細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)課件-高二下學(xué)期生物浙科版選擇性必修3

第一節(jié)

細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)在治療大面積燒傷時，通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚移植到傷處，使皮膚愈合。但大面積燒傷患者缺乏足夠的自體皮膚，使用他人皮膚來源又不足，而且會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。那么，怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚？通過細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建人造皮膚從動物體中獲得相關(guān)組織，分散成單個細(xì)胞，在適宜的培養(yǎng)基下讓細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。動物細(xì)胞培養(yǎng)原理：細(xì)胞增殖培育的終點：細(xì)胞通過植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，我們可以直接克隆植物，那我們能通過動物細(xì)胞培養(yǎng)克隆出動物嗎？動物細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些條件？動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件營養(yǎng)物質(zhì)其他條件<<糖類氨基酸無機鹽維生素?zé)o菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、濕度、pH適宜的氣體環(huán)境水生長因子體外培養(yǎng)動物細(xì)胞需要提供哪些營養(yǎng)物質(zhì)？水、無機鹽、糖類、氨基酸、無機鹽、維生素、生長因子等合成培養(yǎng)基根據(jù)細(xì)胞生存所需的物質(zhì)種類和含量嚴(yán)格配置而成的培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基動物血清：含有多種未知的促細(xì)胞生長因子及其他活性物質(zhì)，可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)天然培養(yǎng)基主要來自動物體液或動物組織分離提取液，成分復(fù)雜，來源受限實際培養(yǎng)時，在合成培養(yǎng)基中添加一定比例的動物血清動物細(xì)胞培養(yǎng)最好選擇固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基？動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件無菌、無毒的環(huán)境無菌①對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理②在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝物無毒超凈工作臺在培養(yǎng)基中添加抗生素動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件適宜的溫度、pH多以37℃，溫差一般不超過±0.5℃溫度：pH：多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH在7.2-7.4氣體環(huán)境O2:細(xì)胞代謝所必需的CO2：維持培養(yǎng)液的pH（95%空氣和5%CO2）CO2培養(yǎng)箱動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程選擇什么樣的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)？幼齡動物的細(xì)胞和分化程度低的細(xì)胞更容易培養(yǎng)，原因是這些細(xì)胞分裂能力強。用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理組織塊，使組織塊分散成單個細(xì)胞的目的是什么？①使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，一方面保證細(xì)胞所需的O2和營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)，另一方面保證細(xì)胞內(nèi)代謝廢物的及時排出；②使得在細(xì)胞水平操作的其它技術(shù)得以實現(xiàn)。動物細(xì)胞以組織的形式存在，取材后對其進(jìn)行怎樣的處理？機械法、胰蛋白酶處理胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？那將動物組織分散成單個細(xì)胞時要注意什么問題呢？能，應(yīng)注意時間的控制。因為胰蛋白酶不僅能分解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，長時間還會分解膜蛋白，對細(xì)胞造成損傷。能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？不能，因為動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程動物組織塊用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞制成細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：細(xì)胞或組織離開機體后的首次培養(yǎng)體外培養(yǎng)的細(xì)胞表現(xiàn)為哪些特點？細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無毒、易于貼附。培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶所有的動物細(xì)胞都會貼壁生長嗎？瓶壁上的細(xì)胞層數(shù)是：一層（或單層）貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞通常會停止分裂增殖。接觸抑制分瓶培養(yǎng)解除方法癌變細(xì)胞沒有接觸抑制現(xiàn)象，可以在培養(yǎng)瓶中形成多層細(xì)胞將原培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞分離并稀釋后轉(zhuǎn)移到多個培養(yǎng)瓶中，在的培養(yǎng)基中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng):在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集；貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細(xì)胞，然后再用離心法收集。之后，將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。用胰蛋白酶兩次處理：第一次處理的目的是使組織細(xì)胞分散開；第二次處理的目的是使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，便于分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程動物組織塊用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞制成細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)問題細(xì)胞分裂受阻懸浮生長貼壁生長密度過大、有害代謝物積累和營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制解決傳代培養(yǎng)分瓶原代培養(yǎng)：細(xì)胞或組織離開機體后的首次培養(yǎng)原代培養(yǎng)視頻演示傳代培養(yǎng)視頻演示動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)有什么相同和不同之處？培養(yǎng)結(jié)果動物血清植物激素常用液體培養(yǎng)基常用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞的全能性原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目新的細(xì)胞群，不形成個體完整植株培養(yǎng)基特有成分細(xì)胞增殖動物細(xì)胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)細(xì)胞能否無限制存活下去？原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即成細(xì)胞系。能連續(xù)培養(yǎng)下去的稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系。不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞稱有限細(xì)胞系。如何獲得純的細(xì)胞系？將單個細(xì)胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之成為一個新的細(xì)胞群體的技術(shù)稱細(xì)胞克隆。通過一定選擇或純化的方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞，稱細(xì)胞株。（2021·1月浙江選考）下圖為動物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是