臨床生物試劑

臨床生物試劑臨床生物試劑第1頁§1

臨床診療試劑研發(fā)覺實狀況1.1醫(yī)學檢驗發(fā)展1.2我國臨床診療試劑發(fā)展歷程1.3臨床診療試劑現(xiàn)實狀況1.3.1臨床生化試劑臨床生物試劑第2頁

試劑盒發(fā)展及現(xiàn)實狀況

方法學：化學法→酶法→免疫法

物理性狀：液體型試劑（自配）→凍干型試劑→干(片)粉型試劑→液體型試劑

組合方式：多劑型試劑→單劑型試劑→雙劑型（多劑型）試劑

操作方式：手工多步操作→離心式生化儀→分立式（雙試劑功效）生化儀臨床生物試劑第3頁臨床生物試劑測定物分類名稱酶類α-淀粉酶、α-羥丁酸脫氫酶、γ-谷氨酰轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同功酶、堿性磷酸酶、門冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶糖類葡萄糖、果糖胺脂類膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇、載脂蛋白A-1/B臨床生物試劑第4頁§2我國臨床診療試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景（1）

免疫診療試劑將會逐步取代臨床化學試劑，成為診療試劑發(fā)展主流（2）

診療技術正在向兩極發(fā)展。一是高度集成、自動化儀器診療，另一個是簡單、快速便于普及快速診療臨床生物試劑第5頁（4）產(chǎn)品更新應用加緊，因為遺傳工程、基因重組以及單克隆抗體等當代生物技術不停應用和發(fā)展，使這些準確診療試劑能快速由研究階段進入臨床階段，縮短了開發(fā)時間（3）檢驗產(chǎn)品種類將快速擴充臨床生物試劑第6頁

§3化學試劑等級標準3.1國產(chǎn)化學試劑通用化學試劑，共分為四個純度。市售化學試劑在瓶子標簽上用不一樣符號和顏色標明它純度等級。試劑純度不一樣，其適用范圍不一樣。見下表臨床生物試劑第7頁國產(chǎn)化學試劑品質(zhì)規(guī)格等級名稱符號色標說明一級優(yōu)級純GR綠色純度高,適適用于研究和配制標準液二級分析純AR紅色純度較高,適適用于定量分析三級化學純CP藍色純度略低于二級試劑,用途與其相同四級實驗試劑LR黃色質(zhì)量較粗,用于普通定性試驗臨床生物試劑第8頁3.2國外生產(chǎn)化學試劑國外化學試劑規(guī)格種類繁多，頗不一致，和國產(chǎn)試劑規(guī)格對照,見表等級

規(guī)格符號

相當于國產(chǎn)試劑規(guī)格

Ⅰ

AR,GR,ACS,PA一級品

Ⅱ

CP,PUSS,LAB,Reinse二級品

Ⅲ

LR,EP,Pract,Rein三級品

Ⅳ

Pure四級品

臨床生物試劑第9頁3.4.2基準試劑、色譜純試劑(液相色譜淋洗劑)、色譜標樣(色譜標準物)、標準物質(zhì)和標準溶液、優(yōu)級純試劑、三類試劑(顯色劑/染色劑/指示劑)、教學試劑、高純金屬單質(zhì)(金屬粉劑/金屬粒劑/金屬片劑)、摩爾酚劑、PH緩沖劑、滴定分析用當量（摩爾）標準溶液、滴定分析（容量分析）用標準溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液(離子液)、分析室常見制劑、培養(yǎng)基等臨床生物試劑第10頁§

4危險、有害化學品

4.1爆炸品注意防止撞擊、摩擦、打火花和加熱爆炸性物質(zhì)（E符號）臨床生物試劑第11頁4.2氧化劑能使易燃物質(zhì)燃燒或使存在火燒更旺，使得救火更難。注意：保持遠離易燃物質(zhì)氧化性物質(zhì)（O符號）臨床生物試劑第12頁4.3極度易燃物質(zhì)閃點在0OC以下液體和沸點/開始沸點最大值為35OC液體。注意：防止同全部火源接觸4.4高度易燃物質(zhì)易燃物質(zhì)（F符號）臨床生物試劑第13頁（3）對濕氣敏感物質(zhì)，同水接觸時易形成易燃燒氣體化學試劑。注意：防止接觸濕氣或水極易燃物質(zhì)（F＋符號）（2）各種氣體、氣體混合物（還有液氣體），在正常壓力下同氣體接觸有著火范圍。注意：防止形成易燃氣體混合物，保持遠離火源（1）自發(fā)易燃物質(zhì)，在空氣中易著火化學試劑。注意：防止接觸空氣臨床生物試劑第14頁（5）在火源短期作用后，很易著火固體物質(zhì)。注意：防止同全部火源接觸（4）閃點低于21OC液體。注意：保持遠離開放火源、熱源和發(fā)生火花處臨床生物試劑第15頁4.5很毒、有毒物質(zhì)當吸入、吞入或同皮膚接觸時對健康是很危險，甚至可造成死亡。非重復、重復或長久接觸這些物質(zhì)，可造成不可逆損害。注意：防止同人體接觸，如有不適，馬上看醫(yī)生有毒物質(zhì)（T符號）和極高毒性物質(zhì)（T＋符號）臨床生物試劑第16頁吸入和食入或皮膚滲透這些物質(zhì)對人健康是有害。非重復、重復或長久接觸這些物質(zhì)造成不可逆損害。注意：防止同人體接觸，包含吸入蒸汽，如有不適，馬上看醫(yī)生4.6有害化學品有害物質(zhì)（Xn符號）臨床生物試劑第17頁4.7腐蝕性化學品生活組織以及儀器同這些化學品接觸后會破壞。注意：不要吸入蒸汽，防止接觸皮膚、眼及衣服腐蝕性物質(zhì)（C符號）臨床生物試劑第18頁4.8有刺激性化學品注意：不要吸入蒸汽、防止同皮膚和眼接觸刺激性物質(zhì)（Xi符號）臨床生物試劑第19頁§

5化學試劑保管化學試驗所用藥品種類多，有些對人有毒害作用，另一些易燃、易爆或有劇毒性，藥品管理要以安全、不變質(zhì)為標準?；瘜W試劑保管應分類保管。5.1普通試劑保管（1）試劑必須按固體、液體分類并歸類按需排列，[無機物按單質(zhì)(金屬和非金屬)，氧化物(堿性氧化物、酸性氧化物和兩性氧化物)，堿，酸和鹽]進行分類做好登記，貯存與陰涼、避光、通風、干燥處。臨床生物試劑第20頁（2）密封（3）避光（4）陰涼5.2危險品保管凡是能發(fā)生燃燒、爆炸、中毒、灼燒等災害化學試劑都屬于化學危險品。保留要嚴格恪守公安部門使用要求。臨床生物試劑第21頁含有燃點低、易揮發(fā)，碰到高溫、猛烈摩擦或撞擊，極易著火和爆炸等特征。常見易燃試劑有丙酮、乙醚、乙醇、異丙醇等，易爆試劑有苦味酸、疊氮鈉等。

5.2.1易燃和易爆試劑5.2.2腐蝕性試劑對人、金屬、塑料等都有不一樣程度腐蝕作用。常見有硫酸、冰醋酸、醋酸酐、硝酸、溴、氨水等。臨床生物試劑第22頁5.2.3劇毒試劑凡生物試驗半數(shù)致死量在50mg/Kg以下者均為劇毒藥品，如氰化物、三氧化二砷、氯化汞等少許進入人體或接觸皮膚即可造成中毒甚至死亡。應指定專員專柜加鎖保管，嚴格登記請領制度。臨床生物試劑第23頁§6標準參考物質(zhì)

基準試劑、標準物質(zhì)標準參考物（標準品）分級三種方法和三個參考物質(zhì)概念，在每一等級測定方法與參考物質(zhì)間有對應關系。6.1方法分級6.1.1決定性方法（definitivemethod）（1）定義：臨床生物試劑第24頁是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)詳細研究，沒有發(fā)覺產(chǎn)生誤差原因或在一些方面不夠明確方法，測定結果為“確定值”，與“真值”最靠近。（2）用途只用于發(fā)展及評價參考方法和一級標準品。國際上只有少數(shù)試驗室進行研究，不能作為常規(guī)測定。臨床生物試劑第25頁6.1.2參考方法（referencemethod）（1）定義是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實分析方法，干擾原因少，系統(tǒng)誤差很小，與重復測定隨機誤差相比能夠忽略不計，有適當靈敏度、特異性、直線性及較寬分析范圍。（2）用途在條件優(yōu)越試驗室中應經(jīng)常使用，主要應用于判定常規(guī)方法，評價其誤差大小，干擾原因，并決定其是否能夠被接收。它也用于判定二級標準品，為質(zhì)控血清定值，也可用于評價商品試劑盒等。臨床生物試劑第26頁6.1.3常規(guī)方法（routinemethod）方法性能指標符合臨床或其它目標需要，有適當分析范圍，而且經(jīng)濟實用。其中有些方法準確度已經(jīng)確定方法。常規(guī)方法在作出評價以后，經(jīng)相關學術組織認可后能夠作為推薦方法。用作服務性試驗室定量分析。臨床生物試劑第27頁臨床化學方法關系圖臨床生物試劑第28頁6.2標準物質(zhì)分級6.2.1一級標準物質(zhì)（原級參考物）（1）定義是一個穩(wěn)定而均一物質(zhì)，它一個或各種理化性質(zhì)已充分了解，它數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準確方法確定，所含雜質(zhì)也已定量，普通有權威機構（如美國國家標準局，英國物理試驗室等）提供，有證書。（2）用途用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為二級標準品定值。臨床生物試劑第29頁（3）分類

國家確認參考物質(zhì)：由國家確認、其中成份含量在國家要求范圍以內(nèi)，并附有證書參考物。如美國國家標準局（NBS）參考物質(zhì)屬這類。生物源性參考物質(zhì)：通常這類參考物質(zhì)與測定標本完全是同類，也就是用混合人血清將其中成份用決定性方法測定后進行定值。臨床生物試劑第30頁另一個擬似測定標本生物源性參考物（其性質(zhì)與病人標本很靠近），其成份濃度必須用決定性方法或幾個不一樣類型高準確方法進行定值，已知干擾或可能干擾物質(zhì)須有說明。生物源性參考物質(zhì)常見于評價方法可靠程度或用它證實干擾物質(zhì)對參考方法或常規(guī)方法偏差，以及了處理定性方法、參考方法和常規(guī)方法三種結果之間相互關系。如定值參考血清屬于這類。臨床生物試劑第31頁6.2.2二級標準物質(zhì)（次級參考物）（1）定義包含用于常規(guī)分析標準液。這類標準品可有試驗室自己配制或為商品，它示值必須用一級標準品和參考方法，并由訓練有素、能熟練掌握參考方法操作者確定。（2）用途主要用于常規(guī)方法評價或為控制物定值和常規(guī)測定結果計算。臨床生物試劑第32頁（3）分類純物質(zhì)（通常見水溶液或有機溶劑溶液）和生物源性介質(zhì)（如透析后血清）中含參考物質(zhì)成份制品純物質(zhì)本身就是第一標準物質(zhì)或含有第一標準物質(zhì)定值物質(zhì)。生物源性介質(zhì)配制所含各種被測成份須經(jīng)參考方法定值。自制訂值參考血清即屬這類。臨床生物試劑第33頁6.2.3質(zhì)控物質(zhì)是用生物源性介質(zhì)制成（如人或動物血清），基礎應用于常規(guī)室內(nèi)或室間質(zhì)量控制。有凍干與液體兩種。6.2.4標準物質(zhì)與測定方法關系見下頁臨床生物試劑第34頁

決定性方法

用途：評價參考方法及一級參考物一級標準

用途：發(fā)展及評價參考方法，校正決定方法及參考方法，生產(chǎn)二級標準物質(zhì)參考方法

用途：為二級標準定值、評價常規(guī)方法（準確性、偏差、干擾原因）二級標準

用途：常規(guī)方法工作標準及為質(zhì)控定值常規(guī)方法

用途：服務性試驗室定量分析

質(zhì)控

用途：質(zhì)量控制臨床生物試劑第35頁6.3.3標準液配制標準液屬于二級標準物質(zhì)，其示值準確性對檢驗質(zhì)量有重大影響，必須在標準物質(zhì)選者、恒重方法程序、基質(zhì)（包含水）質(zhì)量、最優(yōu)化配方和制備工藝上都要嚴格要求6.3.4普通注意事項（1）試劑規(guī)格要求（2）對水要求（3）合理選取衡器和量器臨床生物試劑第36頁6.3.5配制方法方法：直接法與間接法（1）直接法①用固體溶質(zhì)配制試劑普通采取稱重法②用液體溶質(zhì)配制試劑采取容量法（2）間接法對于易失恒重或含量不準液體試劑可采取間接配制法臨床生物試劑第37頁說明：（1）對多數(shù)原料配制時，需先烘干，烘干溫度因物而已，多為105~110OC，烘干標準是恒重，要置于干燥器冷卻后方能稱重，配制標準液所用水質(zhì)要求較高；（2）從理論上講，作為臨床生化測定標準液最好采取與被測物質(zhì)相近介質(zhì)-血清作為介質(zhì)，但因現(xiàn)在不能制備一級標準血清，故普通還采取水溶液作介質(zhì)。從發(fā)展方向看，水溶液樣品必將被標準血清所取代。臨床生物試劑第38頁6.4酶校準物6.4.1酶校準物使用方法使用酶校準物方法就是用公認酶校準物使一個或各種常規(guī)方法測定結果與標準方法相同，也就是經(jīng)過酶校準物將不一樣方法得出結果數(shù)值按標準物測定所選定標準方法來表示。它是利用標準物作為載體，使測定結果數(shù)值在標準方法和常規(guī)方法見傳遞。這么使用標準校準物，就是可能統(tǒng)一測定結果。臨床生物試劑第39頁6.4.2公認酶校準物起源相關公認酶校準物起源當前已經(jīng)有幾個國家和國際組織發(fā)表了測定酶催化活性參考方法。歐洲標準局（BCR）和美國國家標準技術研究院（NIST）已經(jīng)研制出了一些酶一級標準物（有證參考物，certifiedreferensematerialCRM或standardreferencematerialSRM）。臨床生物試劑第40頁推出個別酶有證參考物（CRM）名稱代碼起源類型GGTCRM319豬腎ALPCRM371豬腎肝、骨、ALTCMR426豬心臟胞漿CKCRM299人胎盤LDCRM410人前列腺*保留條件為-20℃臨床生物試劑第41頁6.4.3使用酶校準物優(yōu)點6.4.4制備溫度標準：以鎵熔點（29.77OC）作為30OC標準。測定方法：以國際臨床生化學會（IFCC）推薦法為準。制備參考物：要求酶必須起源于人體或試驗證實于人體酶極為相同，并純化到達一定要求。介質(zhì)必須是血清，最好是人血清。臨床生物試劑第42頁6.5脂類標準品─膽固醇標準參考物質(zhì)制備6.5.1制備1.血清采集：采集健康人血液（膽固醇水平適當，即在5.2mmol/L），在無菌條件下分離血清，剔除溶血和乳靡血清。2.大量血清混合：6.5.2定值臨床生物試劑第43頁6.6質(zhì)控血清制備質(zhì)量控制血清名稱來自英文controlserum6.6.1基礎物選擇人血清最理想，但大量制備時血源有困難。我國應用較多為豬血清。要求：清澈、無肉眼可見溶血；無肝炎和支原體健康牛血清，并測定布氏桿菌凝集試驗為陰性。臨床生物試劑第44頁6.6.2搜集血清和分離血清

血清搜集采血可用靜脈放血或屠宰動物時接血兩種方法

分離血清方法（1）攪動血液直到血塊出現(xiàn)，用手拉出凝快，棄去纖維蛋白?？墒茄寮凹t細胞成游離狀態(tài)，離心沉淀時分離快；但注意不能過分攪動，要防止溶血可使血鉀含量升高。（2）待血液自然凝固后劃成小塊，使血清盡快自行析出。臨床生物試劑第45頁搜集血清置大型離心機沉淀兩次，要除凈紅細胞等有形成份。操作過程盡可能采取無菌技術并防止溶血。將血清置于-20~-50OC低溫條件下冰凍二十四小時以上，取出在室溫中融化，增加凍融次數(shù)可減輕血清濁度（7次）。另一方法是化學沉淀法。臨床生物試劑第46頁6.6.3加入及調(diào)整各成份質(zhì)控血清普通分為高、中和低濃度三種。測定血清中各成份含量，依據(jù)需要進行透析除去小分子物質(zhì)，或用將血清稀釋后補加水溶性成份或酶等方法來制備不一樣濃度血清。臨床生物試劑第47頁6.6.4過濾WHO材料介紹要進行微生物檢定。將除菌后所得血清，1滴加入巰基乙酸鹽培養(yǎng)基中，置37OC；1滴加入胰酶水解大豆肉湯中，置25OC，1滴于血液瓊脂平板上劃線，置37OC。均經(jīng)48小時孵育，檢驗有沒有細菌生長。臨床生物試劑第48頁8.6.5液體血清保留臨床生物試劑第49頁

6.6.6分裝臨床生物試劑第50頁6.6.7貼瓶簽臨床生物試劑第51頁6.6.8儲存

6.6.9判定臨床生物試劑第52頁3.無菌檢察。4.含水量測定。6.6.10單項質(zhì)控血清制備高脂質(zhì)控血清臨床生物試劑第53頁6.6.11對質(zhì)控血清要求（1）均勻一致，瓶間差異小，小于均數(shù)0.5%，普通不致顯著影響分析精密度。（2）穩(wěn)定，在使用期內(nèi)控制成份應穩(wěn)定不變或改變很小，不影響質(zhì)控使用。（3）質(zhì)控成份應有一個適合濃度，最好有三種不一樣濃度（低值、正常值、病理性高值）質(zhì)控血清，且高濃度、低濃度分別應到達該項目分析范圍上限和下限。用3種濃度血清更輕易發(fā)覺分析范圍線性改變，更準確判斷系統(tǒng)誤差性質(zhì)和大小。如僅有一個濃度時，應采取生理參考值上限偏高為宜。臨床生物試劑第54頁（4）一個控制血清“控制”項目應包含常做全部試驗項目。臨床生物試劑第55頁§

7.臨床化學試劑盒

優(yōu)點:節(jié)約了實際、時間和勞動力，提升了試驗室工作效率;確保試驗室結果可靠;節(jié)約試驗時間。

試劑盒生產(chǎn)必須考慮到:使用方便及方便性、低干擾、質(zhì)量和結果可靠性及成本—存在一個平衡關系，研制試劑盒時就要找到一個盡可能好平衡點。對試劑盒效期要求普通在六個月以上。臨床生物試劑第56頁§

7.1試劑盒分類

按物理性狀分：固體型（片劑型或干粉型，凍干型）；液體型；干片型

按組合方式：單劑型；雙劑型；多劑型

交叉組合分類：凍干單劑型；凍干雙劑型；液體單劑型；液體雙劑型臨床生物試劑第57頁7.1其它類型試劑盒1.快速反應試劑盒2.一步試劑盒3.多項同測組合試劑盒4.卡式試劑盒5.濃縮試劑盒臨床生物試劑第58頁7.1液體雙試劑盒特點1.提升了抗干擾反應能力2.使試劑更科學合理3.穩(wěn)定性能良好4.試劑組分高度均一臨床生物試劑第59頁7.2臨床生化試劑盒質(zhì)量控制7.2.1線性及線性范圍

7.2.2準確性主要測定回收率、質(zhì)控血清定值、對照試驗劑干擾試驗7.2.3精密度

7.2.4抗干擾作用

7.2.5靈敏度臨床生物試劑第60頁7.2.6穩(wěn)定性穩(wěn)定性指標有三個（1）原包裝試劑穩(wěn)定性（2）復溶后試劑穩(wěn)定性（3）不一樣溫度下保留期7.2.7正常參考范圍7.3常見臨床化學試劑盒配置所用水均為二級交換水，化學試劑除特殊指定外均為分析純，配制溫度為室溫，試劑在分裝前均需用2號沙芯漏斗過濾，除去不溶物質(zhì)。臨床生物試劑第61頁7.4試劑盒性能評價7.4.1說明書審查7.4.2理學檢驗與評價

7.4.3性能指標檢驗與評價臨床生物試劑第62頁§

8.試劑級水8.1自來水中污染物8.2試驗室用水分級

8.2.1美國NCCLS等級水要求8.2.2GB6682-92分析試驗室用水等級標準臨床生物試劑第63頁美國NCCLS等級水要求指標Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級微生物含量（CFU/ml）<10<103

未定pH未定未定5.0~8.0電阻率(MΩ.cm)25OC102.00.1硅酸鹽（SiO2mg/L）<0.05<0.1<1.0顆粒物質(zhì)0.2μm微孔膜過濾未定未定有機物質(zhì)活性碳過濾未定未定臨床生物試劑第64頁分析試驗室用水規(guī)格（GB6682-92）指標一級二級三級pH值范圍25

OC——5.0~7.5