植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

一、菊花的組織培養(yǎng)1．植物組織培養(yǎng)的基本過程2．影響植物組織培養(yǎng)的因素[判斷正誤](1)菊花組織培養(yǎng)，一般選擇開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。

()(2)植物激素的濃度可影響細(xì)胞分化，但使用的先后順序及比例不影響組織培養(yǎng)的過程。

()(3)pH、溫度和光照等也影響植物組織培養(yǎng)。

()××√3．實(shí)驗(yàn)操作過程滅菌(2)外植體消毒：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%無菌水(3)接種：始終在

旁進(jìn)行，對接種工具要用

滅菌。將菊花莖段插入培養(yǎng)基中時(shí)注意

。

(4)培養(yǎng)與移栽：在18℃～22℃的

中培養(yǎng)，得到

后進(jìn)行移栽。二、月季的花藥培養(yǎng)

1．被子植物的花粉發(fā)育過程酒精燈火焰火焰灼燒不要倒插無菌箱試管苗四分體時(shí)期單核期2．產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑

3．影響花藥培養(yǎng)的因素

(1)主要因素：

和

。

(2)月季花藥培養(yǎng)一般選擇

期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期。材料的選擇培養(yǎng)基的組成單核4．實(shí)驗(yàn)操作[判斷正誤](1)在剝離花藥時(shí)，不要損傷花藥，否則接種后不能脫分化形成愈傷組織。

()(2)與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。

()(3)月季花藥培養(yǎng)得到的都是單倍體植株。

(

)×√×[知識體系構(gòu)建]①脫分化②再分化③體細(xì)胞④細(xì)胞的全能性⑤細(xì)胞分裂素⑥單核期花粉1．(2012·廣東卷T2A)培育草莓脫毒苗所采用的主要技術(shù)是植物組織培養(yǎng)。()2．(2011·上海卷T22A)外植體可以來自植物的任何細(xì)胞。()3．(2011·江蘇卷T16A)愈傷組織是一團(tuán)有特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞。()√植物組織培養(yǎng)的過程及條件××4．[2012·山東卷T34(1)改編]由外植體經(jīng)過脫分化過程形成愈傷組織，由愈傷組織經(jīng)過再分化過程形成胚狀體。()5．[2012·山東卷T34(3)]外植體的消毒所需酒精的體積分?jǐn)?shù)是70%。()6．(2012·山東卷T34(2))培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素用量的比值高時(shí)，有利于芽的分化。()√√×1．植植物物細(xì)細(xì)胞胞的的全全能能性性(1)細(xì)胞胞具具有有全全能能性性的的物物質(zhì)質(zhì)基基礎(chǔ)礎(chǔ)：：生生物物體體的的每每一一個(gè)個(gè)細(xì)細(xì)胞胞都都含含有有本本物物種種所所特特有有的的全全套套遺遺傳傳物物質(zhì)質(zhì)，，都都有有發(fā)發(fā)育育成成完完整整個(gè)個(gè)體體所所必必需需的的全全套套基基因因。。(2)植物物細(xì)細(xì)胞胞只只有有脫脫離離了了植植物物體體，，在在一一定定的的外外部部因因素素作作用用下下，，經(jīng)經(jīng)過過細(xì)細(xì)胞胞分分裂裂形形成成愈愈傷傷組組織織，，才才能能表表現(xiàn)現(xiàn)出出全全能能性性。。2．植植物物組組織織培培養(yǎng)養(yǎng)的的過過程程中中脫脫分分化化與與再再分分化化的的比比較較過程特點(diǎn)條件脫分化外植體成成為愈傷傷組織排列疏松松、高度度液泡化化的薄壁壁細(xì)胞團(tuán)團(tuán)離體、營營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)、植物物激素、、其他適適宜條件件再分化由愈傷組組織成為為幼苗或或胚狀體體結(jié)構(gòu)有根、芽芽或有生生根發(fā)芽芽的能力力3．影響植植物組織織培養(yǎng)的的因素(1)培養(yǎng)材料料：①不同的的植物組組織，培培養(yǎng)的難難易程度度差別很很大，容容易進(jìn)行行無性繁繁殖的植植物也容容易進(jìn)行行組織培培養(yǎng)。②同一種種植物材材料，材材料的年年齡、保保存時(shí)間間的長短短對培養(yǎng)養(yǎng)也有影影響。幼幼齡、保保存時(shí)間間短的植植物材料料容易培培養(yǎng)成功功。(2)無菌條件件：培養(yǎng)基上上有細(xì)菌菌等微生生物存在在時(shí)，它它們比植植物細(xì)胞胞生長、、繁殖得得更快，，而且它它們會產(chǎn)產(chǎn)生毒素素，使培培養(yǎng)的植植物細(xì)胞胞很快中中毒死亡亡，因此此在培養(yǎng)養(yǎng)過程中中要求進(jìn)進(jìn)行一系系列的消消毒、滅滅菌，并并且要求求無菌操操作。(3)植物激素素：在配配制好的的MS培養(yǎng)基中中，常常常需要添添加植物物激素。。其中生生長素和和細(xì)胞分分裂素是是啟動細(xì)細(xì)胞分裂裂、脫分分化和再再分化的的關(guān)鍵性性激素。。植物激激素的濃濃度、使使用的先先后順序序以及用用量的比比例等，，都會影影響實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果。。①按照不不同的順順序使用用這兩類類激素，，會得到到不同的的實(shí)驗(yàn)結(jié)結(jié)果(如下表)：使用順序序?qū)嶒?yàn)結(jié)果果先使用生生長素，，后使用用細(xì)胞分分裂素有利于細(xì)細(xì)胞分裂裂，但細(xì)細(xì)胞不分分化先使用細(xì)細(xì)胞分裂裂素，后后使用生生長素細(xì)胞既分分裂又分分化同時(shí)使用用分化頻率率提高②當(dāng)同時(shí)時(shí)使用這這兩類激激素時(shí)，，兩者用用量的比比例影響響植物細(xì)細(xì)胞的發(fā)發(fā)育方向向。[關(guān)鍵一點(diǎn)點(diǎn)]無菌技術(shù)術(shù)是植物物組織培培養(yǎng)獲得得成功的的關(guān)鍵，，無菌技技術(shù)包括括培養(yǎng)基基的滅菌菌、植物物材料(外植體)的消毒和和接種時(shí)時(shí)的無菌菌操作。。[典例1]如下圖所所示為胡胡蘿卜的的韌皮部部細(xì)胞通通過無菌菌操作，，接入試試管后，，在一定定的條件件下，形形成試管管苗的培培育過程程，請據(jù)據(jù)圖回答答下列問問題：(1)要促進(jìn)細(xì)細(xì)胞分裂裂生長，，培養(yǎng)基基中應(yīng)含含有營養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)和和激素，，營養(yǎng)物物質(zhì)包括括________和小分子子有機(jī)物物；激素素包括細(xì)細(xì)胞分裂裂素和________兩類植物物激素。。(2)此過程依依據(jù)的原原理是________。A和B階段主要要進(jìn)行的的分裂方方式是________，B階段除了了細(xì)胞分分裂外，，還進(jìn)行行細(xì)胞________等。(3)此過程要要無菌操操作，主主要是指指對________進(jìn)行滅菌菌消毒。。B階段需要要光照，，原因是是____________________。(4)試管苗的的根細(xì)胞胞沒有葉葉綠素，，而葉的的葉肉細(xì)細(xì)胞具有有葉綠素素，這是是基因________的結(jié)果。。(5)將胡蘿卜卜組織塊塊接種到到培養(yǎng)基基上時(shí)，，為防止止細(xì)胞污污染應(yīng)如如何操作作？_______________________________________________。[答案](1)無機(jī)鹽生生長素素(2)植物細(xì)胞胞的全能能性有有絲分裂裂分化化(3)培養(yǎng)基芽芽發(fā)育育成葉，，葉肉細(xì)細(xì)胞中葉葉綠素的的合成需需要光照照條件(4)選擇性表表達(dá)(5)接種要在在酒精燈燈火焰旁旁進(jìn)行月季的花花藥培養(yǎng)養(yǎng)1．(2011·上海卷·T22BC)在無菌條條件下以以花粉作作為外植植體可得得到單倍倍體植株株。()2．(2012·江蘇卷·T16B)二倍體植植株的花花粉經(jīng)脫脫分化與與再分化化后得到到穩(wěn)定遺遺傳的植植株。()√×3．(2013·湖南32校3月聯(lián)考T42(2))確定花粉粉發(fā)育時(shí)時(shí)期最常常用的方方法有醋醋酸洋紅紅法，某某些植物物的花粉粉不易著著色，需需采用焙焙花青一一鉻礬法法。()4．[2013·臨沂一一模T34(4)]若用花花藥進(jìn)進(jìn)行離離體培培養(yǎng)則則應(yīng)選選擇花花粉發(fā)發(fā)育至至單核核期的的花藥藥培養(yǎng)養(yǎng)成功功率最最高。。()√√1．植物物組織織培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)術(shù)和花花藥離離體培培養(yǎng)技技術(shù)的的異同同植物組組織培培養(yǎng)技技術(shù)花藥離離體培培養(yǎng)技技術(shù)相同點(diǎn)點(diǎn)理論依依據(jù)植物細(xì)細(xì)胞的的全能能性基本過過程影響因因素選材、、營養(yǎng)養(yǎng)、激激素、、pH、溫度度、光光照等等不同點(diǎn)點(diǎn)選材體細(xì)胞胞生殖細(xì)細(xì)胞(花粉)生殖方方式無性生生殖有性生生殖2．注意意事項(xiàng)項(xiàng)①材料料的選選?。海壕栈ɑǖ慕M組織培培養(yǎng)實(shí)實(shí)驗(yàn)中中，應(yīng)應(yīng)選擇擇未開開花植植株的的莖上上部新新萌生生的側(cè)側(cè)枝，，該部部分不不僅分分生能能力強(qiáng)強(qiáng)，而而且無無病毒毒侵染染。月月季花花藥的的培養(yǎng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)中，，應(yīng)選選擇花花粉發(fā)發(fā)育過過程中中的單單核靠靠邊期期的花花藥進(jìn)進(jìn)行培培養(yǎng)，，且在在花蕾蕾期，，因?yàn)闉榇藭r(shí)時(shí)質(zhì)地地幼嫩嫩，花花瓣未未開，，微生生物不不易侵侵入，，容易易消毒毒。②剝離離花藥藥時(shí)，，盡量量不要要損傷傷花藥藥，同同時(shí)還還要徹徹底去去除花花絲，，防止止對實(shí)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)產(chǎn)生干干擾。。③外植植體消消毒：：所用用消毒毒劑為為體積積分?jǐn)?shù)數(shù)為70%的酒精精和質(zhì)質(zhì)量分分?jǐn)?shù)為為0.1%的氯化化汞溶溶液，，所使使用的的清洗洗液是是無菌菌水。。④培養(yǎng)養(yǎng)過程程：在在初期期，菊菊花的的組織織培養(yǎng)養(yǎng)需光光照，，月季季的花花藥培培養(yǎng)不不需光光照，，而在在后期期兩者者均需需光照照。[典例3]某二倍倍體植植物是是雜合合體，，下圖圖為其其花藥藥中未未成熟熟花粉粉在適適宜的的培養(yǎng)養(yǎng)基上上培養(yǎng)養(yǎng)產(chǎn)生生完整整植株株的過過程。。請據(jù)據(jù)圖回回答：：(1)圖中①①表示示的是是該花花粉培培養(yǎng)過過程中中的________過程，，②表表示的的是________過程，，X代表的的是________，③表表示的的是________過程，，④表表示的的是誘誘導(dǎo)________過程。。(2)圖中從從愈傷傷組織織形成成完整整植株株的途途徑有有兩條條，具具體通通過哪哪一條條途徑徑主要要取決決于培培養(yǎng)基基成分分中________的種類類及其其濃度度配比比，最最后獲獲得的的來源源于未未成熟熟花粉粉的完完整植植株都都稱為為________植株(甲)。未成成熟花花粉經(jīng)經(jīng)培養(yǎng)養(yǎng)能形形成完完整植植株，，說明明未成成熟花花粉具具有____________。(3)對植株株甲進(jìn)進(jìn)行____________，才能能使其其結(jié)實(shí)實(shí)產(chǎn)生生后代代(乙)，否則則植株株甲只只有通通過________的方式式才能能產(chǎn)生生后代代(丙)。乙、、丙兩兩種植植株中中，能能產(chǎn)生生可育育花粉粉的是是________植株，，該植植株群群體中中每一一植株株產(chǎn)生生可育育花粉粉的基基因組組成種種類數(shù)數(shù)為________種，該該群體體植株株產(chǎn)生生可育育花粉粉的基基因組組成種種類數(shù)數(shù)為________種?；ɑㄋ幣嗯囵B(yǎng)在在育種種上的的特殊殊意義義是__________________，從而而開辟辟育種種新途途徑。。[答案](1)脫分化化再再分化化胚胚狀體體分分化(或發(fā)育育)生根(2)激素單單倍倍體細(xì)細(xì)胞胞的全全能性性(3)染色體體加倍倍無無性繁繁殖乙乙(或經(jīng)過過染色色體加加倍)一多多縮縮短育育種周周期[高考隨隨堂體體驗(yàn)]1．(2010·安徽高高考)草莓生生產(chǎn)上上傳統(tǒng)統(tǒng)的繁繁殖方方式易易將所所感染的病病毒傳傳播給給后代代。導(dǎo)導(dǎo)致產(chǎn)產(chǎn)量降降低、、品質(zhì)質(zhì)變差差。運(yùn)運(yùn)用微微型繁繁殖技技術(shù)可可以培培育出出無病病毒幼幼苗。。草莓莓微型型繁殖殖的基基本過過程如如下：：請回答答：(1)微型繁繁殖培培育無無病毒毒草莓莓苗時(shí)時(shí)，一一般選選取________作為外外植體體，其其依據(jù)據(jù)是_________________________。(2)在過程程①中中，常常用的的MS培養(yǎng)基基主要要成分分包括括大量量元素素、微微量元元素和和________，在配配制好好的培培養(yǎng)基基中，，常常常需要要添加加________，有利利于外外植體體啟動動細(xì)胞胞分裂裂形成成愈傷傷組織織。接接種后后2～5d，若發(fā)發(fā)現(xiàn)外外植體體邊緣緣局部部污染染，原原因可可能是是____________________。(3)在過程程②中中，愈愈傷組組織在在誘導(dǎo)導(dǎo)生根根的培培養(yǎng)基基中未未形成成根，，但分分化出出了芽芽，其其原因因可能能是___________________________________________________________________。答案：：(1)莖尖(或根尖尖)莖尖(或根尖尖)病毒極極少，，甚至至無病病毒(2)有機(jī)物物植植物激激素外外植植體消消毒不不徹底底(3)培養(yǎng)基基中生生長素素類物物質(zhì)用用量與與細(xì)胞胞分裂裂素類類物質(zhì)質(zhì)用量量的比比值偏偏低2．(2012·新課標(biāo)標(biāo)全國國卷)為了探探究6－BA和IAA對某菊菊花品品種莖尖尖外植植體再再生叢叢芽的的影響響，某某研究究小組組在MS培養(yǎng)基基中加加入6－BA和IAA，配制制成四四種培培養(yǎng)基基(見下表表)，滅菌菌后分分別接接種數(shù)數(shù)量相相同、、生長長狀態(tài)態(tài)一致致、消消毒后后的莖莖尖外外植體體，在在適宜宜條件件下培培養(yǎng)一一段時(shí)時(shí)間后后，統(tǒng)統(tǒng)計(jì)再再生叢叢芽外外植體體的比比率(m)，以及及再生生叢芽芽外植植體上上的叢叢芽平平均數(shù)數(shù)(n)，結(jié)果果如下下表。。培養(yǎng)基編號濃度(mg·L－1)m(%)n(個(gè))6－BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下下列問問題：：(1)按照植植物的的需求求量，，培養(yǎng)養(yǎng)基中中無機(jī)機(jī)鹽的的元素素可分分為____________和________兩類。。上述述培養(yǎng)養(yǎng)基中中，6－BA屬于________類生長長調(diào)節(jié)節(jié)劑。。(2)在該實(shí)實(shí)驗(yàn)中中，自自變量量是________，因變變量是是_________，自變變量的的取值值范圍圍是________。(3)從實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果果可知知，誘誘導(dǎo)叢叢芽總總數(shù)最最少的的培養(yǎng)養(yǎng)基是是________號培養(yǎng)養(yǎng)基。。(4)為了誘誘導(dǎo)該該菊花花試管管苗生生根，，培養(yǎng)養(yǎng)基中中一般般不加加入________(填“6－BA””或“IAA”)。答案：：(1)大量元元素微微量量元素素細(xì)細(xì)胞分分裂素素(2)IAA濃度再再生生叢芽芽外植植體的的比率率(m)和再生生叢芽芽外植植體上上的叢叢芽平平均數(shù)數(shù)(n)0～0.5mg·L－1(3)1(4)6－BA3．(2009·山東高考)人參是一種種名貴中藥藥材，其有有效成分主主要是人參皂皂苷。利用用細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)產(chǎn)人參皂苷苷的大致流流程如下：：(1)配制誘導(dǎo)愈愈傷組織的的固體培養(yǎng)養(yǎng)基，分裝裝后要進(jìn)行行________。接種前，，要對人參參根進(jìn)行________。(2)用于離體培培養(yǎng)的根切切塊，叫做做________。培養(yǎng)幾天天后發(fā)現(xiàn)少少數(shù)培養(yǎng)基基被污染，，若是有顏顏色的絨毛毛狀菌落，，屬于________污染；若是是有光澤的的黏液狀菌菌落，屬于于________污染。(3)用少量________酶處理愈傷傷組織，獲獲取單細(xì)胞胞或小細(xì)胞胞團(tuán)，在液液體培養(yǎng)基基中進(jìn)行懸懸浮培養(yǎng)，，可有效提提高人參皂皂苷合成量量。(4)人參皂苷易易溶于水溶溶性(親水性)有機(jī)溶劑，，從培養(yǎng)物物干粉中提提取人參皂皂苷宜選用用________方法，操作作時(shí)應(yīng)采用用________加熱。答案：(1)滅菌消毒毒(2)外植體真真菌(霉菌)細(xì)菌(3)果膠(4)萃取(浸取)水浴9、靜夜四四無鄰，，荒居舊舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Sunday,December25,202210、雨中黃葉樹樹，燈下白頭頭人。。01:12:0101:12:0101:1212/25/20221:12:01AM11、以我獨(dú)沈久久，愧君相見見頻。。12月-2201:12:0101:12Dec-2225-Dec-2212、故人江海別別，幾度隔山山川。。01:12:0101:12:0101:12Sunday,December25,202213、乍見見翻疑疑夢，，相悲悲各問問年。。。12月月-2212月月-2201:12:0101:12:01December25,202214、他他鄉(xiāng)鄉(xiāng)生生白白發(fā)發(fā)，，舊舊國國見見青青山山。。。。25十十二二月月20221:12:01上上午午01:12:0112月月-2215、比比不不了了得得就就不不比比，，得得不不到到的的就就不不要要。。。。。。十二二月月221:12上上午午12月月-2201:12December25,202216、行行動動出出成成果果，，工工作作出出財(cái)財(cái)富富。。。。2022/12/251:12:0101:12:0125December202217、做前，，能夠環(huán)環(huán)視四周周；做時(shí)時(shí)，你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點(diǎn)點(diǎn)的射線線向前。。。1:12:01上午午1:12上午午01:12:0112月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時(shí)停停止成成功??！。12月月-2212月月-22Sunday,December25,202210、很多多事情情努力力了未未必有有結(jié)果果，但但是不不努力力卻什什么改改變也也沒有有。。。01:12:0101:12:0101:1212/25/20221:12:01AM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小努力力的積累。。。12月-2201:12:0101:12Dec-2225-Dec-2212、世間成事事，不求其其絕對圓滿滿，留一份份不足，可可得無限完完美。。01:12:0101:12:0101:12Sunday,December25,202213、不知香積積寺，數(shù)里里入云峰。。。12月-2212月-2201:12:0101:12:01December25,202214、意意志志堅(jiān)堅(jiān)強(qiáng)強(qiáng)的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥塊塊一一樣樣任任意意