腫瘤單克隆抗體的制備

人源化單克隆抗體Byhyglixgroup人源化單克隆抗體是什么？分類(lèi)方法：人源化抗體就是指抗體的可變區(qū)部分（即Vh和Vl區(qū)）或抗體所有全部由人類(lèi)抗體基因所編碼。人源化抗體可以大大減少異源抗體對(duì)人類(lèi)機(jī)體造成的免疫副反應(yīng)人源化抗體包括嵌合抗體、移植抗體和全人源化抗體等幾類(lèi)。基因工程抗體目的：保留抗體的抗原結(jié)合能力、易于大規(guī)模生產(chǎn)、減小鼠源性成分，增加人源化，可用于臨床?；驹恚航柚诨蚬こ淌侄危瑢⒕幋aAb的重輕鏈可變區(qū)基因重組到真核或原核表達(dá)載體上并進(jìn)行表達(dá)。國(guó)外市場(chǎng)情況：?jiǎn)慰寺】贵w，90年代后期上市以來(lái)，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)，終于在某些疾病的治療上取得突破。抗體進(jìn)入臨床研究，其中16個(gè)已進(jìn)入市場(chǎng)，2002年銷(xiāo)售額達(dá)29億美元，預(yù)計(jì)2005年將達(dá)近90億美元。根據(jù)商業(yè)通訊公司預(yù)測(cè)，2002年全球治療與診斷用抗體市場(chǎng)為73億美元，預(yù)計(jì)將以每年16.6%的平均速度增長(zhǎng)，到2007年可達(dá)到157億美元。2001年診斷用抗體市場(chǎng)為4.41億美元。人源化單克隆抗體的臨床應(yīng)用在腫瘤治療方面的應(yīng)用在器官移植中的應(yīng)用在自身免疫性疾病方面的應(yīng)用未來(lái)發(fā)展方向目前，抗體人源化方法還在不斷發(fā)展和晚上，目標(biāo)是提高抗體親和力、降低抗體異原性，同時(shí)兼顧抗體的免疫活化作用。另外，針對(duì)不同的異源抗體。選擇合適的人源化途徑構(gòu)建更適合于臨床應(yīng)用的人源化抗體，將為新藥的開(kāi)發(fā)和一些頑固的治療開(kāi)辟新的途徑。恒定區(qū)人源化可變區(qū)人源化利用抗體庫(kù)技術(shù)獲得完全人源序列發(fā)展嵌合抗體選擇或剪切效

應(yīng)基因減少了HAMS……CDR移植Ab1、模板替換2、表面重塑3、補(bǔ)償變換4、定位保留全人源化抗體恒定區(qū)人源化--鼠/人嵌合抗體（chimericantibody）表達(dá)產(chǎn)物——嵌合抗體的純化

以A蛋白包被的小珠通過(guò)吸附和解吸過(guò)程來(lái)純化抗體,這種A蛋白可牢固地結(jié)合于免疫球蛋白重鏈Fc段第二和第三恒定區(qū)。并非所有免疫球蛋白對(duì)A蛋白的親和力都相同在純化抗體前,必須采用商品化的抗Fc段同種型免疫學(xué)試劑先行測(cè)定其重鏈所屬的類(lèi)型,如抗體屬于對(duì)A蛋白親和力弱的一類(lèi)(如人的IgG3),就必須使用其他方法。嵌合抗體檢測(cè)Western印跡法是檢測(cè)抗體的常用方法。此種技術(shù)是把電泳分離的蛋白組分從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體,并以針對(duì)特定的氨基酸序列的特異性試劑檢測(cè)之。對(duì)于嵌合抗體來(lái)說(shuō),通常使用的探針為抗體。完全人源性單克隆抗體1，篩腫瘤特異性抗原：（1）利用T細(xì)胞篩內(nèi)源性抗原（2）利用Hu-PBL-SciD小鼠篩抗體結(jié)合抗原,2，抗體制備及構(gòu)建抗體庫(kù)技術(shù)：（1）合成抗體庫(kù)技術(shù)及小鼠轉(zhuǎn)基因技術(shù)（2）核糖體展示技術(shù)（3）噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)3，篩選技術(shù)及表達(dá)（1）親和篩選（immobilizedpanning)（2）捕獲法(capturepanning)（3）完整細(xì)胞淘洗(wholecellpanning)

篩選腫瘤抗原

1，利用T細(xì)胞篩選抗原

Pre-T細(xì)胞

混合培養(yǎng)以誘導(dǎo)CTL CTL細(xì)胞腫瘤細(xì)胞

殺傷與否

CDNA文庫(kù)

轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

2，SCID小鼠篩選抗原SCID小鼠腫瘤細(xì)胞構(gòu)建HU-PBL-SCID小鼠能否免疫應(yīng)答淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞CDNA文庫(kù)免疫抗原轉(zhuǎn)染表達(dá)MHCI類(lèi)的靶細(xì)胞特異抗體制備及

1，合成抗體庫(kù)及小鼠轉(zhuǎn)基因技術(shù)（一）合成抗體(Syntheticantibodylibrary)。1，在對(duì)人或鼠抗體序列和主體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上,合成多條VH和VL基因,用來(lái)替代所有的抗體類(lèi)別和結(jié)構(gòu),組成多個(gè)總抗體