9紫外-可見分光光度法課件

1第九章紫外-可見分光光度法◆學(xué)習(xí)目的⊙◆知識(shí)要求⊙◆能力要求⊙1第九章紫外-可見分光光度法◆學(xué)習(xí)目的⊙2◆學(xué)習(xí)目的通過(guò)學(xué)習(xí)光譜分析法概論、紫外-可見分光光度法的基本原理、分光光度計(jì)的基本構(gòu)造、降低測(cè)量誤差的方法、常用的定性、定量方法等知識(shí)，了解光學(xué)分析法的知識(shí)體系，熟悉紫外-可見分光光度法的實(shí)際應(yīng)用，會(huì)用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度，并對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，為學(xué)習(xí)紅外分光光度法、熒光分光光度法、核磁共振波譜法及藥物分析課中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法奠定基礎(chǔ)。

2◆學(xué)習(xí)目的通過(guò)學(xué)習(xí)光譜分析法概論、紫外-可見分光光度法的基3◆知識(shí)要求1．掌握朗伯-比爾定律概念、表示及條件，吸光系數(shù)和吸收光譜的意義、表示，常用的定量分析方法原理和應(yīng)用。2．熟悉紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生機(jī)制、分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、偏離朗伯-比爾定律的主要因素。3．了解光譜分析法的分類、測(cè)量條件的選擇、定性分析的依據(jù)和方法。3◆知識(shí)要求1．掌握朗伯-比爾定律概念、表示及條件，吸光系數(shù)4◆能力要求1.能夠用朗伯-比爾定律解決定量計(jì)算問(wèn)題

。2.能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)。3.能夠制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，并能應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量分析。4.會(huì)使用常見的紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度。

4◆能力要求1.能夠用朗伯-比爾定律解決定量計(jì)算問(wèn)題。5第一節(jié)光譜分析法概論

第一節(jié)光譜分析法概論

一、電磁輻射與電磁波譜

電磁輻射：電磁輻射，也叫電磁波，具有波粒二象性。

c＝λυ

E＝hυ電磁波譜：把電磁輻射按照波長(zhǎng)大小順序排列起來(lái)，就稱為電磁波譜。紫外光區(qū)和可見光區(qū)僅是電磁波譜中的一小部分。

5第一節(jié)光譜分析法概論第一節(jié)光譜分析法概論6

表9-1電磁波譜分區(qū)表電磁輻射區(qū)段波長(zhǎng)范圍能級(jí)躍遷的類型射線10-3~0.1nm原子核能級(jí)X射線0.1~10nm內(nèi)層電子能級(jí)遠(yuǎn)紫外輻射10~200nm內(nèi)層電子能級(jí)紫外輻射200~400nm價(jià)電子或成鍵電子能級(jí)可見光區(qū)400~760nm價(jià)電子或成鍵電子能級(jí)近紅外輻射0.76~2.5μm

涉及氫原子的振動(dòng)能級(jí)中紅外輻射2.5~50μm

原子或分子的振動(dòng)能級(jí)遠(yuǎn)紅外輻射50~500μm

分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)微波區(qū)0.3mm~1m分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)無(wú)線電波區(qū)1~1000m磁場(chǎng)誘導(dǎo)核自旋能級(jí)第一節(jié)光譜分析法概論

6表9-1電磁778第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類（一）發(fā)射光譜法發(fā)射光譜法：物質(zhì)的原子、分子或離子在一定條件下，由低能態(tài)（基態(tài)）躍遷至高能態(tài)（激發(fā)態(tài)），再由高能態(tài)躍遷至低能態(tài)，同時(shí)產(chǎn)生電磁輻射，根據(jù)這種光譜而建立的分析方法稱為發(fā)射光譜法。發(fā)射光譜法分類：原子發(fā)射光譜法、原子熒光光譜法、分子熒光光譜法、X射線熒光譜法。8第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類9第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類（二）吸收光譜法吸收光譜法：利用物質(zhì)對(duì)電磁輻射的選擇性吸收而建立的分析方法稱為吸收光譜法。吸收光譜法分類：原子吸收光譜法、紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、磁共振波譜法。9第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類10第一節(jié)光譜分析法概論三、紫外-可見分光光度的特點(diǎn)1.靈敏度高2.準(zhǔn)確度高3.精密度好4.選擇性好5.儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，易于普及；操作簡(jiǎn)便，測(cè)定快速6.應(yīng)用范圍廣泛10第一節(jié)光譜分析法概論三、紫外-可見分光光度的特點(diǎn)11第二節(jié)紫外-可見分光光度法第二節(jié)紫外-可見分光光度法一、紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生當(dāng)分子（或離子）受到光照射時(shí)，能夠吸收具有一定能量的光量子，由能量較低的基態(tài)能級(jí)E1躍遷到能量較高的激發(fā)態(tài)能級(jí)E2

，即物質(zhì)對(duì)光具有選擇性吸收。紫外-可見光的能量(h)與分子（或離子）發(fā)生電子能級(jí)躍遷前后的能量差（E2-E1）恰好相等，電磁輻射與被測(cè)物發(fā)生能量交換，產(chǎn)生紫外-可見吸收光譜。11第二節(jié)紫外-可見分光光度法第二節(jié)紫外-可見分光光度法12吸光光度法的基本原理

(一)物質(zhì)的顏色及對(duì)光的選擇性吸收

1、可見光

人們?nèi)粘Ｋ吹降娜展狻谉霟艄庵皇请姶挪ㄖ械囊粋€(gè)很小的波段。人的眼睛能覺(jué)察到的那一小部分波段稱為可見光，波長(zhǎng)范圍在400～760nm。在可見光譜區(qū)內(nèi)不同波長(zhǎng)的光有著不同的顏色。從波長(zhǎng)較短的紫色光到波長(zhǎng)較長(zhǎng)的紅色光。12吸光光度法的基本原理(一)物質(zhì)的顏色及對(duì)光的選擇性吸收13各種單色光的波長(zhǎng)范圍

（可見光波長(zhǎng)范圍：400~760納米）

紅光：中心波長(zhǎng)：660納米；波長(zhǎng)范圍：760~622納米；

橙光：中心波長(zhǎng)：610納米；波長(zhǎng)范圍：622~597納米；

黃光：中心波長(zhǎng)：570納米；波長(zhǎng)范圍：597~577納米；

綠光：中心波長(zhǎng)：550納米；波長(zhǎng)范圍：577~492納米；

青光：中心波長(zhǎng)：460納米；波長(zhǎng)范圍：492~450納米；

藍(lán)光：中心波長(zhǎng)：440納米；波長(zhǎng)范圍：450~435納米；

紫光：中心波長(zhǎng)：410納米；波長(zhǎng)范圍：435~400納米。

13各種單色光的波長(zhǎng)范圍

（可見光波長(zhǎng)范圍：400~760納14吸光光度法的基本原理2、復(fù)合光由不同波長(zhǎng)的光混合而成的光稱為復(fù)合光。實(shí)驗(yàn)證明，日光、白熾燈光等可見光都是復(fù)合光。如果讓一束白光通過(guò)棱鏡，便可分解為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七種顏色的光，這種現(xiàn)象稱為光的色散。3、單色光只具一種顏色的光即單一波長(zhǎng)的光稱為單色光。分光光度計(jì)則是依靠單色光器中的棱鏡或光柵（色散元件）把復(fù)合光色散成所需要的單色光。14吸光光度法的基本原理2、復(fù)合光15吸光光度法的基本原理4、互補(bǔ)色光將兩種適當(dāng)顏色的單色光按一定強(qiáng)度比例混合可成為白光。這兩種單色光稱為互補(bǔ)色光。（二）溶液的顏色在漆黑的夜晚，我們看不到任何物質(zhì)的顏色，只有在白天我們才能欣賞到多彩的世界。物質(zhì)呈現(xiàn)何種顏色跟光源有關(guān)，也跟該物質(zhì)的結(jié)構(gòu)（本性）有關(guān)。物質(zhì)的結(jié)構(gòu)（本性）不同，物質(zhì)對(duì)光的性質(zhì)就會(huì)不同，物質(zhì)的顏色也就不一樣。圖13-1光的互補(bǔ)色15吸光光度法的基本原理4、互補(bǔ)色光圖13-1光的互補(bǔ)色16吸光光度法的基本原理1、有色溶液當(dāng)光束照射到物體上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光完全吸收，則呈現(xiàn)黑色；如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光均勻吸收，則呈現(xiàn)灰色；如果完全反射，則呈現(xiàn)白色；如果選擇性地吸收某些波長(zhǎng)的光。當(dāng)一束白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它選擇性地吸收了白光中某種色光。那么溶液呈現(xiàn)的是它吸收光的補(bǔ)色光（透過(guò)光）的顏色。

例如硫酸銅溶液因吸收了白光中的黃色光而呈現(xiàn)藍(lán)色，高錳酸鉀溶液因吸收了白光中的綠色光而呈現(xiàn)紫色。16吸光光度法的基本原理1、有色溶液17吸光光度法的基本原理由此可見，有色溶液的顏色是被吸收光顏色的補(bǔ)色。吸收越多，則補(bǔ)色的顏色越深。比較溶液顏色的深度，實(shí)質(zhì)上就是比較溶液對(duì)它所吸收光的吸收程度。2、無(wú)色溶液當(dāng)光束照射到物體上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光既不吸收也不反射，則呈現(xiàn)無(wú)色（透明）。當(dāng)一束白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它對(duì)白光中的任何顏色的光都沒(méi)有吸收和反射，則溶液呈現(xiàn)無(wú)色（透明），為無(wú)色溶液。圖13-1光的互補(bǔ)色17吸光光度法的基本原理由此可見，有色溶液的顏色是被吸收光顏181819第二節(jié)紫外-可見分光光度法二、透光率與吸光度

當(dāng)一束單色光穿過(guò)均勻、透明介質(zhì)時(shí)，一部分光被溶液吸收，還有的透過(guò)、反射。I0＝Ia+It+Ir

I0＝Ia+It

I0入射光強(qiáng)度Ia吸收光強(qiáng)度It透射光強(qiáng)度Ir反射光強(qiáng)度19第二節(jié)紫外-可見分光光度法二、透光率與吸光度20透光率T:透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光度。吸光度A:對(duì)透光率的倒數(shù)取對(duì)數(shù)，稱為吸光度即：第二節(jié)紫外-可見分光光度法

20透光率T:透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率21第二節(jié)紫外-可見分光光度法三、朗伯-比爾定律

當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、無(wú)散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時(shí)，在入射光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比:

A＝K·L·c朗伯-比爾定律是定量分析的理論依據(jù)。21第二節(jié)紫外-可見分光光度法三、朗伯-比爾定律22朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無(wú)散射的溶液，而且也適用于均勻、無(wú)散射的固體和氣體。實(shí)驗(yàn)證明：溶液對(duì)光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時(shí)存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測(cè)得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質(zhì)吸光度的總和，即： A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac

第二節(jié)紫外-可見分光光度法22朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外23第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用ε表示。吸收系數(shù)不可能直接用1mol/L濃度的吸光物質(zhì)測(cè)量，一般是由較稀溶液的吸光系數(shù)換算得到。

23第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)24例1：已知含F(xiàn)e3+為500μg/L溶液用KSCN顯色，在波長(zhǎng)480nm處用2cm吸收池測(cè)得A=0.197,計(jì)算摩爾吸光系數(shù)ε。解：

答：摩爾吸光系數(shù)ε為1.1×104L/mol?cm。24例1：已知含F(xiàn)e3+為500μg/L溶液用KSCN顯色，25第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1﹪（g/100ml）、液層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用表示。摩爾吸光系數(shù)和百分吸光系數(shù)的關(guān)系：

25第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)26第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線

概念：以波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡(jiǎn)稱吸收光譜。26第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線272728吸收光譜曲線的特征參數(shù)第二節(jié)紫外-可見分光光度法λsh28吸收光譜曲線的特征參數(shù)第二節(jié)紫外-可見分光光度法λsh29第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線

特點(diǎn):

（1）在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且λmax相同。這是定性分析的基礎(chǔ)。（2）測(cè)定條件一定時(shí)，吸光性物質(zhì)的濃度越大，其吸光度也越大。這是定量分析的基礎(chǔ)。29第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線30在正常情況下，選用同一種物質(zhì)的幾種不同濃度的溶液所測(cè)得的吸收光譜曲線的圖形是完全相似的，λmax值也是固定不變的。圖9-3是四種不同濃度的KMnO4溶液的四條吸收曲線，這四條吸收曲線的形狀完全相似，λmax值相同，這說(shuō)明物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光吸收的程度是不一樣的（選擇性吸收），這個(gè)特性只與溶液中物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)，而與溶液的濃度無(wú)關(guān)。30在正常情況下，選用同一種物質(zhì)的幾種不同濃度的溶液所測(cè)得的31第二節(jié)紫外-可見分光光度法六、偏離朗伯-比爾定律的因素化學(xué)因素:(1)溶液的濃度(2)物質(zhì)的化學(xué)變化(3)溶劑的影響光學(xué)因素:(1)非單色光

(2)雜散光

(3)非平行光

(4)反射現(xiàn)象

(5)散射現(xiàn)象31第二節(jié)紫外-可見分光光度法六、偏離朗伯-比爾定律的因素32第二節(jié)紫外-可見分光光度法32第二節(jié)紫外-可見分光光度法33第二節(jié)紫外-可見分光光度法七、紫外-可見分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)：

光源—單色器—吸收池—檢測(cè)器—顯示器基本類型:(1)可見分光光度計(jì)

(2)紫外-可見分光光度計(jì)

1）單波長(zhǎng)分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)

2）雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)

33第二節(jié)紫外-可見分光光度法七、紫外-可見分光光度計(jì)34紫外-可見分光光度計(jì)

34紫外-可見分光光度計(jì)35第二節(jié)紫外-可見分光光度法35第二節(jié)紫外-可見分光光度法36一、分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)是由五個(gè)部分組成：即光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和信號(hào)顯示系統(tǒng)。光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示器36一、分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示器37（一）光源

對(duì)光源的基本要求是應(yīng)在儀器操作所需的光譜區(qū)域(整個(gè)紫外光區(qū)或可見光譜區(qū))內(nèi)能夠發(fā)射連續(xù)輻射、有足夠的輻射強(qiáng)度和良好的穩(wěn)定性，而且輻射能量隨波長(zhǎng)的變化應(yīng)盡可能小,較長(zhǎng)的使用壽命。

分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。

37（一）光源對(duì)光源的基本要求是應(yīng)在儀器38

熱輻射光源用于可見光區(qū)，如鎢絲燈和鹵鎢燈，可使用的范圍在340~2500nm。這類光源的輻射能量與施加的外加電壓有關(guān)，因此必須嚴(yán)格控制燈絲電壓，儀器必須配有穩(wěn)壓裝置。

氣體放電光源用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。可使用的范圍在185~375nm。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘，它是紫外光區(qū)應(yīng)用最廣泛的一種光源，其光譜分布與氫燈類似，但光強(qiáng)度比相同功率的氫燈要大3~5倍。38熱輻射光源用于可393940（二）單色器

單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能：產(chǎn)生光譜純度高的波長(zhǎng)且波長(zhǎng)在紫外可見區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)。

單色器的組成：①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。40（二）單色器41

單色器的核心部分是色散元件，起分光的作用。單色器的性能直接影響入射光的單色性，從而也影響到測(cè)定的靈敏度、選擇性及校準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系等。

能起分光作用的色散元件主要是棱鏡和光柵。棱鏡有玻璃和石英兩種材料。它們的色散原理是依據(jù)不同的波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)有不同的折射率而將不同波長(zhǎng)的光分開。由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱鏡只能用于350~3200nm的波長(zhǎng)范圍，即只能用于可見光域內(nèi)。石英棱鏡可使用的波長(zhǎng)范圍較寬，可從185~4000nm，即可用于紫外、可見和近紅外三個(gè)光域。41424243

光柵是利用光的衍射與干涉作用制成的，它可用于紫外、可見及紅外光域，而且在整個(gè)波長(zhǎng)區(qū)具有良好的、幾乎均勻一致的分辨能力。它具有色散波長(zhǎng)范圍寬、分辨本領(lǐng)高、成本低、便于保存和易于制備等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是各級(jí)光譜會(huì)重疊而產(chǎn)生干擾。

入射、出射狹縫，透鏡及準(zhǔn)光鏡等光學(xué)元件中狹縫在決定單色器性能上起重要作用。狹縫的大小直接影響單色光純度，但過(guò)小的狹縫又會(huì)減弱光強(qiáng)。43光柵44（三）吸收池

吸收池又叫比色皿，用于盛放待測(cè)溶液和決定透光液層厚度的器件。一般有石英和玻璃材料兩種。石英池適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)，玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)。為減少光的損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向。

在高精度的分析測(cè)定中（紫外區(qū)尤其重要），吸收池要挑選配對(duì)。因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓卣饕约拔粘氐墓獬涕L(zhǎng)度的精度等對(duì)分析結(jié)果都有影響。44（三）吸收池

吸45（四）檢測(cè)器

利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的檢測(cè)器有光電池、光電管和光電倍增管等。

硒光電池對(duì)光的敏感范圍為300~800nm，其中又以500~600nm最為靈敏。這種光電池的特點(diǎn)是能產(chǎn)生可直接推動(dòng)微安表或檢流計(jì)的光電流，但由于容易出現(xiàn)疲勞效應(yīng)而只能用于低檔的分光光度計(jì)中。45（四）檢測(cè)器利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)46

光電管在紫外-可見分光光度計(jì)上應(yīng)用較為廣泛。

光電倍增管是檢測(cè)微弱光最常用的光電元件，靈敏度比一般的光電管要高200倍，因此可使用較窄的單色器狹縫，從而對(duì)光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。46光電管在紫外-可見分光光度計(jì)上應(yīng)用較為廣泛。47（五）信號(hào)指示系統(tǒng)（顯示器）

作用是放大信號(hào)并以適當(dāng)方式指示或記錄下來(lái)。

常用的信號(hào)指示裝置有直讀檢流計(jì)、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動(dòng)記錄裝置等。很多型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，一方面可對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。47（五）信號(hào)指示系統(tǒng)（顯示器）作用是放大48二、紫外-可見分光光度計(jì)的類型1、單光束分光光度計(jì)經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過(guò)參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行吸光度的測(cè)定。這種簡(jiǎn)易型分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)廉，操作方便，維修容易，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度。48二、紫外-可見分光光度計(jì)的類型1、單光束分光光度計(jì)491、單光束分光光度計(jì)

它的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格較便宜，主要適用于作定量分析。其缺點(diǎn)是測(cè)定結(jié)果受光源強(qiáng)度波動(dòng)的影響較大，往往給定量分析帶來(lái)較大的誤差。常用的單光色束可見分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)的72G型、721型、721B、722S型等。常用的單光束紫外-可見分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)的751型、751G型、752型、752C型、756MC型，日本島津的QV-50型等。491、單光束分光光度計(jì)

它的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格較便宜5050512、雙光束分光光度計(jì)經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過(guò)參比池，一束通過(guò)樣品池。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)。

可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的引起的誤差，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。512、雙光束分光光度計(jì)52它的兩束光幾乎同時(shí)通過(guò)參比溶液和樣品溶液，因此可以消除光源強(qiáng)度的變化以及檢測(cè)系統(tǒng)波動(dòng)的影響，測(cè)量準(zhǔn)確度高。雙光束型儀器一般都采用自動(dòng)記錄儀直接掃描出組分的吸收光譜，操作方便，但儀器結(jié)構(gòu)復(fù)雜，價(jià)格昂貴。常用的雙光束紫外-可見分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)的710型、730型、760MC型、760CRT型，日本島津的UV-210型等。52它的兩束光幾乎同時(shí)通過(guò)參比溶液和樣品溶液，因此可以消除光53雙光束紫外-可見分光光度計(jì)53雙光束紫外-可見分光光度計(jì)543、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長(zhǎng)（1和2）的單色光，利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過(guò)光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值ΔA（ΔA=A1-A2）。

對(duì)于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長(zhǎng)分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。543、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)55它的特點(diǎn)是不需要參比溶液，只用一個(gè)待測(cè)溶液，因此完全消除了背景吸收的干擾(包括樣品溶液與參比溶液組成的不同及吸收池厚度差異的影響)，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度。但儀器價(jià)格昂貴。常用的雙波長(zhǎng)紫外-可見分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)的WFZ800S型，日本島津的UV-300型、UV-365型等。55它的特點(diǎn)是不需要參比溶液，只用一個(gè)待測(cè)溶液，因此完全消除56雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)56雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)57二、紫外-可見分光光度計(jì)的類型57二、紫外-可見分光光度計(jì)的類型58復(fù)習(xí)提問(wèn)：1.物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收之間有什么關(guān)系？2.分光光度法的基本原理是什么定律？適用范圍如何？3.分光光度計(jì)的主要部件有哪些？58復(fù)習(xí)提問(wèn)：1.物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收之間有什么關(guān)系？59第二節(jié)紫外-可見分光光度法59第二節(jié)紫外-可見分光光度法60復(fù)習(xí)提問(wèn)：1.物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收之間有什么關(guān)系？圖9-2光的互補(bǔ)色60復(fù)習(xí)提問(wèn)：1.物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收之間有什么關(guān)系？61復(fù)習(xí)提問(wèn)：2.分光光度法的基本原理是什么定律？適用范圍如何？A＝εc

L61復(fù)習(xí)提問(wèn)：A＝εcL623.分光光度計(jì)的主要部件有哪些？紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)是由五個(gè)部分組成：即光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和顯示器。光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示器復(fù)習(xí)提問(wèn)：623.分光光度計(jì)的主要部件有哪些？光源單色器吸收池檢測(cè)器顯63第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇（一）測(cè)量誤差（二）儀器測(cè)量條件的選擇（三）顯色反應(yīng)條件的選擇(四)參比溶液的選擇

63第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇64第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇（一）測(cè)量誤差:(1)儀器誤差

光源不穩(wěn)定；吸收池厚度不均勻；光電源靈敏性差；光電流測(cè)量不準(zhǔn)；讀數(shù)標(biāo)尺刻度不夠準(zhǔn)確。(2)操作誤差

儀器使用不夠熟練；處理標(biāo)液和試液條件不完全相同，如溶液的稀釋、顯色劑的用量、反應(yīng)的酸度、溫度，放置時(shí)間的差異等。

操作馬虎，吸收池沒(méi)有清洗、吸收池光學(xué)面不干凈、吸收池沒(méi)有用待測(cè)定溶液蕩洗等屬于過(guò)失。64第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇65（二）儀器測(cè)量條件的選擇：(1)選擇最大吸收波長(zhǎng)作為入射光。在實(shí)驗(yàn)分析時(shí)，為了獲得較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，一般是選擇溶液的最大吸收波長(zhǎng)max為測(cè)量波長(zhǎng)，因?yàn)樵诖瞬ㄩL(zhǎng)處摩爾吸光系數(shù)ε最大，測(cè)量的靈敏度最高。

65（二）儀器測(cè)量條件的選擇：66高錳酸鉀溶液吸收光譜曲線66高錳酸鉀溶液吸收光譜曲線67（二）儀器測(cè)量條件的選擇：(1)選擇最大吸收波長(zhǎng)作為入射光。一般選最大吸收波長(zhǎng)，因?yàn)榇藭r(shí)的靈敏度最高。如果有干擾物質(zhì)在此波長(zhǎng)也有較大的吸收，則可選擇靈敏度稍低，則能避免共存組分的干擾。

67（二）儀器測(cè)量條件的選擇：68例如顯色劑和鈷配合物在420nm處都有最大吸收峰，見圖。如果在此波長(zhǎng)下測(cè)定鈷，則未反應(yīng)的顯色劑就會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果。因此，必須選擇顯色劑沒(méi)有吸收的500nm波長(zhǎng)作入射光來(lái)測(cè)定，這樣靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度和選擇性。圖吸收曲線A鈷配合物B顯色劑68例如顯色劑和鈷配合物在420nm處都有最大吸收峰，見圖。69總結(jié)：入射光的波長(zhǎng)應(yīng)根據(jù)被測(cè)液光譜吸收曲線選擇。以“最大吸收，最小干擾”為原則。即無(wú)干擾，選λmax作為入射光波長(zhǎng)；有干擾，選靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。69總結(jié)：70（二）儀器測(cè)量條件的選擇：(2)讀數(shù)范圍的選擇吸光度讀數(shù)范圍應(yīng)控制在吸光度為0.2~0.7、透光率為20%~65%之間。根據(jù)理論推導(dǎo)及測(cè)試經(jīng)驗(yàn)，將配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液吸光度讀數(shù)控制在0.2～0.7范圍內(nèi)，能夠使測(cè)量的相對(duì)誤差最小。A＝εc

L70（二）儀器測(cè)量條件的選擇：A＝εcL71控制讀數(shù)范圍的方法：①計(jì)算并控制試樣的稱取量，含量低時(shí)，多取樣或萃取富集；含量高時(shí)，少取樣或稀釋試樣。②如果溶液已顯色，則可通過(guò)改變比色皿的厚度來(lái)調(diào)節(jié)吸光度值的大小。A＝εc

L71控制讀數(shù)范圍的方法：A＝εcL72第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇（三）顯色反應(yīng)條件的選擇：M+R?MR(被測(cè)組分)(顯色劑)(有色化合物)1.對(duì)顯色劑及顯色反應(yīng)的要求

顯色劑是指能與待測(cè)組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。它分為無(wú)機(jī)顯色劑和有機(jī)顯色劑。在分析中有機(jī)顯色劑用得較普遍，而無(wú)機(jī)顯色劑由于其靈敏度和選擇性都不太高，用得比較少。

72第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇73第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇（三）顯色反應(yīng)條件的選擇：

1.對(duì)顯色劑及顯色反應(yīng)的要求

將被測(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻?yīng)叫顯色反應(yīng)。顯色反應(yīng)主要是配位反應(yīng)，其次是氧化還原反應(yīng)。（1）選擇性好。（2）靈敏度高。（3）有色化合物的組成恒定、性質(zhì)穩(wěn)定。（4）顯色劑與生成的有色化合物之間的顏色要有較大差別。（5）顯色反應(yīng)的條件應(yīng)易于控制。73第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇74第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇（三）顯色反應(yīng)條件的選擇：2.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(1)顯色劑用量顯色劑用量的確定：常在顯色反應(yīng)中，固定其他條件，只改變顯色劑的用量，測(cè)定相應(yīng)的A值，以顯色劑c(mol/L)為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)繪制曲線，確定顯色劑的用量。74第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇75

圖吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系曲線75762.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(2)溶液的酸度許多有色物質(zhì)的顏色隨著溶液的酸度而改變，同時(shí)顯色反應(yīng)的歷程也大多對(duì)溶液的酸度有一定的要求。因此，可采用緩沖溶液控制溶液的酸度。顯色反應(yīng)的適宜酸度可通過(guò)實(shí)驗(yàn)繪制A－pH曲線來(lái)確定。762.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(2)溶液的酸度772.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(3)顯色時(shí)間顯色反應(yīng)的速度不同，有的瞬間即可完成，且顏色能保持較長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定不變；有的只能維持短暫的穩(wěn)定時(shí)間，放置稍久就會(huì)分解褪色。因此，要嚴(yán)格控制顯色過(guò)程和測(cè)定前放置的時(shí)間，至于每個(gè)顯色反應(yīng)所需的時(shí)間和顏色能穩(wěn)定的地保持多久，須通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。772.控制合適的顯色反應(yīng)條件

782.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(4)溫度大多數(shù)顯色反應(yīng)在常溫下進(jìn)行，有些顯色反應(yīng)必須加熱才能完成。升高溫度可加快反應(yīng)速度，但也可能產(chǎn)生副反應(yīng)，所以，應(yīng)根據(jù)具體的反應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臏囟取?5)干擾離子的消除如果在樣品中含有性質(zhì)相似的其它組分，它們或是本身具有顏色，或是與顯色劑反應(yīng)生成有色物質(zhì)干擾測(cè)定，那就必須設(shè)法將這些離子分離或掩蔽。

選擇合適的參比溶液可以消除某些干擾。782.控制合適的顯色反應(yīng)條件

(4)溫度79

在分光光度法測(cè)定中，選用適當(dāng)?shù)膮⒈热芤海梢韵捎谖粘乇诩叭軇?、試劑?duì)入射光的反射和吸收帶來(lái)的誤差，并可扣除干擾的影響，提高分析的準(zhǔn)確度。八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇(四)參比溶液的選擇：79在分光光度法測(cè)定中，選用適80第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇(四)參比溶液的選擇：

參比溶液的作用：一是調(diào)節(jié)儀器讀數(shù)標(biāo)尺滿標(biāo)度，即校正儀器讀數(shù)裝置A=0或T=100%，以作為測(cè)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)；二是用來(lái)抵消測(cè)定過(guò)程中某些因素的干擾，以減小測(cè)量誤差。

80第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇81第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇(四)參比溶液的選擇：常用的參比溶液有溶劑參比、試劑參比和樣品參比三種。溶劑參比：是以純?nèi)軇┤缯麴s水作為參比，可消除溶劑干擾；

當(dāng)加入的試劑及顯色劑均無(wú)色，只有待測(cè)物顯色時(shí)，用純?nèi)軇┳鰠⒈热芤骸Ｈ缫话愠Ｓ玫娜軇┱麴s水。81第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇82第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇(四)參比溶液的選擇：常用的參比溶液有溶劑參比、試劑參比和樣品參比三種。試劑參比：不加待測(cè)組分，加入同樣的試劑和溶劑作為參比溶液，是最常用的一種參比溶液，可消除試劑干擾。

當(dāng)試劑和顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收時(shí)，選用試劑參比。即用蒸餾水代替樣品，其它所加試劑及操作與樣品完全相同，此溶液就是試劑參比，常稱“試劑空白”。

多數(shù)情況下都是采用此種溶液做參比。82第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇83第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇(四)參比溶液的選擇：常用的參比溶液有溶劑參比、試劑參比和樣品參比三種。樣品參比：是以不加顯色劑的試樣溶液作為參比溶液，可消除樣品干擾。

當(dāng)樣品溶液有顏色，而試劑、顯色劑無(wú)色時(shí)，應(yīng)采用不加顯色劑的樣品溶液做參比，稱為“樣品空白”。83第二節(jié)紫外-可見分光光度法八、測(cè)量誤差與分析條件的選擇84九、定性與定量分析方法

紫外-可見分光光度法主要用于物質(zhì)的定性分析、結(jié)構(gòu)分析和定量分析。主要介紹該方法在有機(jī)物定性和定量分析上的應(yīng)用。

根據(jù)不同有機(jī)物的吸收光譜不相同，比較吸收光譜的特征可以對(duì)純物質(zhì)進(jìn)行鑒定；利用吸光度與濃度的正比關(guān)系，可進(jìn)行一些藥物與制劑的定量分析。84九、定性與定量分析方法

紫外-可見分光光度法主要用于物85第二節(jié)紫外-可見分光光度法九、定性與定量分析方法（一）定性分析定性分析依據(jù):最大吸收波長(zhǎng)、吸光系數(shù)和吸收光譜曲線的形狀。

定性分析方法:(1)比較光譜的一致性(2)比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)及比值的一致性

85第二節(jié)紫外-可見分光光度法九、定性與定量分析方法86（一）定性分析

1.光譜一致性比較在相同條件下，測(cè)定未知物和已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜，并對(duì)圖譜進(jìn)行嚴(yán)格的對(duì)比。如果沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)化合物，可將未知物的吸收光譜與《中國(guó)藥典》中收錄的該藥物的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行對(duì)照比較。

圖譜的一致性，表現(xiàn)在吸收曲線的形狀、吸收峰的數(shù)目、吸收峰的位置、吸收峰的強(qiáng)度等。86（一）定性分析

1.光譜一致性比較87中國(guó)藥典(2010年版)規(guī)定：貝諾酯加無(wú)水乙醇制成每1ml約含7.5的溶液，在240nm處有最大吸收，相應(yīng)的百分吸光系數(shù)()應(yīng)為730～760。貝諾酯是一種新型抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛藥。主要用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕痛、感冒發(fā)燒、頭痛、神經(jīng)痛及術(shù)后疼痛等。實(shí)例分析87中國(guó)藥典(2010年版)規(guī)定：貝諾酯加無(wú)水乙醇制成每1m88（一）定性分析

1.光譜一致性比較如果兩者的吸收光譜有明顯差別，則可肯定不是同一種化合物。高錳酸鉀吸收曲線硫氰酸鐵吸收曲線88（一）定性分析

1.光譜一致性比較高錳酸鉀吸收曲線硫氰酸89可的松的紫外光譜圖氫化可的松的的紫外光譜圖8990

如果二者吸收光譜完全相同，則待測(cè)物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物則可能是同一種化合物，但還需用其它分析方法進(jìn)一步證實(shí)。

這是由于紫外-可見分光光度法表現(xiàn)的是主要官能團(tuán)的特性，因此某些官能團(tuán)相同的物質(zhì)，可能會(huì)產(chǎn)生非常相似的、甚至相同的吸收光譜。1.光譜一致性比較90如果二者吸收光譜完全相同，則待91（一）定性分析

2.吸收光譜特征數(shù)據(jù)比較用于吸收光譜特征數(shù)據(jù)比較的有λmax、εmax。其中鑒別最常用的光譜特征數(shù)據(jù)是最大吸收峰所在的波長(zhǎng)λmax，如果一個(gè)化合物有幾個(gè)吸收蜂，并存在谷和肩峰，這些特征數(shù)據(jù)應(yīng)同時(shí)作為鑒定的依據(jù)，這樣更能顯示光譜特征的全面性。91（一）定性分析

2.吸收光譜特征數(shù)據(jù)比較92（一）定性分析

2.吸收光譜特征數(shù)據(jù)比較如紫羅蘭酮是重要的香料。它有α-和β-兩種異構(gòu)體，其中α-型異構(gòu)體的香氣要比β-型好，常用于化妝品中，而后者一般只用作皂用香精。用紫外光譜比其他波譜方法更容易區(qū)別它們，因?yàn)棣?型是兩個(gè)雙鍵共軛的α,β-不飽和酮，其λmax為228nm，而β-型異構(gòu)體是三個(gè)雙鍵共軛的α,β-不飽和酮，其λmax為298nm。92（一）定性分析

2.吸收光譜特征數(shù)據(jù)比較93（一）定性分析

3.吸光度（或吸光系數(shù)）比值的比較如果化合物同時(shí)有幾個(gè)吸收蜂，可用在不同吸收峰(或峰與谷)處測(cè)得的吸光度的比值作為鑒別的依據(jù)，因?yàn)橛玫氖峭粷舛热芤汉屯缓穸鹊奈粘?，其吸光度比值也就是吸光系?shù)的比值，且可消除濃度和厚度不準(zhǔn)確所帶來(lái)的影響。

如維生素B12有三個(gè)吸收峰，分別在278nm、361nm、550nm波長(zhǎng)處，它們的吸光度比值應(yīng)為：A361nm/A278nm在1.70～1.88之間，A361nm/A550nm在3.15～3.45之間。93（一）定性分析

3.吸光度（或吸光系數(shù)）比值的比較94實(shí)例分析(中國(guó)藥典2010年版)維生素B12滴眼液WeishengsuB12DiyanyeVitaminB12EyeDrops本品含維生素B12(C63H88CoN14O14P)應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%?！拘誀睢勘酒窞榉奂t色的澄明液體?！捐b別】取本品為供試品

，照紫外-可見分光光度法(附錄ⅣΑ)測(cè)定，在361nm與550nm的波長(zhǎng)處有最大吸收；361nm波長(zhǎng)處與550nm波長(zhǎng)處的吸收度的比值應(yīng)為3.15～3.45。第二節(jié)紫外-可見分光光度法94實(shí)例分析(中國(guó)藥典2010年版)第二節(jié)紫外-可95維生素B12滴眼液【檢查】pH值應(yīng)為5.5～6.5(附錄ⅥΗ)。滲透壓應(yīng)為270～330mOsM（附錄IXG）。其他應(yīng)符合眼用制劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄ⅠG)?！竞繙y(cè)定】避光操作。精密量取本品適量，加水定量稀釋制成每1ml中約含維生素B1225μg的溶液，照紫外-可見分光光度法(附錄ⅣΑ)，在361nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系數(shù)()為207計(jì)算，即得?！绢悇e】同維生素B12【規(guī)格】10ml：2mg【貯藏】遮光，密封保存。95維生素B12滴眼液【檢查】pH值應(yīng)為5.5～6.96（二）純度檢查將藥品光譜與藥品標(biāo)準(zhǔn)光譜相對(duì)照，利用雜質(zhì)的特征吸收，可以檢測(cè)出微量雜質(zhì)。在藥品無(wú)吸收的紫外－可見光區(qū)雜質(zhì)有吸收在雜質(zhì)吸收峰處藥品無(wú)吸收96（二）純度檢查將藥品光譜與藥品標(biāo)準(zhǔn)光譜相對(duì)照，97三聚氰胺的紫外光譜圖97三聚氰胺的紫外光譜圖98第二節(jié)紫外-可見分光光度法（三）定量分析定量分析依據(jù):A＝εc

L

A＝K

·c

定量分析方法：

1.單組分溶液的定量方法(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線法

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比法

(3)吸光系數(shù)法

98第二節(jié)紫外-可見分光光度法（三）定量分析99第二節(jié)紫外-可見分光光度法1標(biāo)準(zhǔn)曲線法:標(biāo)準(zhǔn)曲線法是紫外-可見分光光度法中最經(jīng)典的定量方法。具體測(cè)定的方法和步驟如下：①配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下，以待測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為入射光，分別測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的吸光度。②以濃度c為橫坐標(biāo)、吸光度A為縱坐標(biāo)描繪曲線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線，也叫工作曲線。③按照相同的實(shí)驗(yàn)條件和操作程序，用待測(cè)溶液配制未知試樣溶液并測(cè)定其吸光度A樣，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到與之對(duì)應(yīng)的未知試樣溶液的濃度c樣。

99第二節(jié)紫外-可見分光光度法1標(biāo)準(zhǔn)曲線法:100第二節(jié)紫外-可見分光光度法100第二節(jié)紫外-可見分光光度法101第二節(jié)紫外-可見分光光度法2標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法:在相同的條件下（使用同一波長(zhǎng)的入射光，采用同樣的比色皿，測(cè)定同樣的物質(zhì)）。配制濃度為cs的標(biāo)準(zhǔn)溶液和濃度為cx的試樣溶液，在最大吸收波長(zhǎng)處，分別測(cè)定二者的吸光度值為As、Ax

，依據(jù)朗伯-比爾定律得：As=εcsLAx=εcxL

則:101第二節(jié)紫外-可見分光光度法2標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法:102第二節(jié)紫外-可見分光光度法3吸光系數(shù)法:吸光系數(shù)法又稱絕對(duì)法，是直接利用朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式A＝KcL進(jìn)行計(jì)算的定量分析方法。在手冊(cè)中查出待測(cè)物質(zhì)在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)或,并在相同條件下測(cè)量樣品溶液的吸光度A，則其濃度為：

或102第二節(jié)紫外-可見分光光度法3吸光系數(shù)法:103第二節(jié)紫外-可見分光光度法有時(shí)也可以將待測(cè)樣品溶液的吸光度換算成樣品組分的吸光系數(shù)，計(jì)算與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光系數(shù)的比值，求出樣品中待測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)?；?03第二節(jié)紫外-可見分光光度法有時(shí)也可以將待測(cè)樣品溶液的104第二節(jié)紫外-可見分光光度法例如：維生素B12水溶液在=361nm處的百分吸光系數(shù)=207。取維生素B12樣品30.0mg，加純化水溶解，用1L的容量瓶定容。將溶液盛于1cm的吸收池，測(cè)得361nm波長(zhǎng)處的吸光度A=0.600，試求樣品中維生素B12的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。解：104第二節(jié)紫外-可見分光光度法例如：維生素B12水溶液在105多組分的測(cè)定如果在一個(gè)待測(cè)溶液中需要同時(shí)測(cè)定兩個(gè)或兩個(gè)以上組分的含量，就是多組分測(cè)定。吸光度的加和性是多組分同時(shí)測(cè)定的依據(jù)，可根據(jù)各組分吸收光譜相互重疊的程度分別考慮測(cè)定的方法。105多組分的測(cè)定106第二節(jié)紫外-可見分光光度法（三）定量分析定量分析依據(jù):A＝εc

L

A＝K

·c

定量分析方法：2.雙組分溶液的定量方法

(1)解聯(lián)立方程組法

(2)等吸收波長(zhǎng)消去法

(3)差示分光光度法

106第二節(jié)紫外-可見分光光度法（三）定量分析107第二節(jié)紫外-可見分光光度法

二元組分溶液的定量方法

1解聯(lián)立方程組法當(dāng)試樣溶液中各待測(cè)組分相互干擾不太嚴(yán)重時(shí)，可根據(jù)吸光度具有加和性的特點(diǎn)，在同一試樣溶液中同時(shí)測(cè)定兩個(gè)或兩個(gè)以上的待測(cè)組分。

假設(shè)要測(cè)定試樣中有兩個(gè)待測(cè)組分a和b，如果分別繪制a、b兩個(gè)純物質(zhì)的吸收光譜，則有三種情況。107第二節(jié)紫外-可見分光光度法二元組分溶液的定量方法108第二節(jié)紫外-可見分光光度法108第二節(jié)紫外-可見分光光度法109第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅰ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分在各自的最大吸收波長(zhǎng)處，另一組分沒(méi)有吸收，可以用測(cè)定單組分的方法，分別在λ1波長(zhǎng)處測(cè)定組分a的吸收度,在λ2波長(zhǎng)處測(cè)定組分b的吸收度，再由偏離朗伯-比爾定律求得ca、cb。測(cè)定時(shí)互不干擾。

109第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅰ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分在110第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅱ）表明，在待測(cè)組分a的最大吸收波長(zhǎng)λ1處，待測(cè)組分b無(wú)吸收，即組分b對(duì)組分a的測(cè)定無(wú)干擾，而在待測(cè)組分b的最大吸收波長(zhǎng)λ2處，組分a有吸收，即組分a對(duì)組分b的測(cè)定有干擾。這時(shí)，可以在波長(zhǎng)λ1處用測(cè)定單組分的方法，單獨(dú)測(cè)量組分a；然后在波長(zhǎng)λ2處測(cè)量溶液的總吸光度及a、b純物質(zhì)的吸收系數(shù)，根據(jù)吸光度的加和性，從而可以求出cb。

110第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅱ）表明，在待測(cè)組分a的111第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅲ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分彼此相互干擾，此時(shí)，在波長(zhǎng)λ1和λ2處分別測(cè)定試樣溶液的總吸光度及，同時(shí)測(cè)定a、b純物質(zhì)的吸光系數(shù)、和、，根據(jù)吸光度的加和性，則由聯(lián)立方程組求得ca、cb。

111第二節(jié)紫外-可見分光光度法（Ⅲ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分彼112第二節(jié)紫外-可見分光光度法2等吸收波長(zhǎng)消去法（雙波長(zhǎng)分光光度法）當(dāng)試樣中兩個(gè)待測(cè)組分的相互干擾比較嚴(yán)重時(shí)，用解聯(lián)立方程組的方法進(jìn)行定量分析會(huì)產(chǎn)生較大的誤差，這時(shí)可以用等吸收波長(zhǎng)消去法進(jìn)行測(cè)定。在試樣中含有兩個(gè)待測(cè)組分a和b時(shí)，若要測(cè)定組分b，組分a有干擾，應(yīng)設(shè)法消除組分a的吸收干擾。首先選擇待測(cè)組分b的最大吸收波長(zhǎng)λ2作為測(cè)量波長(zhǎng)，然后用作圖的方法選擇參比波長(zhǎng)λ1，使組分a在這兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度相等。112第二節(jié)紫外-可見分光光度法2等吸收波長(zhǎng)消去法（雙113第二節(jié)紫外-可見分光光度法試樣溶液在λ2和λ1兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度之差，只與待測(cè)組分b（a）的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無(wú)關(guān)。

113第二節(jié)紫外-可見分光光度法試樣溶液在λ2和λ1兩個(gè)波114選擇1和2，符合以下條件：①干擾組分在兩波長(zhǎng)處的吸光度要相等。②被測(cè)組分在兩波長(zhǎng)處的吸光度要足夠大。根據(jù)吸光度的加和原則，混合物在1和2處的吸光度分別為：

Aλ1=AAλ1+ABλ1Aλ2=AAλ2+ABλ2

ΔA=Aλ2-Aλ1=ABλ2-ABλ1=（εBλ2-εBλ1）cBL114選擇1和2，符合以下條件：1153差示分光光度法當(dāng)待測(cè)組分含量過(guò)高時(shí)，吸光度超出了準(zhǔn)確測(cè)量的讀數(shù)范圍，會(huì)造成較大的誤差，可以采用差示分光光度法，彌補(bǔ)這一缺點(diǎn)。差示光度法是用一個(gè)比試樣溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參比溶液，將分光光度計(jì)調(diào)零（透光率100%），測(cè)得的吸光度就是被測(cè)試樣溶液試液與參比溶液的吸光度差值（相對(duì)吸光度）。根據(jù)朗伯-比爾定律得：△A＝Ax－As＝ΕL(cx－cs)

待測(cè)溶液與參比溶液的吸光度差值與兩溶液的濃度之差成正比，這就是差示分光光度法的基本原理。第二節(jié)紫外-可見分光光度法1153差示分光光度法第二節(jié)紫外-可見分光光度法116

濃度示差分光光度法是采用比待測(cè)溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液做參比溶液（cx＞cs），調(diào)整儀器的吸光度為“0”然后測(cè)量待測(cè)溶液的吸光度。根據(jù)朗伯-比爾定律得：As=εcsLAx=εcxL則：△Ax=Ax—As=ε(cx—cs)L=ε△cxL用△A對(duì)相應(yīng)的濃度差△c作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)得的待測(cè)液的△Ax

，在圖中查出△cx值，則cx=cs+△cx。116濃度示差分光光度法是采用比待測(cè)溶液117布置作業(yè)：P166:2;3117布置作業(yè)：P166:2;3118第九章紫外-可見分光光度法◆學(xué)習(xí)目的⊙◆知識(shí)要求⊙◆能力要求⊙1第九章紫外-可見分光光度法◆學(xué)習(xí)目的⊙119◆學(xué)習(xí)目的通過(guò)學(xué)習(xí)光譜分析法概論、紫外-可見分光光度法的基本原理、分光光度計(jì)的基本構(gòu)造、降低測(cè)量誤差的方法、常用的定性、定量方法等知識(shí)，了解光學(xué)分析法的知識(shí)體系，熟悉紫外-可見分光光度法的實(shí)際應(yīng)用，會(huì)用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度，并對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，為學(xué)習(xí)紅外分光光度法、熒光分光光度法、核磁共振波譜法及藥物分析課中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法奠定基礎(chǔ)。

2◆學(xué)習(xí)目的通過(guò)學(xué)習(xí)光譜分析法概論、紫外-可見分光光度法的基120◆知識(shí)要求1．掌握朗伯-比爾定律概念、表示及條件，吸光系數(shù)和吸收光譜的意義、表示，常用的定量分析方法原理和應(yīng)用。2．熟悉紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生機(jī)制、分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、偏離朗伯-比爾定律的主要因素。3．了解光譜分析法的分類、測(cè)量條件的選擇、定性分析的依據(jù)和方法。3◆知識(shí)要求1．掌握朗伯-比爾定律概念、表示及條件，吸光系數(shù)121◆能力要求1.能夠用朗伯-比爾定律解決定量計(jì)算問(wèn)題

。2.能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)。3.能夠制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，并能應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量分析。4.會(huì)使用常見的紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度。

4◆能力要求1.能夠用朗伯-比爾定律解決定量計(jì)算問(wèn)題。122第一節(jié)光譜分析法概論

第一節(jié)光譜分析法概論

一、電磁輻射與電磁波譜

電磁輻射：電磁輻射，也叫電磁波，具有波粒二象性。

c＝λυ

E＝hυ電磁波譜：把電磁輻射按照波長(zhǎng)大小順序排列起來(lái)，就稱為電磁波譜。紫外光區(qū)和可見光區(qū)僅是電磁波譜中的一小部分。

5第一節(jié)光譜分析法概論第一節(jié)光譜分析法概論123

表9-1電磁波譜分區(qū)表電磁輻射區(qū)段波長(zhǎng)范圍能級(jí)躍遷的類型射線10-3~0.1nm原子核能級(jí)X射線0.1~10nm內(nèi)層電子能級(jí)遠(yuǎn)紫外輻射10~200nm內(nèi)層電子能級(jí)紫外輻射200~400nm價(jià)電子或成鍵電子能級(jí)可見光區(qū)400~760nm價(jià)電子或成鍵電子能級(jí)近紅外輻射0.76~2.5μm

涉及氫原子的振動(dòng)能級(jí)中紅外輻射2.5~50μm

原子或分子的振動(dòng)能級(jí)遠(yuǎn)紅外輻射50~500μm

分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)微波區(qū)0.3mm~1m分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)無(wú)線電波區(qū)1~1000m磁場(chǎng)誘導(dǎo)核自旋能級(jí)第一節(jié)光譜分析法概論

6表9-1電磁1247125第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類（一）發(fā)射光譜法發(fā)射光譜法：物質(zhì)的原子、分子或離子在一定條件下，由低能態(tài)（基態(tài)）躍遷至高能態(tài)（激發(fā)態(tài)），再由高能態(tài)躍遷至低能態(tài)，同時(shí)產(chǎn)生電磁輻射，根據(jù)這種光譜而建立的分析方法稱為發(fā)射光譜法。發(fā)射光譜法分類：原子發(fā)射光譜法、原子熒光光譜法、分子熒光光譜法、X射線熒光譜法。8第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類126第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類（二）吸收光譜法吸收光譜法：利用物質(zhì)對(duì)電磁輻射的選擇性吸收而建立的分析方法稱為吸收光譜法。吸收光譜法分類：原子吸收光譜法、紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、磁共振波譜法。9第一節(jié)光譜分析法概論二、光譜分析法的分類127第一節(jié)光譜分析法概論三、紫外-可見分光光度的特點(diǎn)1.靈敏度高2.準(zhǔn)確度高3.精密度好4.選擇性好5.儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，易于普及；操作簡(jiǎn)便，測(cè)定快速6.應(yīng)用范圍廣泛10第一節(jié)光譜分析法概論三、紫外-可見分光光度的特點(diǎn)128第二節(jié)紫外-可見分光光度法第二節(jié)紫外-可見分光光度法一、紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生當(dāng)分子（或離子）受到光照射時(shí)，能夠吸收具有一定能量的光量子，由能量較低的基態(tài)能級(jí)E1躍遷到能量較高的激發(fā)態(tài)能級(jí)E2

，即物質(zhì)對(duì)光具有選擇性吸收。紫外-可見光的能量(h)與分子（或離子）發(fā)生電子能級(jí)躍遷前后的能量差（E2-E1）恰好相等，電磁輻射與被測(cè)物發(fā)生能量交換，產(chǎn)生紫外-可見吸收光譜。11第二節(jié)紫外-可見分光光度法第二節(jié)紫外-可見分光光度法129吸光光度法的基本原理

(一)物質(zhì)的顏色及對(duì)光的選擇性吸收

1、可見光

人們?nèi)粘Ｋ吹降娜展?、白熾燈光只是電磁波中的一個(gè)很小的波段。人的眼睛能覺(jué)察到的那一小部分波段稱為可見光，波長(zhǎng)范圍在400～760nm。在可見光譜區(qū)內(nèi)不同波長(zhǎng)的光有著不同的顏色。從波長(zhǎng)較短的紫色光到波長(zhǎng)較長(zhǎng)的紅色光。12吸光光度法的基本原理(一)物質(zhì)的顏色及對(duì)光的選擇性吸收130各種單色光的波長(zhǎng)范圍

（可見光波長(zhǎng)范圍：400~760納米）

紅光：中心波長(zhǎng)：660納米；波長(zhǎng)范圍：760~622納米；

橙光：中心波長(zhǎng)：610納米；波長(zhǎng)范圍：622~597納米；

黃光：中心波長(zhǎng)：570納米；波長(zhǎng)范圍：597~577納米；

綠光：中心波長(zhǎng)：550納米；波長(zhǎng)范圍：577~492納米；

青光：中心波長(zhǎng)：460納米；波長(zhǎng)范圍：492~450納米；

藍(lán)光：中心波長(zhǎng)：440納米；波長(zhǎng)范圍：450~435納米；

紫光：中心波長(zhǎng)：410納米；波長(zhǎng)范圍：435~400納米。

13各種單色光的波長(zhǎng)范圍

（可見光波長(zhǎng)范圍：400~760納131吸光光度法的基本原理2、復(fù)合光由不同波長(zhǎng)的光混合而成的光稱為復(fù)合光。實(shí)驗(yàn)證明，日光、白熾燈光等可見光都是復(fù)合光。如果讓一束白光通過(guò)棱鏡，便可分解為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七種顏色的光，這種現(xiàn)象稱為光的色散。3、單色光只具一種顏色的光即單一波長(zhǎng)的光稱為單色光。分光光度計(jì)則是依靠單色光器中的棱鏡或光柵（色散元件）把復(fù)合光色散成所需要的單色光。14吸光光度法的基本原理2、復(fù)合光132吸光光度法的基本原理4、互補(bǔ)色光將兩種適當(dāng)顏色的單色光按一定強(qiáng)度比例混合可成為白光。這兩種單色光稱為互補(bǔ)色光。（二）溶液的顏色在漆黑的夜晚，我們看不到任何物質(zhì)的顏色，只有在白天我們才能欣賞到多彩的世界。物質(zhì)呈現(xiàn)何種顏色跟光源有關(guān)，也跟該物質(zhì)的結(jié)構(gòu)（本性）有關(guān)。物質(zhì)的結(jié)構(gòu)（本性）不同，物質(zhì)對(duì)光的性質(zhì)就會(huì)不同，物質(zhì)的顏色也就不一樣。圖13-1光的互補(bǔ)色15吸光光度法的基本原理4、互補(bǔ)色光圖13-1光的互補(bǔ)色133吸光光度法的基本原理1、有色溶液當(dāng)光束照射到物體上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光完全吸收，則呈現(xiàn)黑色；如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光均勻吸收，則呈現(xiàn)灰色；如果完全反射，則呈現(xiàn)白色；如果選擇性地吸收某些波長(zhǎng)的光。當(dāng)一束白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它選擇性地吸收了白光中某種色光。那么溶液呈現(xiàn)的是它吸收光的補(bǔ)色光（透過(guò)光）的顏色。

例如硫酸銅溶液因吸收了白光中的黃色光而呈現(xiàn)藍(lán)色，高錳酸鉀溶液因吸收了白光中的綠色光而呈現(xiàn)紫色。16吸光光度法的基本原理1、有色溶液134吸光光度法的基本原理由此可見，有色溶液的顏色是被吸收光顏色的補(bǔ)色。吸收越多，則補(bǔ)色的顏色越深。比較溶液顏色的深度，實(shí)質(zhì)上就是比較溶液對(duì)它所吸收光的吸收程度。2、無(wú)色溶液當(dāng)光束照射到物體上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光既不吸收也不反射，則呈現(xiàn)無(wú)色（透明）。當(dāng)一束白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它對(duì)白光中的任何顏色的光都沒(méi)有吸收和反射，則溶液呈現(xiàn)無(wú)色（透明），為無(wú)色溶液。圖13-1光的互補(bǔ)色17吸光光度法的基本原理由此可見，有色溶液的顏色是被吸收光顏13518136第二節(jié)紫外-可見分光光度法二、透光率與吸光度

當(dāng)一束單色光穿過(guò)均勻、透明介質(zhì)時(shí)，一部分光被溶液吸收，還有的透過(guò)、反射。I0＝Ia+It+Ir

I0＝Ia+It

I0入射光強(qiáng)度Ia吸收光強(qiáng)度It透射光強(qiáng)度Ir反射光強(qiáng)度19第二節(jié)紫外-可見分光光度法二、透光率與吸光度137透光率T:透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光度。吸光度A:對(duì)透光率的倒數(shù)取對(duì)數(shù)，稱為吸光度即：第二節(jié)紫外-可見分光光度法

20透光率T:透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率138第二節(jié)紫外-可見分光光度法三、朗伯-比爾定律

當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、無(wú)散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時(shí)，在入射光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比:

A＝K·L·c朗伯-比爾定律是定量分析的理論依據(jù)。21第二節(jié)紫外-可見分光光度法三、朗伯-比爾定律139朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無(wú)散射的溶液，而且也適用于均勻、無(wú)散射的固體和氣體。實(shí)驗(yàn)證明：溶液對(duì)光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時(shí)存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測(cè)得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質(zhì)吸光度的總和，即： A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac

第二節(jié)紫外-可見分光光度法22朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外140第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用ε表示。吸收系數(shù)不可能直接用1mol/L濃度的吸光物質(zhì)測(cè)量，一般是由較稀溶液的吸光系數(shù)換算得到。

23第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)141例1：已知含F(xiàn)e3+為500μg/L溶液用KSCN顯色，在波長(zhǎng)480nm處用2cm吸收池測(cè)得A=0.197,計(jì)算摩爾吸光系數(shù)ε。解：

答：摩爾吸光系數(shù)ε為1.1×104L/mol?cm。24例1：已知含F(xiàn)e3+為500μg/L溶液用KSCN顯色，142第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1﹪（g/100ml）、液層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用表示。摩爾吸光系數(shù)和百分吸光系數(shù)的關(guān)系：

25第二節(jié)紫外-可見分光光度法四、吸光系數(shù)143第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線

概念：以波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡(jiǎn)稱吸收光譜。26第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線14427145吸收光譜曲線的特征參數(shù)第二節(jié)紫外-可見分光光度法λsh28吸收光譜曲線的特征參數(shù)第二節(jié)紫外-可見分光光度法λsh146第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線

特點(diǎn):

（1）在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且λmax相同。這是定性分析的基礎(chǔ)。（2）測(cè)定條件一定時(shí)，吸光性物質(zhì)的濃度越大，其吸光度也越大。這是定量分析的基礎(chǔ)。29第二節(jié)紫外-可見分光光度法五、吸收光譜曲線147在正常情況下，選用同一種物質(zhì)的幾種不同濃度的溶液所測(cè)得的吸收光譜曲線的圖形是完全相似的，λmax值也是固定不變的。圖9-3是四種不同濃度的KMnO4溶液的四條吸收曲線，這四條吸收曲線的形狀完全相似，λmax值相同，這說(shuō)明物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光吸收的程度是不一樣的（選擇性吸收），這個(gè)特性只與溶液中物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)，而與溶液的濃度無(wú)關(guān)。30在正常情況下，選用同一種物質(zhì)的幾種不同濃度的溶液所測(cè)得的148第二節(jié)紫外-可見分光光度法六、偏離朗伯-比爾定律的因素化學(xué)因素:(1)溶液的濃度(2)物質(zhì)的化學(xué)變化(3)溶劑的影響光學(xué)因素:(1)非單色光

(2)雜散光

(3)非平行光

(4)反射現(xiàn)象

(5)散射現(xiàn)象31第二節(jié)紫外-可見分光光度法六、偏離朗伯-比爾定律的因素149第二節(jié)紫外-可見分光光度法32第二節(jié)紫外-可見分光光度法150第二節(jié)紫外-可見分光光度法七、紫外-可見分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)：

光源—單色器—吸收池—檢測(cè)器—顯示器基本類型:(1)可見分光光度計(jì)

(2)紫外-可見分光光度計(jì)

1）單波長(zhǎng)分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)