菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典演示文稿

菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有40頁\編輯于星期四（優(yōu)選）菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典現(xiàn)在是2頁\一共有40頁\編輯于星期四菊花的組織培養(yǎng)現(xiàn)在是3頁\一共有40頁\編輯于星期四有絲分裂受精卵細(xì)胞分化

在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。1、細(xì)胞分化的概念知識回顧（一）現(xiàn)在是4頁\一共有40頁\編輯于星期四黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細(xì)胞，始終保持為上皮細(xì)胞，而不會變成其他類型的細(xì)胞。2、穩(wěn)定性3、不可逆性細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。1、持久性2、細(xì)胞分化的特點(diǎn)造血干細(xì)胞原紅細(xì)胞早幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞死亡4、普遍性現(xiàn)在是5頁\一共有40頁\編輯于星期四

細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？

遺傳物質(zhì)沒有改變，不同組織的細(xì)胞共同來源于受精卵，經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生?，F(xiàn)在是6頁\一共有40頁\編輯于星期四3、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在個(gè)體發(fā)育過程中，不同細(xì)胞中遺傳信息的執(zhí)行情況不同即基因的選擇性表達(dá)的過程現(xiàn)在是7頁\一共有40頁\編輯于星期四

紅細(xì)胞合成血紅蛋白(不合成肌動蛋白)肌細(xì)胞肌動蛋白基因開啟合成肌動蛋白(不合成血紅蛋白)肌動蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開啟試一試:現(xiàn)在你能解釋這些現(xiàn)象了嗎?4、細(xì)胞分化的結(jié)果細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能現(xiàn)在是8頁\一共有40頁\編輯于星期四愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德

植物組織培養(yǎng)離體回顧知識（二）現(xiàn)在是9頁\一共有40頁\編輯于星期四（一）、植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成完整的植株。又稱：植物離體培養(yǎng)現(xiàn)在是10頁\一共有40頁\編輯于星期四脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。愈傷組織：細(xì)胞排列疏松、無規(guī)則、高度液泡化的無定形的薄壁細(xì)胞。現(xiàn)在是11頁\一共有40頁\編輯于星期四切取形成層無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（二）、植物組織培養(yǎng)的基本過程現(xiàn)在是12頁\一共有40頁\編輯于星期四植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光現(xiàn)在是13頁\一共有40頁\編輯于星期四（三）、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)---細(xì)胞全能性概念：高度分化的植物細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能?；A(chǔ)：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。表達(dá)條件：離體條件無菌操作適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（植物激素）適宜的營養(yǎng)物質(zhì)溫度、酸堿度、光照等條件的控制現(xiàn)在是14頁\一共有40頁\編輯于星期四思考這個(gè)試驗(yàn)說明了已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化的動物體細(xì)胞的細(xì)胞核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能多利羊的誕生動物細(xì)胞有沒有這種能力？現(xiàn)在是15頁\一共有40頁\編輯于星期四已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。細(xì)胞全能性思考為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育所需要的全套基因植物組織培養(yǎng)技術(shù)動物的克隆技術(shù)現(xiàn)在是16頁\一共有40頁\編輯于星期四1、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法（受體細(xì)胞為植物細(xì)胞）（四)、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題）現(xiàn)在是17頁\一共有40頁\編輯于星期四三、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）材料的種類、年齡及保存時(shí)間長短等（2）營養(yǎng)（3）植物激素（4）PH、溫度、光照等條件現(xiàn)在是18頁\一共有40頁\編輯于星期四（1）植物材料的選擇---直接關(guān)系實(shí)驗(yàn)的成敗煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難材料的年齡、保存時(shí)間的長短菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝注意：外植體的選取

不同植物的組織培養(yǎng)難度不同同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同現(xiàn)在是19頁\一共有40頁\編輯于星期四（2）營養(yǎng)---MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等

D、植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等現(xiàn)在是20頁\一共有40頁\編輯于星期四討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。

現(xiàn)在是21頁\一共有40頁\編輯于星期四常用的植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長素、細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素在生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈加強(qiáng)的趨勢激素的使用順序、使用的量及比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向（3）植物激素的影響現(xiàn)在是22頁\一共有40頁\編輯于星期四使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長素細(xì)胞既分裂、也分化同時(shí)使用分化頻率高使用比例實(shí)驗(yàn)結(jié)果生長素細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素細(xì)胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進(jìn)愈傷組織生長現(xiàn)在是23頁\一共有40頁\編輯于星期四思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細(xì)胞分裂素高利于根的形成適中利于愈傷組織的形成現(xiàn)在是24頁\一共有40頁\編輯于星期四供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度均為0.5mg／Ｌ２、誘導(dǎo)菊花從芽：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度分別為2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3、誘導(dǎo)菊花生根：在MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAA或IAA，質(zhì)量濃度均為0.1mg／Ｌ現(xiàn)在是25頁\一共有40頁\編輯于星期四(4)、pH、溫度、光照（菊花組織培養(yǎng)為例）

pH=5.8溫度控制在18—22℃每日光照12h現(xiàn)在是26頁\一共有40頁\編輯于星期四制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培四、實(shí)驗(yàn)操作移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌現(xiàn)在是27頁\一共有40頁\編輯于星期四（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4℃保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配制各種母液①無機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量現(xiàn)在是28頁\一共有40頁\編輯于星期四2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌現(xiàn)在是29頁\一共有40頁\編輯于星期四1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液現(xiàn)在是30頁\一共有40頁\編輯于星期四（三）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種現(xiàn)在是31頁\一共有40頁\編輯于星期四現(xiàn)在是32頁\一共有40頁\編輯于星期四4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分現(xiàn)在是33頁\一共有40頁\編輯于星期四正常苗污染苗現(xiàn)在是34頁\一共有40頁\編輯于星期四1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑現(xiàn)在是35頁\一共有40頁\編輯于星期四思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。現(xiàn)在是36頁\一共有40頁\編輯于星期四（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)溫度控制在18-22℃每日用日光燈光照12h現(xiàn)在是37頁\一共有40頁\編輯于星期四（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3、移栽幼苗長