蛋白質(zhì)沉淀反應

關于蛋白質(zhì)沉淀反應第1頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六一、實驗目的掌握幾種使蛋白質(zhì)沉淀的方法；掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀與不可逆沉淀的區(qū)別；理解蛋白質(zhì)變性和沉淀的關系。第2頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六二、原理蛋白質(zhì)是親水膠體，正常狀態(tài)下，蛋白質(zhì)分子表面具有水化膜和電荷層，能保持其膠體溶液的穩(wěn)定性，在一定因素的影響下，蛋白質(zhì)會失去電荷和脫水沉淀。蛋白質(zhì)的變性與沉淀之間沒有必然聯(lián)系第3頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六蛋白質(zhì)沉淀反應（一）蛋白質(zhì)的鹽析作用（二）乙醇沉淀蛋白質(zhì)（三）重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)（四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)第4頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六（一）蛋白質(zhì)的鹽析作用加鹽類如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等可以破壞蛋白質(zhì)膠體周圍的水膜，同時又中和了蛋白質(zhì)分子的電荷，因此使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這種加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱鹽析。鹽溶現(xiàn)象為低鹽濃度可使蛋白質(zhì)的溶解度增加，實驗時要加足夠量的鹽。蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程，用鹽析方法沉淀蛋白質(zhì)時，較少引起蛋白質(zhì)變性，經(jīng)透析或用水稀釋時又可溶解。第5頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六（二）乙醇沉淀蛋白質(zhì)有機溶劑如酒精、丙酮等可使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這是由于這些有機溶劑和水有較強的作用，破壞了蛋白質(zhì)分子周圍的水膜，因此發(fā)生沉淀作用。若及時將蛋白質(zhì)沉淀與丙酮或乙醇分離，蛋白質(zhì)沉淀則可重新溶解于水中。第6頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六（三）重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)溶液pH在蛋白質(zhì)等電點以上時，重金屬鹽類(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性鹽而沉淀。重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)通常比較完全，故常用重金屬鹽除去液體中的蛋白質(zhì)。但應注意，在使用某些重金屬鹽(如硫酸銅或醋酸鉛)沉淀蛋白質(zhì)時，不可過量，否則將引起沉淀再溶解。此時的溶解為生成憎水膠體的緣故。第7頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六（四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)生物堿是植物中具有顯著生理作用的—類含氮的堿性物質(zhì)。凡能使生物堿沉淀，或能與生物堿作用產(chǎn)生顏色反應的物質(zhì)，稱為生物堿試劑。如鞣酸、苦味酸和磷鎢酸等。當?shù)鞍踪|(zhì)溶液pH值低于其等電點時，蛋白質(zhì)為陽離子，能與生物堿試劑的陰離子結(jié)合成性鹽而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有機酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最為靈敏而且特異。因此被用于蛋白質(zhì)的首選沉淀劑，只能沉淀蛋白質(zhì)，不能沉淀其水解產(chǎn)物，加熱可除去。第8頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六三、實驗材料實驗材料：雞卵清蛋白液，吸管（1mlx4，2mlx4，0.5mlx1，5mlx2），試管（1.5x15cmx14），水浴鍋，滴管，電爐實驗試劑：苯酚（0.5%），硫酸銅（1%），硫酸銨固體，95%乙醇，NaCl，醋酸鉛，鞣酸，苦味酸，冰醋酸第9頁，共11頁，2022年，5月20日，4點44分，星期六四、操作步驟