化學(xué)發(fā)光-儀器分析選修課課件

1、2.2.3 化學(xué)發(fā)光分析法一概述二基本原理三化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x四化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)化學(xué)發(fā)光分析的特點(diǎn)及應(yīng)用六生物發(fā)光分析簡(jiǎn)介2.2.3 化學(xué)發(fā)光分析法一概述 化學(xué)發(fā)光分析法一概述1.化學(xué)發(fā)光(chemi-luminescence,CL)：由反應(yīng)產(chǎn)物吸收該反應(yīng)的化學(xué)能而被激發(fā)，并發(fā)射出光子，或化學(xué)能轉(zhuǎn)移至受體分子上，由受體分子發(fā)射出光子的現(xiàn)象。2.化學(xué)發(fā)光分析法：根據(jù)受激發(fā)分子發(fā)射光譜及發(fā)射光強(qiáng)度對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的方法。 (與磷光相似)是超微量分析技術(shù)。 化學(xué)發(fā)光分析法一概述1.化學(xué)發(fā)光(chemi-lu二基本原理(一)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)及激發(fā)態(tài)分子的產(chǎn)生1.化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的產(chǎn)生：化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽堋?

2、a.化學(xué)反應(yīng)必須產(chǎn)生足夠的化學(xué)能 b.反應(yīng)速度快。2.反應(yīng)機(jī)制：a.電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)，b.化學(xué)鍵斷裂反應(yīng)。 3.激發(fā)態(tài)分子的產(chǎn)生： 直接化學(xué)發(fā)光， 敏化發(fā)光分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法二基本原理(一)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)及激發(fā)態(tài)分子的產(chǎn)生1.化化學(xué)發(fā)光-儀器分析選修課課件化學(xué)發(fā)光-儀器分析選修課課件2.混合速度： CL分析檢測(cè)是在混合反應(yīng)中進(jìn)行，可用發(fā)光強(qiáng)度-時(shí)間曲線反映混合的動(dòng)力學(xué)過(guò)程， Io(t)=Icl(t) 混合份數(shù) 式中：Icl(t)-在時(shí)間t時(shí)的發(fā)光強(qiáng)度（光子/秒）； Io(t)-由此可見(jiàn)，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度受混合方式的影響。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法2.混合速度： CL分析檢測(cè)是在混合反應(yīng)中進(jìn)行

3、，可用發(fā)光強(qiáng)度三化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x 化學(xué)發(fā)光儀：將反應(yīng)的發(fā)射光照到高靈敏度的光電倍 增管上，光信號(hào)變?yōu)殡娦盘?hào)，經(jīng)信號(hào)處理系統(tǒng)放 大后，從指示器上得到光強(qiáng)度的記錄圖或數(shù)字顯 示的裝置。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法三化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x 化學(xué)發(fā)光儀：將反應(yīng)的發(fā)射光照到高靈敏度（一）化學(xué)發(fā)光儀主要部件 1.樣品室（即反應(yīng)室）： 提供化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的反應(yīng) 室，又叫流通池2.檢測(cè)器：用于檢測(cè)和定量光強(qiáng)度。3.穩(wěn)定的負(fù)高壓：增大負(fù)高壓可增加測(cè)量的靈敏度。4.信號(hào)處理系統(tǒng)：將光電倍增管檢測(cè)光信號(hào)用電子學(xué)方 法進(jìn)行處理5.數(shù)據(jù)處理 顯示和記錄處理結(jié)果。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法（一）化學(xué)發(fā)光儀主要部件 1.樣品室（即反

4、應(yīng)室）： （二）化學(xué)發(fā)光儀的類型按信號(hào)和數(shù)據(jù)處理的不同方式分為三類；特點(diǎn)：1.電流電壓型發(fā)光儀：測(cè)定光電流或光電壓。2.數(shù)字式發(fā)光儀： 測(cè)定光電壓（或光電流）轉(zhuǎn)換 的脈沖數(shù)或光子數(shù)3.智能發(fā)光儀：發(fā)光儀與計(jì)算機(jī)連接，控制發(fā)光 儀工作，提高發(fā)光儀的自動(dòng)化程度。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法（二）化學(xué)發(fā)光儀的類型按信號(hào)和數(shù)據(jù)處理的不同方式分為三類；四化學(xué)發(fā)光分析技術(shù) 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)可在氣相、火焰、液相中（大多數(shù)）進(jìn)行，為了提高靈敏度和選擇性，需選合適的發(fā)光體系、有效的分離手段和靈敏的檢測(cè)方法。(一) 發(fā)光劑的選擇1.發(fā)光量子效率：u=光子數(shù)/反應(yīng)物的分子數(shù)*100%2.常用的發(fā)光體系：分子光譜分析法化

5、學(xué)發(fā)光分析法魯米諾體系過(guò)氧化草酸酯類光澤精氨基苯二胱肼類吖啶酯類嘍唑類苯酚類化合物（鄰苯三酚）。四化學(xué)發(fā)光分析技術(shù) 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)可在氣相、(二) 測(cè)定條件的選擇 1.混合方式和混合時(shí)間： 混合和測(cè)定同步進(jìn)行； 混合時(shí)流速快且混合均勻。 2.反應(yīng)條件的選擇：流動(dòng)相（載體）的選擇，緩沖液的選擇，發(fā)光反應(yīng)試劑濃度的選擇，試劑純度，蠕動(dòng)泵。3.檢測(cè)器的選擇：應(yīng)選背景小、靈敏度高、使用壽命長(zhǎng)的檢測(cè)器。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法(二) 測(cè)定條件的選擇 1.混合方式和混合時(shí)間： (三) 定量分析方法 Icl(t)=KC 常用方法：1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法。 2、直接比較法。 3、標(biāo)準(zhǔn)加入法。(四) 化學(xué)發(fā)光分析體系

6、的特殊顏色1.發(fā)光體系不同反應(yīng)機(jī)制不同激態(tài)復(fù)合物不同 發(fā)射不同顏色的光。2.發(fā)光體系發(fā)射光譜可用快速脈沖光譜儀測(cè)得。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法(三) 定量分析方法 Icl(t)五、化學(xué)發(fā)光分析的特點(diǎn)及應(yīng)用(一) 化學(xué)發(fā)光分析的特點(diǎn)1.靈敏度高；2.線性范圍寬；3.操作簡(jiǎn)便、快速；4.無(wú)放射性；5.價(jià)格低廉;但發(fā)光體系的選擇性較差。 (二) 化學(xué)發(fā)光分析的應(yīng)用1.鉻的測(cè)定；2.NO2-的測(cè)定3.化學(xué)發(fā)光標(biāo)記法：用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原。如果化學(xué)發(fā)光 物質(zhì)標(biāo)記在抗體上就稱為免疫化學(xué)發(fā)光分析。 (三)展望分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法五、化學(xué)發(fā)光分析的特點(diǎn)及應(yīng)用(一) 化學(xué)發(fā)光分析的特點(diǎn)1應(yīng)用：海洋發(fā)

7、光菌制備生物芯片測(cè)定水體生化耗氧量 （排污BOD60mgL; (COD15mgL，)Chemiluminescence Determination of 6-Mercaptopurine in the Luminol-Potassium Ferricyanide System， Spect roscopy and Spect ral Analysis， Vol128 ,No1 5 ,pp1026-1029，May , 2008Chemiluminescence from singlet oxygen that was detected at two wavelengths and effect

8、s of biomolecules on it. Talanta. 2009 Jan 15;77(3):1223-7. Epub 2008 Sep 3 應(yīng)用：六生物發(fā)光分析簡(jiǎn)介(一)生物發(fā)光原理生物發(fā)光是生物體內(nèi)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，通常是指由酶參與的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，很多機(jī)制與化學(xué)發(fā)光類似。例如1.螢火蟲(chóng)生物發(fā)光。2.腔腸動(dòng)物生物發(fā)光。(二) 超微弱發(fā)光(三) 生物發(fā)光分析的應(yīng)用及前景1.發(fā)光細(xì)菌及其發(fā)光系統(tǒng)的應(yīng)用2.吞噬細(xì)胞化學(xué)發(fā)光分析3.活性氧的發(fā)光分析4.血清的超弱發(fā)光與疾病診斷：疾病與血清發(fā)光有相依關(guān)系，脂質(zhì)化合物與氧發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。細(xì)胞、組織、器官存在的與新陳代謝相關(guān)的發(fā)光現(xiàn)象是由脂

9、質(zhì)過(guò)氧化所影響，可發(fā)射極微弱的光，自發(fā)的化學(xué)發(fā)光。分子光譜分析法化學(xué)發(fā)光分析法六生物發(fā)光分析簡(jiǎn)介(一)生物發(fā)光原理生物發(fā)光是生物體內(nèi)多功能微孔板液閃儀（液閃計(jì)數(shù)器）芬蘭Hidex 型號(hào) Chameleon 多功能微孔板液閃儀（液閃計(jì)數(shù)器）液體閃爍計(jì)數(shù)器：測(cè)定發(fā)生核衰變的放射性核素，尤其對(duì)低能更為有效?；驹恚阂罁?jù)射線與物質(zhì)相互作用產(chǎn)生熒光效應(yīng)。應(yīng)用：探測(cè)低能核素示蹤原子的放射性，液閃計(jì)數(shù)器組成：光電倍增管、收光系統(tǒng)、放大器、脈沖幅度分析器、樣品系統(tǒng)組成液體閃爍計(jì)數(shù)器：測(cè)定發(fā)生核衰變的放射性核素，尤其對(duì)低能更化學(xué)發(fā)光-儀器分析選修課課件產(chǎn)品特點(diǎn)同一臺(tái)儀器可實(shí)現(xiàn)LUM、FI、TRF、FP 、AB

10、S及LSC等六種不同功能首創(chuàng)放射性檢測(cè)與非放射性檢測(cè)整合PMT檢測(cè)器擁有Filter和Direct兩種工作模式能用于野外實(shí)時(shí)采樣作業(yè)產(chǎn)品特點(diǎn)同一臺(tái)儀器可實(shí)現(xiàn)LUM、FI、TRF、FP 、A特點(diǎn) 高靈敏度的液閃計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、化學(xué)發(fā)光計(jì)數(shù)檢測(cè)，三種功能合一生物、醫(yī)藥、生命科學(xué)、環(huán)境檢測(cè)方面放射性檢測(cè)單樣品檢測(cè)，可使用不同型號(hào)的樣品瓶實(shí)驗(yàn)室、野外實(shí)地檢測(cè)特點(diǎn)性能1. 化學(xué)發(fā)光: 70 %（125I）5. 樣品類型: 適用于LSC樣品瓶、微型試管、樣品管6. 檢測(cè)器: PMT型檢測(cè)器7. 操作軟件: 單獨(dú)操作，也可CommFiler控制軟件通過(guò)電腦來(lái)控制、輸出結(jié)果8. 數(shù)據(jù)輸出: 標(biāo)準(zhǔn)RS232接口連電腦控制9. 尺寸: 9 kg; 25 cm (w)33 cm (d)19 cm(h)性能1. 化學(xué)發(fā)光: 0.5 fmol ATP/樣品功能1. 放射性污染物2. 測(cè)定如222Rn等元素的射線量3. 3H、14C、32P放射性標(biāo)記4. 用于診斷研究的125I放射性免疫測(cè)定5. ATP發(fā)光檢測(cè)、基因檢測(cè)、免疫、毒理學(xué)檢測(cè)功能1. 放射性污染物2. 測(cè)定如222Rn等元素的射3. 應(yīng)用3.1 細(xì)胞與分子生物學(xué)：3H、14C、32P等放射性核素進(jìn)行體內(nèi)或體外標(biāo)記。生物大分子的合成與降解代謝及其轉(zhuǎn)化途徑。3.2