綜合實訓配套PPT-農(nóng)產(chǎn)品中菌落總數(shù)檢驗

農(nóng)產(chǎn)品微生物檢驗技術

綜合實訓4菌落總數(shù)的檢測

實驗材料和設備1實驗操作2目錄頁CONTENTSPAGE結(jié)果與報告3原始數(shù)據(jù)記錄表4一：實驗材料與設備除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：1、設備和材料（1）培養(yǎng)箱：36℃±1℃，30℃±1℃。（2）冰箱：2℃～5℃。（3）恒溫水浴箱：46±1℃℃。（4）天平：感量為0.1g。（5）均質(zhì)器。（6）振蕩器。（7）無菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭。（8）無菌錐形瓶：容量250mL、500mL。（9）無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。（10）pH計或pH比色管或精密pH試紙,放大鏡或/和菌落計數(shù)器。一：實驗材料與設備2、培養(yǎng)基和試劑（1）平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（2）磷酸鹽緩沖液或無菌生理鹽水二：實驗操作過程固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。1、樣品的稀釋二：實驗操作過程1、用

1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。2、

按

1操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。3、根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。4、及時將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46±1℃℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。1、樣品的稀釋二：實驗操作過程常用固體食品混懸液制法1、搗碎均質(zhì)法2、剪碎振搖法3、研磨法

4、整粒振搖法

5、胃蠕動均質(zhì)法二：樣品制備1、搗碎均質(zhì)法般將≥100g中樣剪碎或攪拌混勻，從中取25g放入帶225mL稀釋液的無菌均質(zhì)杯中，8000~10000r/min均質(zhì)1~2min即可。二：實驗操作過程2、剪碎振搖法一般將≥100g中樣剪碎混勻，從中取25g檢樣進一步剪碎，放入帶225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。二：實驗操作過程3、研磨法容易溶解和分散到稀釋劑的樣品一般將≥100g中樣剪碎混勻，從中取25g檢樣放入無菌乳缽中充分研磨后，再放入帶有225mL無菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后充分搖勻。二：樣品制備4、整粒振搖法直接稱取25g整粒樣品置于帶有225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。二：實驗操作過程5、胃蠕動均質(zhì)法國外常用，將一定量樣品和稀釋液于無菌均質(zhì)袋中，開機均質(zhì)；一般是通過金屬葉板打擊均質(zhì)袋撞碎樣品。二：實驗操作過程2、培養(yǎng)（1）待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36±1℃℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30±1℃℃培養(yǎng)72h±3h。（2）如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按

（1）

條件進行培養(yǎng)。二：實驗操作過程菌落計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。（1）選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。（2）其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。（3）當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。。三、結(jié)果與報告（1）菌落總數(shù)的計算方法若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度高的平板進行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以高稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應按稀釋度低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以低稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時，則以接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。三、結(jié)果與計數(shù)（2）菌落總數(shù)的報告菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。四：原始數(shù)據(jù)記錄表樣品編號

樣品名稱

樣品狀態(tài)□固態(tài)，無異常

□液態(tài)，無異常

□其他：樣品數(shù)量

溫

度℃濕

度%檢驗方法□GB4789.2-2010□GB4789.3-2010檢測地點4226無菌室主要檢測儀器名稱及編號□JM023DHG-9140A型電熱鼓風干燥箱

□JM049GHP-9160型隔水式恒溫培養(yǎng)箱□JM010TD型電子天平

設備狀態(tài)□正常

□其他：檢驗項目測試數(shù)據(jù)記錄計算公式檢驗結(jié)果菌落總數(shù)CFU/ml(g)培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間及溫度

平板計數(shù)瓊脂、36℃±1℃、48h±2h

菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

N＝∑C／（n1＋0.1n2）d

□CFU/g□CFU/mL稀釋液對照樣品不同稀釋度時平板計數(shù)瓊脂平板菌落數(shù)原液1/101/1001/1000

分析后檢測儀器狀況□正常

□其他：備

注

檢驗人員/日期: