輔酶q輔酶q皂化提取法的研究進(jìn)展

輔酶q輔酶q皂化提取法的研究進(jìn)展

1肥皂法的提取法提取方法：q矩陣優(yōu)。1.1提取工藝的制備醇堿皂化提取法的一般方法是:首先向菌體中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%左右的焦性沒食子酸,再緩慢加入1.3～1.5倍體積的氫氧化鈉-乙醇溶液攪拌,再加入正己烷進(jìn)行回流提取,迅速冷卻至室溫。然后用適量石油醚多次萃取,水洗至中性,再取水濃縮,真空濃縮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,最后用無水乙醇溶解。李聚海等醇堿皂化法中,由于在乙醇的存在下,長時(shí)間的皂化可能導(dǎo)致輔酶Q11.2生物處理法提取堿后制備工藝堿皂化提取法的一般方法是:首先向菌體中加入酸性水,水浴加熱回流3h后,緩慢加入稀釋一定倍數(shù)的氫氧化鈉,再回流一段時(shí)間,迅速冷卻至室溫。然后加入用機(jī)溶劑浸提2～3次,取上清液水洗至中性,再取水濃縮,真空濃縮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,最后用無水乙醇溶解。邱衛(wèi)東等堿皂化提取法與醇堿皂化提取法相比,雖然容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象,但利用堿皂化法提取輔酶Q1提取量高且生成的雜質(zhì)少。2細(xì)胞破碎法細(xì)胞破碎提取法目前常用的有物理研磨法、化學(xué)溶解法等,但其破碎效果不是十分理想,提取率低且成本太高,因此,尋找高效的細(xì)胞破碎方法對于工業(yè)化生產(chǎn)具有十分重要的實(shí)際意義。常見的細(xì)胞破碎提取法主要有:有機(jī)溶劑攪拌破碎提取法、研磨破碎提取法、超聲波破碎提取法。2.1提取溶劑、過濾液有機(jī)溶劑攪拌破碎提取法的一般方法是:首先在燒杯中加入濕菌體和丙酮,磁力攪拌器攪拌,離心后倒取上清液,然后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50℃濃縮上清液,繼而加入石油醚或正己烷萃取,再將萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至濃稠液,最后加入無水乙醇,放人冰箱冷凍,析出膽固醇等雜質(zhì),過濾回收濾液。選擇最佳的攪拌時(shí)間是有機(jī)溶劑攪拌破碎提取法的關(guān)鍵,攪拌時(shí)間過短,細(xì)胞沒有充分破碎,細(xì)胞內(nèi)的輔酶Q12.2氧化酶q的制備研磨破碎提取法的一般方法是:首先取濕菌體于研缽中,加入少量石英砂,丙酮和抗氧化劑迅速進(jìn)行研磨,研磨一段時(shí)間后離心,離心后倒取上清液,然后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50℃濃縮上清液,繼而加入石油醚或正己烷萃取,再將萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至濃稠液,最后加入無水乙醇,放人冰箱冷凍,析出膽固醇等雜質(zhì),過濾回收濾液。輔酶Q10的溶出量受研磨時(shí)間影響明顯。研磨時(shí)間10min～20min,輔酶Q10產(chǎn)量相對較高,過度研磨容易造成輔酶Q10氧化和損失,因此要在研磨前加入一定量的抗氧化劑。由于人工研磨用力不均勻,因此細(xì)胞破碎效果欠佳。劉玲等2.3超聲波破碎提取法超聲波破碎提取法的一般方法是:首先在濕菌體中加入丙酮,配制為菌懸液,然后在冰浴條件下使用超聲波細(xì)胞破碎儀破碎菌體,選取一定的超聲波破碎頻率,功率,超聲間隙時(shí)間以及超聲總時(shí)間,最后離心、提取。李聚海等雖然超聲波破碎提取法破碎菌體細(xì)胞壁效果好,但其設(shè)備昂貴,在處理過程中會(huì)大量產(chǎn)熱,要使用冰水冷卻,因而提取成本較高。而且超聲波在水中傳遞損失,距離超聲波發(fā)生器(噴頭)距離越遠(yuǎn),單位面積得到的能量也越少,因此每次的處理量相當(dāng)少,僅為幾十毫升。為進(jìn)一步優(yōu)化超聲破碎提取法,提高輔酶Q2.3.1超聲破碎提取法溶菌酶是一類專門作用于微生物細(xì)胞壁的水解酶,其酶解條件為:pH值7.2的0.2mol·L-溶菌酶酶解輔助超聲破碎提取法的一般方法是:首先在相應(yīng)的條件下加入溶菌酶,振蕩一定時(shí)間后離心,然后加入丙酮,使用超聲細(xì)胞破碎儀對其進(jìn)行破碎,棄去上清液,所得菌體加入石油醚,萃取2～3次,取上清液水洗至中性,脫水、減壓濃縮,最后用無水乙醇溶解。許芳等2.3.2超聲波細(xì)胞破碎法凍融輔助超聲破碎提取法的一般方法是:首先將菌體放入冰箱冷凍一定時(shí)間,然后加入丙酮,使用超聲波細(xì)胞破碎儀對其進(jìn)行破碎,棄去上清液,所得菌體加入石油醚,萃取2次,取上清液水洗至中性,脫水、減壓濃縮,最后用無水乙醇溶解。凍融輔助超聲破碎提取法不僅可以有效提高輔酶Q2.3.3超聲法提取焦性無水皂化輔助超聲破碎提取法的一般方法是:首先取菌體,加入一定比例焦性沒食子酸,攪拌均勻,再加入一定濃度氫氧化鈉-乙醇水溶液攪拌,超聲一定時(shí)間,迅速冷卻