HPLC分析方法中系統(tǒng)適用性試驗概念解析及評價參數(shù)

HPLC分析方法中系統(tǒng)適用性試驗概念解析及評價參數(shù)摘要：系統(tǒng)適用性試驗是分析實驗測定開始前，對分析系統(tǒng)（包括方法、操作和儀器）是否滿足測定要求進(jìn)行的驗證操作，如果符合要求，則可繼續(xù)進(jìn)行測定且其結(jié)果可靠，如果不符合要求，則需對系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整或改進(jìn)以滿足要求，保證后續(xù)實驗結(jié)果可靠。本文論述將從多維角度講述HPLC分析方法中系統(tǒng)適用性試驗概念解析，以及試驗評價參數(shù)，及如何確定系統(tǒng)適用性實驗內(nèi)容，如何選擇計算方法等研究部分。關(guān)鍵詞：系統(tǒng)適用性、評價參數(shù)、計算方法前言：《中國藥典》2015年版四部0512中關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗的內(nèi)容為：“色譜系統(tǒng)的適用性試驗通常包括理論板數(shù)、分離度、拖尾因子和重復(fù)性等四個參數(shù)。按各品種正文項下要求對色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗，即用規(guī)定的對照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗溶液在規(guī)定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗，必要時，可對色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以符合要求。”一、系統(tǒng)適用性試驗概念解析系統(tǒng)適用性試驗定義，即為用規(guī)定的對照溶液或測試溶液，對儀器進(jìn)行試驗和調(diào)整，以確認(rèn)色譜系統(tǒng)能滿足當(dāng)前檢測的要求。主要適用于色譜系統(tǒng)如氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）。整個驗證試驗是一個風(fēng)險管理的過程，是對色譜系統(tǒng)的風(fēng)險評估，對色譜系統(tǒng)是否符合檢測要求進(jìn)行的全面評估，不只是分離度的要求。其評價的是檢測中儀器、電信號、分析操作及樣品等方面的綜合特性。1.系統(tǒng)適用性試驗評價參數(shù)《中國藥典》2015年版四部0512中關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗的內(nèi)容為：色譜系統(tǒng)的適用性試驗通常包括理論板數(shù)、分離度、拖尾因子和重復(fù)性等四個參數(shù)。2.1理論板數(shù)N以被分析物主峰或規(guī)定的色譜峰計算柱效，以確定色譜峰的尖銳程度，尤其在痕量組分測定中尤為重要。理論板數(shù)高，峰高窄，則理論板數(shù)低，峰矮寬；低理論板數(shù)表明色譜條件與待測物的適用性較差，存在其他風(fēng)險，如定量誤差大，分離度較差等。但隨著技術(shù)發(fā)展，理論板數(shù)都較大，新開發(fā)方法較少制定該要求。N=5.54*（t/W）2其中（d=10uN=5萬、d=10uN=5萬、d——柱填料的顆粒直徑，t——保ppp R留時間，W/——半峰寬）2.2分離度R分離度是評價相鄰峰分離程度，或內(nèi)標(biāo)峰與主峰的分離程度，便于定量分析時確定測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。分離度不足可能會導(dǎo)致定量誤差大，另外一般雜質(zhì)間的分離度可以降低要求，而主成分與雜質(zhì)間的分離度要求需要更加嚴(yán)格。R=2（t2-t）/（W+W）S R R1 1 2其中（tR2——相鄰峰中后一峰的保留時間，tR1——相鄰兩峰中前一峰的保留時間，W及W為此相鄰兩峰的峰寬。）122.3拖尾因子T拖尾因子T是評價色譜柱的對稱性，便于保證峰積分時的測量精度，尤其采用峰高法計算含量時。較大的拖尾因子可能會積分誤差大，一般來說含量測定項需評估該項，拖尾因子在日常監(jiān)測過程中發(fā)生變化的可能性較小，其可接受標(biāo)準(zhǔn)在方法開發(fā)期間應(yīng)當(dāng)被評估，系統(tǒng)適用性試驗一般較少制定該要求。

T=W/2d其中（w005h——峰高處的峰寬，d1——峰極大至前言之間的距離，峰高定量時，T應(yīng)在0.95-1.05之間。）2.4重復(fù)性重復(fù)性是指連續(xù)進(jìn)樣重復(fù)性，不同于方法驗證，考察重復(fù)性的目的主要是確認(rèn)進(jìn)樣器的狀態(tài)可接受，影響重復(fù)性的其他因素如溶劑效應(yīng)、拖尾、波長等風(fēng)險應(yīng)當(dāng)在方法開發(fā)期間評估。1.如何確定系統(tǒng)適用性試驗內(nèi)容？系統(tǒng)適用性試驗是結(jié)合方法開發(fā)與驗證的相關(guān)數(shù)據(jù)，找出方法中與色譜系統(tǒng)相關(guān)的高風(fēng)險因素，制定相應(yīng)的考察項以確認(rèn)在今后的檢測工作中色譜系統(tǒng)能滿足要求。系統(tǒng)適用性試驗溶液：取****對照品適量，加稀釋劑制成每1ml約含**mg的溶液，置水浴中加熱4小時，取出，放冷，作為系統(tǒng)適用性溶液。判斷標(biāo)準(zhǔn)：主峰與相鄰降解雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)不小于1.5。1.系統(tǒng)適用性試驗計算方法含量測定、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體、基因毒雜質(zhì)、其他雜質(zhì)等不同測定主體適用于不同的計算方法，各種計算方法的對比見下表1：計算方法適用情況與要求

計算方法適用情況與要求外標(biāo)雜質(zhì)與主成分響應(yīng)或者性質(zhì)相差較大；雜質(zhì)對照品穩(wěn)定，易通用，需用到對照品外標(biāo)雜質(zhì)與主成分響應(yīng)或者性質(zhì)相差較大；雜質(zhì)對照品穩(wěn)定，易通用，需用到對照品獲得內(nèi)標(biāo)法供試品溶液制備過程較復(fù)雜，如需衍生或者萃取等；雜質(zhì)對照品穩(wěn)定，易獲得通用，需用到對照品自身對照法主成分外標(biāo)法各雜質(zhì)校正因子在0.2-5之間無需使用對照品，多個樣品配制繁瑣各雜質(zhì)校正因子在0.2-5之間需用到對照品，一份對照品溶液可測定多份樣品面積歸一化法雜質(zhì)含量較高，供試品濃度在線性范圍內(nèi)，各雜質(zhì)校正因子在0.2-5之間操作簡便，誤差大限度法無需提供定量結(jié)果的雜質(zhì)控制需用到對照品，無法提供定量的結(jié)果表1：系統(tǒng)適用性試驗計算方法

檢測項外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法自身對照法主成分外標(biāo)法面積歸一化法含量測定+-+iii有關(guān)物質(zhì)+-i+++異構(gòu)體ii+++基因毒雜質(zhì)+±i+i其他雜質(zhì)+±iii注：+能用，一不用，土根據(jù)情況判斷表2檢測項對應(yīng)的計算方法參考文獻(xiàn)國家藥典委員會.《中國藥典》2015年版四部[S]2.國家藥典委員會.《中國藥典》2005年版二部[S]3.謝沐風(fēng).如何建立高