)的滅菌率累加，從而估算出某滅菌程序在標(biāo)準(zhǔn)溫度下的等效滅菌時(shí)間：F0=t（L1/2+L2+L3+Ln-1+Ln/2）, t指測(cè)量溫度的時(shí)間間隔。每?jī)纱螠y(cè)量溫度的時(shí)間間隔必須相同。

17、在初始及結(jié)束時(shí)間段的滅菌率非常小,可將公式簡(jiǎn)化為:FT=tL。L1 L2 L3 LN-1 LN100由 FT(LgN0LgNT)DT， FTDT LgN0LgNT，則lgNTlgN0FTDT。根據(jù)滅菌設(shè)備內(nèi)溫度監(jiān)控系統(tǒng)所測(cè)得的物理參數(shù)，估測(cè)某滅菌程序?qū)ξ⑸锏臍缧ЧT表示某實(shí)際微生物（待滅菌物品中的污染菌)或假設(shè)的微生物(生物指示劑)在T下的D值。例如，假設(shè)F0為8分鐘，DT=0.5分鐘，數(shù)量為106，由公式可以得出在滅菌結(jié)束時(shí)，芽胞的殘存數(shù)量為10-10，SAL=lgNT =6-8/0.5=-10。在整個(gè)滅菌過(guò)程中，芽胞數(shù)量的對(duì)數(shù)下降值: SLR=LgN0-LgNT= FTDT =6-

18、(-10) =8/0.5=16。生物指示劑，簡(jiǎn)稱為BI，是對(duì)特定滅菌者 工藝具有一定耐受性并且能夠定量測(cè)定滅 菌效力的微生物制劑，生物指示劑多為芽胞類(lèi)細(xì)菌，具有更強(qiáng)的耐受性。生物指示劑既可用來(lái)測(cè)定一個(gè)給定的滅菌工藝條件的滅菌效果，也可判別它是否符合無(wú)菌保證要求。采用生物指示劑做對(duì)照試驗(yàn)，是評(píng)判一個(gè)滅菌程序有效性的直接方法而且也是最佳方法。常用于滅菌工藝驗(yàn)證的生物指示劑主要有三種形式芽胞條芽胞懸浮液自含型生物指示劑 芽胞條 將芽胞接種于濾紙片、玻璃、塑料等薄片或條狀物，并用特定的材料包起來(lái)以保持其完整性和生物活性。直接接種到產(chǎn)品中.適用于驗(yàn)證和監(jiān)控非溶液類(lèi)物品的滅菌工藝.芽胞懸浮液 芽胞懸浮液可

19、被接種待滅菌產(chǎn)品溶液或模擬產(chǎn)品溶液中。直接接種于產(chǎn)品內(nèi)或產(chǎn)品外表面，這樣能更加直觀地考察產(chǎn)品的實(shí)際滅菌效果。芽胞接種到液體產(chǎn)品時(shí)，其耐熱性會(huì)增強(qiáng)或降低。如果不宜被直接接種于產(chǎn)品或耐熱芽胞與產(chǎn)品不相適應(yīng)，則可用模擬產(chǎn)品（生理鹽水或其他溶液）替代。但必須保證所用的替代品與產(chǎn)品具有相似的物理和化學(xué)性質(zhì)(如粘度和pH)，并且耐熱芽胞在替代品中的D值（耐熱性）不得小于在產(chǎn)品中的D值。否則將影響到滅菌工藝驗(yàn)證或日常監(jiān)控的可靠性。 自含型生物指示劑 是將芽胞條(或片)加入到含有指示劑的培養(yǎng)基包裝內(nèi)(如小瓶?jī)?nèi))，培養(yǎng)基單獨(dú)包裝并與芽胞載體分離，經(jīng)滅菌處理后，擠碎培養(yǎng)基小瓶使芽胞條(或片浸沒(méi)在培養(yǎng)基內(nèi)，在適當(dāng)溫

20、度和時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)，通過(guò)觀察培養(yǎng)基內(nèi)的酸堿指示劑的顏色變化判斷其生長(zhǎng)狀況;或?qū)⒀堪苯咏臃N在含有指示劑的培養(yǎng)基內(nèi)。自含型生物指示劑的耐熱性與其載體、包裝的材質(zhì)、結(jié)構(gòu)有很大的相關(guān)性；生物指示劑的包裝要易于殺菌劑透過(guò)。測(cè)定D值時(shí)務(wù)必要考慮包裝可能會(huì)引起殺菌效來(lái)的滯后，不能僅測(cè)定芽胞條(或片)的D值。滅菌溶液時(shí)，多選用自含型安瓶瓶生物指示劑滅菌織物時(shí)，多選用芽胞條滅菌管路時(shí)，選用特殊生物指劑(如用接有芽胞的鋼絲、線等)以測(cè)試死角處(最冷點(diǎn))的滅菌狀況滅菌方式 微生物（孢子） D值范圍（分） 濕 熱121嗜熱脂肪芽孢桿菌 Bacillus stearothermophilus 1.5-3.0 枯草芽孢桿菌

21、 Bacillus subtilis 0.3-0.7凝結(jié)芽孢桿菌 Bacillus coagulans 0.4-0.8梭狀芽孢桿菌 Clostridium sporogenes 0.4-0.8干熱 150 枯草芽孢桿菌黑色變種 Bacillus subtilis var. niger 1.0 注射劑無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)濾除菌無(wú)菌分裝（凍干）粉針劑溶液狀態(tài)下穩(wěn)定等注射液否是最終滅菌無(wú)菌生產(chǎn)否是熱壓滅菌殘存概率法不能耐受過(guò)度殺菌法過(guò)度殺菌法注射劑滅菌工藝 的選擇EMEA 滅菌工藝決策樹(shù)風(fēng)險(xiǎn)增加一般是濕熱滅菌方式 F08 ，首選過(guò)度殺滅法F012 ，如不能耐受過(guò)度殺滅，選用殘存概率法8F012 。最終滅菌非最

22、終滅菌生產(chǎn)工藝是在控制微生物污染量的基礎(chǔ)上，在完成內(nèi)包裝工藝生產(chǎn)過(guò)程最終采取一個(gè)可靠的滅菌措施。是在無(wú)菌系統(tǒng)環(huán)境下，通過(guò)除菌過(guò)濾法或無(wú)菌操作法，在完成內(nèi)包裝工藝生產(chǎn)全過(guò)程始終未采取單獨(dú)的滅菌措施?；?本 概 念無(wú)菌性的過(guò)程或內(nèi)容不同無(wú)菌保證值與Fo、D值及帶菌量的關(guān)系lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分11過(guò)度殺滅示意生產(chǎn)中Fo=8示意SALF0/D lgN0 假定D121為1方法F0N0SAL過(guò)度殺滅法12 1066殘存概率法81026確立滅菌終點(diǎn)-使微生物的殘存概率下降到100，在此基礎(chǔ)上再下降6個(gè)對(duì)數(shù)單位(即微生物的殘存概率不超過(guò)1/百萬(wàn)，或PNSU10

23、-6)滅菌過(guò)程中所產(chǎn)生的各項(xiàng)物理和生物學(xué)參數(shù)應(yīng)能保證其滅菌效果達(dá)到PNSU=10-6。生物學(xué)因素物理因素1.滅菌前微生物量: N02.滅菌前微生物的耐熱性: DT3.滅菌終點(diǎn)的殘存概率: NT (10-6)滅菌值:FT滅菌工藝開(kāi)發(fā) FT =（lgN0-lgNT）DT如果N0和DT已知，為使滅菌終點(diǎn)達(dá)到10-6的要求，可計(jì)算出滅菌前的帶菌量。 例如，滅菌前每個(gè)容器內(nèi)含有l(wèi)00個(gè)耐熱芽胞， 其DT = 1分鐘，滅菌值F0要達(dá)到8分鐘， 才能使產(chǎn)品中微生物降至100后，再下降6個(gè)對(duì)數(shù)單位: F0=2-(-6)x1=8分鐘。F0=8分鐘是滅菌工藝必須達(dá)到的最小目標(biāo)值。也可根據(jù)滅菌設(shè)備的性能和產(chǎn)品的熱穩(wěn)

24、定性確定F0的上限。滅菌工藝開(kāi)發(fā) 過(guò)熱滅菌時(shí)，不用考慮滅菌前含菌量。這并不意味著就不用對(duì)滅菌前含菌量進(jìn)行控制。相反，控制滅菌前產(chǎn)品中的污染菌含量也是非常重要的。過(guò)熱滅菌工藝常用于熱穩(wěn)定性物品的滅菌，如包裝材料和生產(chǎn)設(shè)備等。驗(yàn)證時(shí)，先通過(guò)確定完全殺滅含有106個(gè)嗜熱脂肪芽胞桿菌的生物指示劑（D121值為1.5分鐘左右)所需的滅菌時(shí)間，再將這個(gè)時(shí)間加倍即為實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的過(guò)熱滅菌時(shí)間。 過(guò)熱滅菌建立在含菌量控制基礎(chǔ)上的滅菌工藝，其滅菌終點(diǎn)是由滅菌前半成品的含菌量及所含微生物的耐熱性來(lái)決定的。生產(chǎn)時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)品被耐熱性微生物污染，而不能依賴于最終滅菌。有些產(chǎn)品在滅菌前進(jìn)行無(wú)菌生產(chǎn)和灌裝。控制滅菌前產(chǎn)品中的

25、含菌量，可以降低滅菌條件，降低滅菌時(shí)對(duì)產(chǎn)品及其容器/密封件的潛在破壞性。對(duì)熱敏性產(chǎn)品(如蛋白質(zhì))非常重要?dú)埓娓怕史ㄈ绻跍缇爱a(chǎn)品中沒(méi)有耐熱菌，可假設(shè)有一定數(shù)量的芽胞存在于其中(常規(guī)生產(chǎn)時(shí)可能會(huì)碰到的最差狀況)。如設(shè)每只容器內(nèi)含有 D121=0. 5分鐘的耐熱芽胞100個(gè)。根據(jù)與假設(shè)菌的數(shù)量及耐熱性相當(dāng)?shù)膶?shí)際生物指示劑(BI)來(lái)確定一個(gè)滅菌工藝的滅菌效果。根據(jù)置于滅菌產(chǎn)品內(nèi)的測(cè)溫探頭的測(cè)量數(shù)據(jù)計(jì)算出理論F0值，并對(duì)多次運(yùn)行的F0值進(jìn)行平均，將平均F0值與從接有生物指示劑(已知胞子數(shù)量和D值)的類(lèi)似容器中得到的平均SLR(spore log reduction)值進(jìn)行比較。殘存概率法根據(jù)生物指示

26、劑的致死效果，估算出實(shí)際污染菌的下降水平: SLR A=SLRB DB/DA SLR A滅菌前產(chǎn)品中污染菌的對(duì)數(shù)下降值SLR B生物指示劑的對(duì)數(shù)下降值DA滅菌前微生物的(已知或假定的)D值 DB生物指示劑D值。如果DA=0.5分鐘，DB=2.0分鐘，121 F0=8分鐘，SLRB= 4，則:SLR A=16, SLRA=4 (2.0/0.5)=16 lgNT =1gN0-SLR =2-16=-14, SAL=14。殘存概率法在滅菌結(jié)束時(shí)仍有一部分生物指示劑未被殺滅，但這并不意味著此滅菌程序無(wú)效。通過(guò)它們，證實(shí)了測(cè)溫探頭指示的F0值（8分鐘)所賦予容器內(nèi)物品的實(shí)際滅菌效果。殘存概率法只要對(duì)滅菌前

27、的含菌量進(jìn)行控制、監(jiān)測(cè)并掌握其耐熱性，一般是不會(huì)含有耐熱芽胞的控制手段對(duì)每批的灌封開(kāi)始和結(jié)束階段，分別對(duì)灌裝好的半成品取樣檢測(cè)。樣品須作需氧菌總計(jì)數(shù)將檢品液置于100下加熱10分鐘，檢查是否有耐熱芽孢存活須對(duì)微生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行趨勢(shì)分析以確保半成品的微生物處于穩(wěn)定的受控狀態(tài)殘存概率法一般情況下，暴熱后的樣品中是檢測(cè)不到微生物的，一旦發(fā)現(xiàn)，則需對(duì)其鑒別并測(cè)定其D值。若分離菌的D值大于滅菌工藝驗(yàn)證所用生物指示劑的D值，則說(shuō)明滅菌程序不充分，應(yīng)采取措施以消除產(chǎn)品中的耐熱菌。如果這些措施不可行，則應(yīng)采用具有更強(qiáng)耐熱性的生物指示劑，或是從產(chǎn)品中分離出的耐熱性微生物，對(duì)滅菌程序進(jìn)行再驗(yàn)證。生物學(xué)驗(yàn)證就是要

28、用與產(chǎn)品滅菌工藝相適應(yīng)的最苛刻條件來(lái)挑戰(zhàn)該產(chǎn)品滅菌工藝的有效性、可靠性和穩(wěn)定性。過(guò)度殺滅法：一般選擇嗜熱脂肪芽孢桿菌 。 殘存概率法：一般選擇梭狀芽孢桿菌液體產(chǎn)品在121滅菌15分鐘(藥典推薦的常用滅菌工藝)即被認(rèn)為過(guò)熱滅菌工藝。對(duì)管路、膠塞、織物以及過(guò)濾器等熱穿透性較差的物品則需要更長(zhǎng)的滅菌時(shí)間或更高的滅菌溫度，方能達(dá)到過(guò)熱滅菌要求（ 121滅菌30分鐘）。每個(gè)指示劑的芽胞含量通常在105-107之間生物指示劑有效性當(dāng)F0值 (DlgN0-2)時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陽(yáng)性結(jié)果當(dāng)F0值 (DlgN0+4)時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陰性結(jié)果生物指示劑要掌握滅菌前產(chǎn)品中污染菌狀況，污染菌的數(shù)量及其耐熱性;測(cè)

29、定生物劑在待驗(yàn)證產(chǎn)品及驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)溶液中的耐熱性(D值和Z值);根據(jù)產(chǎn)品的最低滅菌工藝條件、滅菌前產(chǎn)品中的污染菌控制要求及最終產(chǎn)品的無(wú)菌保證要求，用相關(guān)公式計(jì)算出驗(yàn)證時(shí)每個(gè)生物指示劑所需要的胞子數(shù)量。生物指示劑F0（分鐘）76543210-1-2-3-4-5-6孢子存活數(shù)量的對(duì)數(shù)值t58原料藥/賦形劑量微生物檢查微生物能否在原料或賦形劑中生長(zhǎng)或存活？原料/賦形劑合成/工藝相關(guān)步驟本身是否會(huì)減少微生物？所監(jiān)控的微生物量/指示菌量是否都低于規(guī)定限度？原料或賦形劑是否無(wú)菌？是否有科學(xué)證明減少步驟會(huì)造成原料/輔料中微生物量認(rèn)可限度（未檢出覺(jué)指示菌）？按照協(xié)調(diào)后藥典各論制訂微生物限度認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)提供支持?jǐn)?shù)據(jù)，

30、不必作微生物限度檢查和制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)不需進(jìn)一步作微生物限度檢查或制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)提供支持?jǐn)?shù)據(jù)，不必作微生物限度檢查和制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)逐批檢查微生物限度和指示菌抽批檢驗(yàn)微生物限度和指示菌按照協(xié)調(diào)后藥典各論制訂微生物限度認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)是否否否是是是 否是否滅菌前含菌量限度以及污染菌的耐熱性限度均是以原材料的微生物含量和常規(guī)監(jiān)控資料為基礎(chǔ)而建立的;滅菌條件及F0值控制是根據(jù)產(chǎn)品穩(wěn)定性研究資料而建立的;驗(yàn)證用芽胞在每種產(chǎn)品中的實(shí)際耐熱性資料由微生物實(shí)驗(yàn)室測(cè)得。logN0 = F0/D121 +logNtNt = 2.303 log(n/q)n:每次挑戰(zhàn)試驗(yàn)用生物指示劑數(shù)量q:挑戰(zhàn)試驗(yàn)后呈陰性的BI數(shù)量如果全都是陰性,

31、則假定 q = n-1用于計(jì)算 Nt產(chǎn)品滅菌前含菌量控制限度CFU/瓶耐熱性DC DBI溫度時(shí)間F0控制范圍）驗(yàn)證用孢子在其中的耐熱性D121A100 116259 -130.8 分B100DC DBI116258 - 120.9 分C100 DC DBI118209 130.7 分可選擇產(chǎn)品B代表上述三產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證產(chǎn)品的規(guī)格相同、且在同一滅菌設(shè)備內(nèi)滅菌并且滅菌工藝條件相似、以及生物指示劑芽胞在其中的耐熱性也較為相近，只要驗(yàn)證其中的一個(gè)產(chǎn)品B即可，生物指示劑在其中的耐熱性最高，而滅菌程序的F0值的下限低于其它二產(chǎn)品但驗(yàn)證時(shí)要以100CFU/瓶作為污染菌含量通過(guò)試驗(yàn)證明滅菌程序能使生物指示劑至少

32、下降 8個(gè)對(duì)數(shù)單位, 所需F0為 D121 log = 7.2分最低F0滿足要求確定驗(yàn)證用芽孢在每瓶產(chǎn)品B中的接種數(shù)量驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)溶液為氯化鈉一磷酸鹽緩沖液(PBS)，驗(yàn)證試驗(yàn)瓶數(shù)量為20袋/次。，產(chǎn)芽胞梭狀菌芽胞在氯化鈉一磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中的耐熱性為1.4分鐘，高于其在產(chǎn)品中的耐熱性，接種量: F0=D121(1gA-1gB) 根據(jù)陰性分?jǐn)?shù)法，B=2.303 log(n/q)假如所有的20只試驗(yàn)瓶無(wú)菌檢查結(jié)果均呈陰性，在計(jì)算時(shí)可假定只有19瓶呈陰性，那么，B=2.303lg(20/19)=0.0513,lgB=-1.29,lgA=F0/D121+lgB=8/1.4-1.29=

33、4.4, A=104.4個(gè)菌.每個(gè)挑戰(zhàn)瓶?jī)?nèi)的芽胞接種量可控制在104105之間。驗(yàn)證時(shí)，腔室內(nèi)的物品應(yīng)按實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的要求進(jìn)行裝載生物指示劑的使用數(shù)量應(yīng)足以反映整個(gè)物品內(nèi)、外部的滅菌狀況，生物指示劑既要遍布整個(gè)腔室，又要盡可能地放在熱效應(yīng)最差的部位，如物品中央、管路拐角以及腔室的排水口(干熱滅菌的排風(fēng)口)等應(yīng)將生物指示劑與物理測(cè)試用溫度探頭放于同一位置，以準(zhǔn)確獲取物理參數(shù)與微生物致死性之間的相關(guān)性資料放置在每個(gè)位置的生物指示劑均應(yīng)做好標(biāo)記，并且要與驗(yàn)證文件中生物指示劑的驗(yàn)證分布圖相對(duì)應(yīng)驗(yàn)證時(shí)，采用相關(guān)產(chǎn)品的最低滅菌條件進(jìn)行滅菌處理滅菌程序結(jié)束后，將生物指示劑取出并清點(diǎn)數(shù)量并確認(rèn)無(wú)誤后，送至微生物

34、室，于適當(dāng)條件下培養(yǎng)檢查。陽(yáng)性對(duì)照以及培養(yǎng)基的靈敏度。在初始驗(yàn)證階段，分別用生物指示劑在相同的滅菌條件下至少連續(xù)運(yùn)行3次，以評(píng)價(jià)滅菌工藝條件的穩(wěn)定性;在以后的定期再驗(yàn)證中，每次檢測(cè)一批即可。驗(yàn)證時(shí)的生物指示劑分布、腔室內(nèi)的產(chǎn)品裝載及指示劑的控制要求均與過(guò)熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)生物指示劑的使用原則相同。 與過(guò)熱滅菌工藝相比，殘存概率滅菌工藝的滅菌效力相對(duì)較低，用商購(gòu)的普通生物指示劑無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)殘存概率滅菌工藝的驗(yàn)證。商購(gòu)的生物指示劑一般用于驗(yàn)證F0值大于等于15分鐘的滅菌工藝，而且在載體上的耐熱性與在實(shí)際產(chǎn)品中的耐熱性有相當(dāng)大的差異。直接將芽胞加到產(chǎn)品溶液內(nèi)，因其耐熱性較高，只能加人較少數(shù)量(如Dl21

35、值為2.4分鐘，則單位驗(yàn)證產(chǎn)品中的胞子數(shù)量只能控制在100個(gè)左右才可能被完全殺滅)，這就難以直觀反映實(shí)際滅菌工藝的可靠性和穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞在孢子紙條或注射用水中的耐熱性(D121)約為1.5分，但在乳劑內(nèi)的耐熱性約為2.4分鐘。在同等條件(介質(zhì)和溫度)下，產(chǎn)芽胞梭菌芽胞的耐熱性D121值在0.8-1.5分之間，并且它的耐熱性也比較穩(wěn)定。當(dāng)驗(yàn)證F0值在8 12分鐘的殘存概率滅菌工藝時(shí)，根據(jù)產(chǎn)芽胞梭菌芽胞在實(shí)際產(chǎn)品溶液中的耐熱性，可將單位驗(yàn)證產(chǎn)品中的孢子數(shù)量控制在l06個(gè)以上。因而能較直觀表現(xiàn)實(shí)際滅菌工藝的滅菌效果。并非所有滅菌工藝都必須在最苛刻條件下進(jìn)行驗(yàn)證，而是以滅菌工藝的

36、實(shí)際條件及驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)來(lái)制定適當(dāng)?shù)纳镏甘緞?yàn)證方案，從而證明相關(guān)產(chǎn)品滅菌工藝的可靠性濕熱滅菌特點(diǎn)蒸汽有利于蛋白質(zhì)的變性和酶的失活，從而殺滅細(xì)胞 蒸汽熱穿透性強(qiáng) 滅菌效率高溫度相對(duì)較低滅菌時(shí)間相對(duì)短滅菌過(guò)程不產(chǎn)生任何化學(xué)物理污染滅菌設(shè)備控制參數(shù)少，運(yùn)行穩(wěn)定，方便管理 滅 菌 柜 驗(yàn) 證干熱滅菌要點(diǎn)干熱滅菌的介質(zhì)通常是熱空氣用對(duì)數(shù)規(guī)則描述微生物殺滅過(guò)程，準(zhǔn)確性較差溫度高，200 以上，有可能到320 用于玻璃容器、手術(shù)器械等無(wú)菌生產(chǎn)工藝中安瓿、西林瓶的滅菌和去熱源滅菌過(guò)程的Fo 示意混合蒸汽-空氣滅菌器該型滅菌器配有滅菌腔體、離心風(fēng)機(jī)、熱交換器、隔板，并連接壓縮空氣、蒸汽/純蒸汽、真空泵等。當(dāng)蒸

37、汽進(jìn)入滅菌柜時(shí)，風(fēng)機(jī)將蒸汽和滅菌器內(nèi)的空氣混合并循環(huán)，將產(chǎn)品和空氣同時(shí)滅菌。蒸汽中加入空氣，即可產(chǎn)生一個(gè)高于一定溫度下飽和蒸汽壓的壓力。與飽和蒸汽滅菌相比，它的熱傳遞速率較低?；旌险羝?空氣滅菌器混合蒸汽滅菌柜SAM= steam air mixture蒸汽空氣混合滅菌柜混合汽體滅菌柜進(jìn)蒸汽的管沒(méi)畫(huà)出頂上用一風(fēng)扇，使滅菌均勻無(wú)風(fēng)扇時(shí)，滅菌容易不均勻熱交換器控制冷卻速度下排式蒸汽滅菌柜熱蒸汽在上冷空氣在下蒸汽擠空氣用于實(shí)驗(yàn)室脈動(dòng)真空式蒸汽滅菌器是藥品生產(chǎn)中所采用的最典型的高壓蒸汽滅菌器，通常由滅菌腔體、密封門(mén)、控制系統(tǒng)、管路系統(tǒng)等組成，并連接壓縮空氣、蒸汽/純蒸汽、真空泵等。在滅菌階段開(kāi)始之前通

38、過(guò)真空泵或其他系統(tǒng)將空氣從腔室移除，然后通入飽和蒸汽，反復(fù)進(jìn)行真空、通入蒸汽，將空氣徹底置換后進(jìn)行滅菌。滅菌器設(shè)有真空系統(tǒng)和空氣過(guò)濾系統(tǒng)，滅菌程序由計(jì)算機(jī)控制完成，腔體內(nèi)冷空氣排除比較徹底；具有滅菌周期短、效率高等特點(diǎn)。脈動(dòng)真空式蒸汽滅菌器對(duì)物品包裝、放置要求較寬，且真空狀態(tài)下物品不易氧化損壞的特點(diǎn)，常用于對(duì)空氣難以去除的多孔/堅(jiān)硬裝載進(jìn)行滅菌，尤其適用于可以包藏或夾帶空氣的裝載物，比如軟管、過(guò)濾器和灌裝機(jī)部件。脈動(dòng)真空式蒸汽滅菌器脈動(dòng)真空蒸汽滅菌柜有高真空及脈動(dòng)真空二種形式第二種比較常見(jiàn)抽99%，剩1%3次真空，殘存的空氣為0.1%密封圈噴 淋 滅 菌 柜該類(lèi)滅菌器配置有熱水儲(chǔ)罐、熱交換單元

39、、循環(huán)風(fēng)機(jī)、循環(huán)泵、旋轉(zhuǎn)裝置等。滅菌時(shí)，產(chǎn)品被固定在托盤(pán)上，滅菌水開(kāi)始進(jìn)入滅菌腔體，通過(guò)換熱器循環(huán)加熱、蒸汽直接加熱等方式對(duì)滅菌水加熱，噴淋到滅菌。滅菌結(jié)束后滅菌器可以對(duì)滅菌水進(jìn)行回收。部分工藝可以通入無(wú)菌空氣，加熱循環(huán)、除水等工藝對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行干燥。這類(lèi)過(guò)熱水循環(huán)的滅菌程序都使用空氣加壓，保持產(chǎn)品的安全所需要的壓力。優(yōu)點(diǎn)是加熱和冷卻的速率容易控制，通常適用于軟袋制品的滅菌。 噴 淋 滅 菌 柜旋 轉(zhuǎn) 噴 淋 滅 菌 柜干 熱 滅 菌 柜常見(jiàn)程序：1802小時(shí)，細(xì)菌內(nèi)毒素下降3對(duì)數(shù)單位隧道式洗瓶滅菌柜工作原理圖瓶清潔排水汽預(yù)熱去熱原冷卻干熱滅菌層流保護(hù)洗瓶及滅菌、去熱原為聯(lián)動(dòng)線B區(qū)冰浴0.01油浴

40、121數(shù)據(jù)采集器參照儀驗(yàn)證儀校準(zhǔn)滅菌柜熱分布驗(yàn)證試驗(yàn)圖示滅 菌 柜 驗(yàn) 證滅菌程序的效力測(cè)定 生物學(xué)手段 用特定的生物指示劑作為標(biāo)準(zhǔn)微生物制劑 數(shù)據(jù)直接反映滅菌效果 有時(shí)可取代物理手段的不足(如探頭無(wú)法放入安瓿瓶) 局限性：較難進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 物理/數(shù)學(xué)手段 用滅菌值F0作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 精確測(cè)定熱分布和熱穿透狀況 便于準(zhǔn)確計(jì)算不同滅菌條件下的滅菌效果 測(cè)量數(shù)據(jù)便于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析滅 菌 工 藝 驗(yàn) 證滅菌工藝驗(yàn)證前提滅菌設(shè)備的安裝確認(rèn)滅菌設(shè)備的運(yùn)行確認(rèn)滅菌工藝的驗(yàn)證先對(duì)設(shè)備溫度儀表和驗(yàn)證用儀表進(jìn)行校準(zhǔn)空載熱分布找到滅菌過(guò)程中滅菌設(shè)備的最冷點(diǎn)不同裝載形式、不同裝量規(guī)格產(chǎn)品的熱穿透試驗(yàn)產(chǎn)品獲得的F0生物指

41、示劑驗(yàn)證-微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)滅菌工藝條件（滅菌介質(zhì)、溫度時(shí)間參數(shù)、裝載方式等）滅菌設(shè)備和滅菌工藝的驗(yàn)證滅菌工藝驗(yàn)證方案.常包括以下內(nèi)容:1.滅菌設(shè)備的構(gòu)造概述(包括生產(chǎn)商和型號(hào)、設(shè)備結(jié)構(gòu)圖、運(yùn)行流程圖、工藝制控制流程圖等)。2.所使用的具體滅菌工藝(如飽和蒸氣、水浸沒(méi)、水噴淋等方式)3.滅菌工藝參數(shù)和運(yùn)行的標(biāo)準(zhǔn)(如溫度、壓力、時(shí)間、最大及最小Fo值等)。4.被滅菌物品(如裝載方式、產(chǎn)品組分、容器大小、灌裝體積、最大及最小裝載量等)。5.滅菌工藝的監(jiān)控方法(如測(cè)溫探頭、模擬瓶、生物指示劑的數(shù)量及位置以及合格/不合格標(biāo)準(zhǔn))。6.關(guān)鍵參數(shù)的最大/最小允許范圍。7.自動(dòng)及手動(dòng)控制的操作步驟。8.驗(yàn)證時(shí)異

42、常情況下的記錄清單。9.產(chǎn)品所能承受的滅菌致死范圍(F0值范圍)。10.物理驗(yàn)證試驗(yàn)方法(熱分布、熱穿透試驗(yàn))。11.生物學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)方法(生物指示劑的選擇及使用方式)。12.對(duì)滅菌工藝偏差所進(jìn)行的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)要求及方法 驗(yàn)證試驗(yàn)在確立一個(gè)滅菌工藝的滅菌終點(diǎn)時(shí)，必須要考慮相關(guān)的生物學(xué)和物理學(xué)因素。了解滅菌設(shè)備的運(yùn)行特性對(duì)因素的影響。采用12個(gè)以上熱電偶/熱電阻探頭測(cè)試.測(cè)試前所、后有探頭校正，一般0和125 兩點(diǎn)校正，在121校正確認(rèn)，要求與標(biāo)準(zhǔn)溫度差值在 0.5之內(nèi)。每種方式找出設(shè)備的“冷點(diǎn)”和“熱點(diǎn)”。 1)整個(gè)滅菌腔室內(nèi)的溫度探頭應(yīng)均勻分布，將水平和垂直區(qū)均覆蓋在內(nèi)。 2)說(shuō)明溫度探頭在腔室

43、內(nèi)的數(shù)量及位置，并有圖示。 3)在排水口處，在靠近設(shè)備本身的溫度傳感/控制器的位置，應(yīng)再放置一支探頭。 4)在滅菌溫度穩(wěn)定期，各處溫度應(yīng)基本保持一致(各點(diǎn)之間的溫差在1范圍內(nèi),與腔室平均溫度間的差值及與滅菌柜設(shè)定溫度的差值)。（121 ，12分，fo=12，9.5 15.1） 5)重復(fù)試驗(yàn)至少3次，以證明在該工藝條件下的溫度均一性、重現(xiàn)性、并且與規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)相符。 (一) 熱分布試驗(yàn)1.空載狀態(tài)下的熱分布試驗(yàn) 2.每種裝載方式下的熱分布試驗(yàn)。不同裝載方式對(duì)產(chǎn)品的熱力學(xué)效果的影響. 在產(chǎn)品容器內(nèi)以及腔室內(nèi)均勻放置測(cè)溫探頭以確定在裝載狀態(tài)下升溫最緩慢的位置。此試驗(yàn)應(yīng)在最大和最小裝載方式下分別進(jìn)行。 1

44、)保溫階段的最高和最低溫度(溫度范圍)及平均溫度 2)最小和最大F0值 3)保溫時(shí)間 3.復(fù)試驗(yàn)3次，以證明在該工藝條件下的溫度均一性、重現(xiàn)性、并且與規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)相符。探頭放在產(chǎn)品外面，不與產(chǎn)品接觸(二)各種裝載方式下的熱穿透試驗(yàn)通過(guò)在產(chǎn)品容器內(nèi)均勻分布測(cè)溫探頭以確定在滅菌時(shí)相應(yīng)裝載方式下的冷點(diǎn)。應(yīng)分別在最大和最小裝載方式下進(jìn)行此試驗(yàn)，以確定不同裝載方式對(duì)被滅菌物品的熱力學(xué)效果的影響。通過(guò)實(shí)驗(yàn)應(yīng)能獲得如下數(shù)據(jù):各點(diǎn)間的最高和最低溫度(溫度范圍)保溫階段各點(diǎn)的平均溫度各點(diǎn)的最小及最大F0值各點(diǎn)的保溫時(shí)間。通過(guò)熱穿透試驗(yàn)應(yīng)達(dá)到以下目的:1.測(cè)試數(shù)據(jù)應(yīng)證明，在滅菌保溫階段整個(gè)腔室內(nèi)各容器內(nèi)的溫差應(yīng)不超過(guò)

45、土l ，各容器內(nèi)溫度之間的最大溫差應(yīng)不超過(guò)2。2.根據(jù)滅菌參數(shù)確定合適的產(chǎn)品滅菌程序。3.至少連續(xù)運(yùn)行3次，以確保設(shè)定滅菌程序的穩(wěn)定性和可靠性。 對(duì)于大輸液產(chǎn)品及高粘性的液體產(chǎn)品，必須對(duì)容器內(nèi)的冷點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試。對(duì)旋轉(zhuǎn)滅菌釜可以不用考慮容器內(nèi)的冷點(diǎn)上中下生物指示劑驗(yàn)證 - 過(guò)度殺滅工藝選擇與滅菌條件（工藝、對(duì)象及程序）相適應(yīng)的生物指示劑（ B. stearothermophilus ATCC 7953 被視為標(biāo)準(zhǔn)菌株 D121.1= 1.5分，單位數(shù)量105 106個(gè)孢子）生物指示劑與溫度探頭并列在同一部位(10-20支)按規(guī)定條件培養(yǎng)生物指示劑，如嗜熱脂肪芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為 55-60oC，培

46、養(yǎng) 7天，每天檢查。對(duì)生物指示劑用培養(yǎng)基進(jìn)行促生長(zhǎng)檢查進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)所有經(jīng)受挑戰(zhàn)試驗(yàn)的樣品均呈陰性生物指示劑驗(yàn)證 非過(guò)度殺滅工藝選擇與滅菌條件（工藝、對(duì)象及程序）相適應(yīng)的生物指示劑生物指示劑的耐熱性不得低于孢子在相應(yīng)產(chǎn)品中的耐熱性不得低于產(chǎn)品中污染菌的耐熱性用于每次挑戰(zhàn)試驗(yàn)的所有BI批號(hào)必須相同.生物指示劑的接種量計(jì)算F0 = D121.1 ( logN0 - logNt )指示劑數(shù)量為20支左右。BI的D值是在被驗(yàn)證產(chǎn)品中的D值。與熱穿透試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，放置在探頭附近。結(jié)果能與熱穿透保持一致。所有測(cè)試點(diǎn)均應(yīng)確保 SAL不低于 6。重復(fù)三次。生物指示劑測(cè)試再 驗(yàn) 證 和 變 更 管 理再驗(yàn)證進(jìn)行再驗(yàn)證的條件設(shè)備、產(chǎn)品、工藝有重大改變，或設(shè)備有重大維修定期的常規(guī)再驗(yàn)證（一次/12月）驗(yàn)證方法通常與初次 PQ 方案相同。變更管理有相關(guān)SOP來(lái)評(píng)價(jià)變更對(duì)工藝的潛在影響根據(jù)變更評(píng)估結(jié)果確定再驗(yàn)證的范圍 用相同的方法