乙肝母嬰阻斷檢測技術(shù)要點課件

1、預防乙肝母嬰傳播檢測及干預要點.預防乙肝母嬰傳播一、概述二、乙型肝炎病毒的檢測三、慢性HBV感染臨床診斷四、慢性HBV感染者孕前孕期保健 五、預防乙肝母嬰傳播干預要點預防乙肝母嬰傳播一、概述 1、乙型肝炎病毒的流行病學 2、乙型肝炎病毒 3、傳播途徑 4、HBV感染自然史 1、乙型肝炎病毒的流行病學世界性分布 WHO 20億人感染過HBV 3.5億人為慢性HBV感染者 約100萬人/年 死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和HCC HBsAg(+)率2% 低度流行區(qū) 2%-8% 中低度流行 8% 高度流行區(qū) 1992年 9.75%中國衛(wèi)生部 20082006年 1-59歲 降至7.18% 1-4

2、 歲 0.96% 5-14歲 2.42% 15-59歲 8.57% 1992年 以來兒童HBV感染者減少1900萬 現(xiàn)有慢性HBV感染者約9300萬人，慢性乙型肝炎患者約2000萬例 WHO 2001年指南指出HBsAg攜帶者中90%是圍產(chǎn)期感染。 2、乙型肝炎病毒病原：HBV (hepatitis B virus) 嗜肝DNA病毒科 HBV的抵抗力較強，但65 10小時、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活。環(huán)氧乙烷(仍保留抗原性及免疫原性)、戊二醛、過氧乙酸和碘伏也有較好的滅活效果。 對干燥、紫外線均有耐受性。 .HBV陽性的血清中有三種顆粒：. 完整的HBV顆粒，直徑為42nm，又名Dane顆

3、粒，1965年由丹娜發(fā)現(xiàn)，顆粒分為外殼和核心兩部分。 .小球形顆粒，陽性血清中最多的顆粒，直徑約22nm。含有表面抗原，不含核酸，為不完整的HBV顆粒，無傳染性.管形顆粒，直徑約22nm，長度1001000nm。實際上是一串小球形顆粒聚合在一起形成，含有表面抗原，不含核酸，無傳染性。3、傳播途徑血液、體液（唾液、精液、陰 道分泌物、乳汁、淚液、尿液）母嬰輸血及血制品性傳播皮膚、粘膜 HBV不經(jīng)呼吸道和消化道傳播 ，未發(fā)現(xiàn)HBV能經(jīng)吸血昆蟲（蚊、臭蟲等）傳播 傳染源：攜帶者、急慢性病人 傳染性 主要取決于血液中HBV DNA 水平，與血清ALT、AST或膽紅素水 平無關(guān)。 人群易感性 普遍易感

4、新生兒、易感兒童、高危人群重點預防 潛伏期：155個月4、HBV感染自然史自然史 感染時的年齡是影響慢性化的最主要因素。 圍產(chǎn)期和嬰幼兒時期感染HBV，分別有90%和25%30%發(fā)展成慢性感染，而5歲以后感染者僅有5%10%發(fā)展為慢性感染 嬰幼兒期 免疫耐受期 免疫清除期 非活動或低（非）復制期 再活動期 免疫耐受期： 血清HBsAg和HBeAg陽性，HBVDNA載量高（2106 IU/ml，107拷貝/ml），ALT水平正常，肝組織學無明顯異常HBeAganti-HBeHBV DNA ALT 肝組織無明顯異常 肝組織壞死炎癥表現(xiàn) 肝組織無明顯異常 肝組織壞死炎癥慢性HBV感染的自然病程 免疫

5、耐受 免疫清除 非活動或低復制期 再活動活動性慢性乙型肝炎肝硬化HBsAg 活動性慢性乙型肝炎肝硬化二、乙型肝炎病毒的檢測 1、乙型肝炎病毒的檢測 2、乙型肝炎病毒血清學標志物 3、慢性HBV感染臨床診斷 檢測方法檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、金標記免疫分析（膠體金）、化學發(fā)光免疫試驗（CLIA）等。推薦使用酶聯(lián)免疫吸附試驗。定量、定性檢測流程孕產(chǎn)婦初次接受孕產(chǎn)期保健時，提供乙肝表面抗原檢測。檢測結(jié)果陽性，報告“乙肝表面抗原陽性”，確定乙肝病毒感染。有條件的地區(qū)，可在篩查時直接進行乙肝病毒感染血清學標志物（兩對半）檢測。乙肝病毒感染血清學標志物乙肝表面抗原（HBsAg）乙肝表面抗體

6、（抗HBs）乙肝e抗原（HBeAg）乙肝e抗體（抗HBe）乙肝核心抗體（抗HBc）HBVDNA乙肝病毒感染標志物抗原抗體外 膜HBsAgHBsAb核殼分泌蛋白HBeAgHBeAb核殼結(jié)構(gòu)蛋白HBcAb 乙肝“兩對半”酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)原理：先將已知的抗體或抗原結(jié)合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。測定時，將待檢標本和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應。用洗滌的方法分離抗原抗體復合物和游離部分。最后加入底物顯色，根據(jù)顏色深淺進行定性或定量測定。用于測定抗原的技術(shù)類型有：雙抗體夾心法、雙位點一步法、競爭法。用于測定抗體的技術(shù)類型有：間接法、雙抗原夾心法、競爭法。乙肝

7、五項方法學乙肝表面抗原（HBsAg）：雙抗體夾心法乙肝表面抗體（抗HBs）：雙抗原夾心法乙肝e抗原（HBeAg）：雙抗體夾心法乙肝e抗體（抗HBe）：競爭法乙肝核心抗體（抗HBc）：競爭法雙抗體夾心法、雙抗原夾心法：一定范圍內(nèi)，顯色程度與待測成分的含量成正比。競爭法：顯色程度與待測成分的含量成反比競爭法原理以乙肝e抗體（抗HBe）檢測為例：在微孔板上預包被HBeAg，加入待測樣本和酶標抗體（抗HBe-HRP)試劑進行溫育，酶標抗體和樣本中的抗HBe競爭酶標板上包被的抗原，若樣本中無抗HBe時，酶標抗體與包被抗原結(jié)合形成“包被抗原-酶標抗體復合物”，洗板后加入酶底物顯色溶液進行顯色反應。若樣本中

8、存在抗HBe時，會與酶標抗體競爭形成“包被抗原-抗體復合物”，不顯色。乙肝五項檢測的影響因素樣本采集與處理的影響干擾物質(zhì)的影響：常見的干擾物質(zhì)有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig 抗體、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等藥物的影響：高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復合物，影響HBsAg的檢出HooK效應影響：隨著ELISA一步法的應用，一些標本中抗原含量過高，產(chǎn)生HooK效應。影響檢測結(jié)果，采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減HooK反應的發(fā)生試劑的影響免疫金標記技術(shù)：膠體金是一種是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種免疫標記技術(shù)，膠體金

9、是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑的作用下，聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結(jié)合而不影響蛋白質(zhì)的生物特性。 免疫金標記技術(shù)： 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。 HBsAg陽性，目前感染，患者或病毒攜帶者。 HBsAg一般于感染后4-6周陽轉(zhuǎn)，當出現(xiàn)ALT異常、肝炎癥狀和體征時，血清中HBsAg達高峰。 自限性HBV感染中，HBsAg持續(xù)

10、約1-6周后消失。 慢性HBV感染時，HBsAg可持續(xù)存在。HBsAg陽性見于：！急性乙肝慢性乙肝；HBsAg攜帶者；乙肝后肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌。. 抗HBs是保護性抗體?？笻Bs陽性，曾感染或免疫，機體已產(chǎn)生免疫力。見于： 1.感染HBV后的恢復期，在HBsAg消失后間隔一定時間抗-HBs出現(xiàn)； 2.隱性感染的健康人，小量多次接觸HBV，自身產(chǎn)生了免疫力； 3.注射乙肝疫苗或乙肝免疫球蛋白后，產(chǎn)生免疫。 4.急性重型肝炎 抗-HBc 總抗體 一般在HBsAg出現(xiàn)3-5周后陽轉(zhuǎn) 抗-HBc-IgG，感染過HBV，無論病毒是否被清除，多為陽性。 抗-HBc-IgM陽性，HBV復制，乙型肝炎急性

11、期，慢性乙型肝炎急性發(fā)作； 抗HBe陽性，感染恢復期，傳染性低，病情趨于穩(wěn)定?？?HBe一般在HBeAg消失前后出現(xiàn) HBeAg陽性 HBV復制，傳染性強，轉(zhuǎn)為慢性肝炎者多。 HBV DNA陽性，HBV復制，有傳染性 HBeAg陽性，HBV DNA陽性 HBeAg陰性，HBV DNA陽性 31乙肝標記物列表抗原/抗體解釋 臨床意義 HBsAg潛在感染出現(xiàn)癥狀前數(shù)周或之后數(shù)月可檢測到慢性感染時持續(xù)存在感染HBVHBeAg病毒復制，傳染性高有傳染性抗HBs抗體對HBV免疫（疫苗或既往感染）對HBV免疫抗HBc抗體（總）急性、慢性或既往感染暴露抗HBc IgM抗體急性感染急性感染31三、慢性HBV感

12、染臨床診斷 既往有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過6個月，現(xiàn)HBsAg和（或）HBV DNA仍為陽性者，可診斷為慢性HBV感染。 慢性HBV感染分為 1. 慢性乙型肝炎 (輕度、中度和重度) （1）H B e A g 陽性慢性乙型肝炎 （2）HBeAg陰性慢性乙型肝炎 2.乙型肝炎肝硬化 (活動期或靜止期 ) （1）代償期肝硬化 （2）失代償期肝硬化 3.攜帶者 （1）慢性HBV攜帶者 （2）非活動性HBsAg攜帶者 （1）慢性HBV攜帶者 HBsAg陽性 / HBeAg 陽性 HBVDNA陽性 1 年內(nèi)隨訪3 次以上，ALT 和AST 正常，肝組織學檢查 （2）非活動性HBsAg攜帶者： 血

13、清HBsAg陽性、HBeAg陰性、抗-HBe陽性或陰性，HBV DNA低于最低檢測限，1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上，ALT均在正常范圍。肝組織學檢查顯示Knodell肝炎活動指數(shù)（HAI）4或根據(jù)其他的半定量計分系統(tǒng)判定病變輕微。4.隱匿性慢性乙型肝炎 HBsAg陰性，血清和（或）肝組織HBV DNA陽性，并有慢性乙型肝炎的臨床表現(xiàn)。除HBV DNA陽性外，患者可有血清抗-HBs、抗-HBe和（或）抗-HBc陽性。 四、慢性HBV感染者孕前孕期保健與相關(guān)科室協(xié)作，詳細了解其肝炎病史及治療情況，正確判斷疾病程度。肝功能異常應暫緩妊娠。妊娠期定期監(jiān)測肝功能，必要時給予專科指導或轉(zhuǎn)介服務。給予科學的營養(yǎng)支

14、持和指導。.乙肝病毒感染者：大多數(shù)早、中孕肝功正常，少數(shù)孕中、晚期ALT升高。ALT升高者，半數(shù)無自覺癥狀，出現(xiàn)癥狀示病情較重。首發(fā)癥狀尿黃，消化道癥狀少。少數(shù)慢乙肝患者孕期肝功惡化，1/3-1/4為產(chǎn)后1-3月肝功惡化。.仔細詢問癥狀、詳細查體。出現(xiàn)不明原因的上腹痛或惡心、乏力、食欲不振，立即查肝功能。肝功能異常者一步轉(zhuǎn)診到位。禁止讓病人往返奔波加重病情。.分娩時，應嚴格施行消毒隔離制度，防止產(chǎn)傷及新生兒損傷、羊水吸入等，以減少母嬰傳播。防止和避免產(chǎn)后出血。 產(chǎn)后注意休息、復查肝功能，如出現(xiàn)ALT升高，停止哺乳，轉(zhuǎn)往傳染科治療。 五、預防乙肝母嬰傳播干預要點HBV母嬰垂直傳播通過孕育的過程，

15、攜帶HBV的女性將HBV傳播給子女。主要包括宮前感染（相關(guān)研究甚少，尚不能確證）、宮內(nèi)感染、產(chǎn)時感染和產(chǎn)后感染成為人群中新一輪的HBV儲存庫和傳染源。目前由此導致的慢性HBV感染無法根治HBV的傳播途徑血液傳播性傳播母嬰傳播母嬰的傳播宮內(nèi)傳播產(chǎn)時傳播產(chǎn)后及水平傳播HBV的母嬰阻斷母嬰阻斷的重點時期：圍生期是乙肝母嬰傳播的主要時期 胎嬰兒感染率在妊娠早、中期約為5%，主要時期妊娠晚期及分娩時我國乙型肝炎病毒的免疫預防我國衛(wèi)生部于1992年將乙型肝炎疫苗納入計劃免疫管理，對所有新生兒接種乙型肝炎疫苗，但疫苗及其接種費用需由家長支付；2002年起正式納入計劃免疫，對所有新生兒免費接種乙型肝炎疫苗，但

16、需支付接種費；2005年6月1日起改為全部免費。 衛(wèi)生部 2012預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作對乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦所生新生兒，在出生后24小時內(nèi)注射乙肝免疫球蛋白（100國際單位）。按照國家免疫規(guī)劃要求，完成24小時內(nèi)及1月齡和6月齡兒童的三次乙肝疫苗接種。.出生后24小時內(nèi)注射HBIG（最好在出生后12小時） ，劑量100IU，同時在不同部位注射10g重組酵母或20g中國倉鼠卵母細胞（CHO）乙型肝炎疫苗1個月后再注射第二針HBIG，并按程序（0、1、6）接種乙肝疫苗。新生兒：臀部外側(cè)肌肉國產(chǎn)乙肝酵母疫苗的母嬰傳播阻斷率達到80.56%-92.59%（87.8%）嬰兒在出生后24小

17、時內(nèi)接種乙肝疫苗，產(chǎn)生的血清免疫效價最好，能較好地阻斷HBV的母嬰傳播。乙型肝炎疫苗接種時間.新生兒期接種乙肝疫苗后，隨時間的推移，抗HBs可陰轉(zhuǎn)，但仍具有對HBsAg的特異性免疫回憶反應。受益終生。計劃免疫技術(shù)管理規(guī)程 陽性母親的新生兒，第2針在第1針接種后1個月接種（12月齡）；第3針在第1針接種后6個月（58月齡）接種。 如果出生后24小時內(nèi)未能及時接種，仍應按照上述時間間隔要求盡早接種。如果第2針或第3針滯后，應盡快補種。第2針和第1針間隔不得少于1個月。如第2針滯后時間較長，第3針與第2針間隔不得少于2個月，并且第1和第3針的間隔要在4個月以上。 乙肝免疫球蛋白母嬰阻斷的機理 抗HB

18、s與HBsAg結(jié)合，使整個Dane顆粒被機體清除，降低母血病毒顆粒，同時激活補體系統(tǒng)。但HBeAg存在于Dane顆粒外的游離HBeAg 和IgG HBeAg兩種可溶形式，HBIG無法與之結(jié)合清除。 HBIG不能抑制HBV復制。HBIG 利用自然感染HBV后產(chǎn)生的抗-HBs或注射乙肝疫苗后產(chǎn)生抗-HBs的個體之血漿制備而成的。高濃度特異性乙肝表面抗體的免疫球蛋白，抗-HBs效價達11000以上。 針對HBV的特異性被動免疫制劑。HBIG使用禁忌癥禁忌癥：超敏性體質(zhì)，IgA缺乏使用后6周-3個月內(nèi)可降低減毒活疫苗的作用：如麻疹疫苗、風疹疫苗、流行性腮腺炎疫苗、水痘疫苗 HBIG應在生后24小時之內(nèi)注射，越早效果越 好：乙肝病毒侵入人體后在肝細胞內(nèi)繁殖，抗HBs只能在體液中不能