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關于高中生物第三章第二節(jié)月季的花藥培養(yǎng)新人教版選修第1頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三1、被子植物定義:凡是種子有果皮包被著,胚珠有子房壁包被著的植物,就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義:凡是胚珠裸露,外面沒有子房壁包被,種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物實例:玉米、大豆、梨、杏實例:松、杉、柏第2頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三第3頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三第4頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三第5頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三3、花的結構第6頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三花的結構:花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊第7頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三4、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進行的,雌蕊和雄蕊是進行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥:囊狀結構,內有很多花粉粒1、雄蕊的結構雄蕊:第8頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三花粉是小孢子母細胞經過減數分裂而形成的,因此,花粉是單倍體的生殖細胞2、被子植物的花粉發(fā)育②花粉粒的形成花粉母細胞(小孢子母細胞)減數分裂①經歷時期:四分體時期、單核期、雙核期第9頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三四分體時期(進入單核期)有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)

小孢子(單核花粉粒)第10頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三精子精子有絲分裂花粉管細胞核生殖細胞核生殖細胞營養(yǎng)細胞雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同第11頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三1花粉母細胞4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有分8個精子第12頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三第13頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三花粉落到雌蕊柱頭上以后,在柱頭上黏液的刺激下,花粉開始萌發(fā)并形成花粉管,花粉管沿著花柱向胚珠方向生長,到達胚珠后從珠孔繞過卵細胞進入胚囊,到達胚囊中卵細胞和極核之間,這時花粉管的前端破裂,兩個精子釋放出來,其中一個精子與兩個極核結合形成受精極核,另一個精子與卵細胞結合形成受精卵,這是被子植物特有的雙受精現象4、受精過程第14頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三第15頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三三、產生花粉植株的兩條途徑四、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇接種的花藥時期第16頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三不同植物的誘導成功率很不相同,就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導成功率也有直接影響②選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素因為并不是任何時期的花粉都可以經過培養(yǎng)產生愈傷組織或胚狀體,花粉發(fā)育的過程中,只有某一個時期對離體刺激敏感。選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關鍵①選材第17頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三一般來說,在單核期,細胞核由中央移向細胞一側的時期,花藥培養(yǎng)的成功率最高。即:最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期選擇單核期以前的花藥接種,質地幼嫩,極易破碎;選擇單核期之后的花藥接種,花瓣已有些松動,又給材料的消毒帶來困難,且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時期的選擇④其它時期選擇的缺點第18頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三⑦花藥培養(yǎng)時間為了挑選到單核期的花藥,通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花,都不宜選作實驗材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾,可挑選到單核期的花藥,菌少、易消毒⑤單核期花藥的挑選一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月的中旬,即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好,可能提高花粉的誘導成功率第19頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是()

A、四分體時期B、單核居中期

C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C第20頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三2、其他因素親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種的密度等對誘導成功都有一定的影響五、實驗操作(一)材料的選取②某些植物的花粉細胞核不易著色,需采用焙花青-鉻礬法,這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法第21頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三①醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅為堿性染色劑,而花粉細胞內有染色體,染色體主要成分是DNA和蛋白質,易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分數45%的醋酸100ml煮沸,緩緩加入1g洋紅,在加熱回流8h,冷卻至50℃,過濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法第22頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三將花藥放在載玻片上,加一滴質量分數1%的醋酸洋紅,用鑷柄將花藥搗碎,蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3:1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法第23頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三花藥應該在卡諾氏固定液中固定20min,然后取出放在載玻片上,加焙花青—鉻釩溶液染色,蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中,溶解后加入0.1g焙花青,混勻并加熱至沸騰,煮沸5分鐘后冷卻至室溫,過濾,加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作第24頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三(二)材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分數為70%的酒精浸泡30秒,立即取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分第25頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三2、消毒液處理(三)接種和培養(yǎng)①放入質量分數為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘(也可質量分數為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液)②無菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥,實際上多數未熟,由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護,通常處于無菌狀態(tài),所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。第26頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲,因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成取出花藥后立即將其接種于培養(yǎng)基上,通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝取花藥①勿損傷花藥,以免誘導出非花粉愈傷組織2、接種注意:第27頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三①培養(yǎng)條件:溫度控制在25℃左右,不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng):一般經過20-30天培養(yǎng)后,會發(fā)現花藥開裂,長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上,以便進一步分化出再生植株③注意:如果花藥開裂釋放出胚狀體,則一個花藥內就會產生大量幼小植株,必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開,分別移植到新的培養(yǎng)基上,否則這些植株將很難分開。第28頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三在花藥培養(yǎng)中,特別是通過愈傷組織形成的花粉植株,常常會出現染色體倍性的變化(主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的)4、鑒定和篩選第29頁,講稿共31頁,2023年5月2日,星期三5、植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的異同點:項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術離體的植物組織

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