中藥制劑的鑒別技術-中藥制劑的理化鑒別

中藥制劑的鑒別技術－分光光度鑒別法鑒別中藥制劑目錄

基礎知識1必備知識2拓展知識3紫外-可見分光光度法：中藥制劑中有些化學成分在可見紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜，在一定條件下利用這些吸收光譜的特征，以鑒別制劑中的某些成分?；A知識一、紫外-可見分光光度法測定方法規(guī)定吸收波長法對照品對比法規(guī)定吸收波長和吸光度比值法多溶劑光譜法必備知識二、注意事項：分光光度計應進行準確度檢定后使用；使用配對吸收池，若使用不配對吸收池，應在所測量波長范圍內進行基線校正；設定的參數(shù)應合理；測定時應將樣品室蓋關嚴。必備知識紫外-可見分光光度法實例：1、規(guī)定吸收波長法：樣品經適當處理后，測定吸收光譜，在一定波長處有最大吸收。復方丹參滴丸中丹參的鑒別：在283nm的波長處有最大吸收。拓展知識紫外-可見分光光度法實例：2、對照品對比法：取對照品或對照藥材及供試品經處理后，制成對照品及供試品溶液，分別測定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。大山楂丸的紫外光譜鑒定：樣品與山楂對照品在280±2nm處皆有最大吸收，在254±4nm處皆有最小吸收。大山楂丸的紫外光譜拓展知識中藥制劑的鑒別技術－高效液相色譜法鑒別中藥制劑目錄

基礎知識1必備知識2拓展知識3

高效液相色譜法（HPLC）主要是比較化合物與對照品在同一色譜條件下，供試品應呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，對樣品進行定性鑒別。特點：高速、高效、高靈敏度、應用廣泛；較少單獨用于定性鑒別，多與含量測定結合進行；指紋圖譜鑒別正在逐漸增多?；A知識利用保留值作為定性參數(shù)；利用在樣品中加入對照品，通過峰值增高來確認；利用LC-MS聯(lián)用儀，通過被分離物的質譜圖與譜庫的譜圖對比來定性；利用二極管陣列檢測器給出UV光譜與對照品相比較，結合保留時間來確認。一、高效液相色譜鑒別法方法必備知識高效液相色譜儀十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（C18）微孔濾膜（0.45μm）紫外檢測器等流動相（甲醇-水、乙腈-水等）二、儀器與試劑必備知識開機前準備：根據(jù)需要選擇合適的色譜柱，在容器中放入已濾過脫氣好的流動相，把吸濾頭放入容器中開機：打開儀器的電源開關，儀器自檢通過后，打開色譜工作站設置儀器參數(shù)樣品分析與數(shù)據(jù)采集：待色譜柱平衡，基線穩(wěn)定后，設置好樣品信息，開始樣品分析與數(shù)據(jù)采集報告輸出關機：沖洗色譜柱，排出流路中可能存有的緩沖液，并用水沖洗泵的柱塞桿；泵停止，退出工作站，關閉儀器電源，在記錄本上記錄使用情況三、操作方法必備知識進樣前，色譜柱應用流動相充分沖洗平衡，待壓力基線穩(wěn)定后方可進樣。流動相需經脫氣用微孔濾膜（0.45μm）濾過，才可使用，打開沖洗鍵進行泵排氣。測試溶液需用微孔濾膜（0.45μm）濾過。使用鍵合硅膠柱，流動相的pH應控制在2～8，否則色譜柱易損壞。操作完畢，應先后用水和甲醇充分沖洗液路系統(tǒng)，尤其是使用了含鹽的流動相，更應充分沖洗。四、注意事項必備知識比較供試品與對照品色譜圖，供試品呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，則判斷為符合藥品標準規(guī)定。五、檢驗記錄與結果判斷必備知識液相色譜鑒別法實例：四君子丸中甘草酸和六味地黃丸中芍藥苷的鑒別甘草酸HPLC圖芍藥苷HPLC圖拓展知識

HPLC主要是比較化合物與對照品在特定的色譜柱上的色譜行為，采用保留時間比較的方法。一般較少單獨用于定性鑒別，多與含量測定結合進行。拓展知識中藥制劑的鑒別技術－化學反應法鑒別中藥制劑目錄

基礎知識1必備知識2拓展知識3

中藥制劑的理化鑒別是利用制劑所含化學成分的理化性質，如通過化學反應法、光譜法和色譜法等分析方法和技術檢測有關成分是否存在，從而判斷制劑的真?zhèn)?。應用注意?/p>

1.處方分析，首選主藥、輔藥、貴重藥和毒性藥作為鑒別重點；2.排除干擾，可采用陰性和陽性對照?；A知識化學反應鑒別法是利用化學試劑與制劑中的指標成分發(fā)生化學反應，根據(jù)所產生的顏色、沉淀或氣體等現(xiàn)象，來判斷某些藥味或成分的有無，并以此鑒別制劑真?zhèn)蔚姆椒ā；A知識一、操作方法1、供試液的制備固體制劑：適當?shù)娜軇┨崛?；液體制劑：直接取樣檢識或經有機溶劑萃取分離后檢測。2、操作方法試管反應：取供試液于試管中，加入試劑或試藥進行反應；蒸發(fā)皿或坩堝：供試液置蒸發(fā)皿或坩堝中，揮去溶劑，滴加試劑于殘留物進行檢識。必備知識二、注意事項避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑；慎重使用專屬性不高的分析反應：如泡沫反應、三氯化鐵顯色反應；對樣品進行分離、精制：除去干擾分析反應的物質，借此改善鑒別方法的專屬性；采用陰性及陽性對照方式，對擬定的鑒別方法進行反復驗證：防止出現(xiàn)假陽性。必備知識實例——大山楂丸的化學鑒別操作(鑒別山楂的黃酮類成分)本品由山楂、六神曲（麩炒）、麥芽（炒）制成的大蜜丸。取本品9g，切碎，加乙醇40ml，置水浴上加熱回流10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，加熱使溶解，加正丁醇15ml振搖提取，分取正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，濾過。取濾液1ml，加少量鎂粉與鹽酸2～3滴，加熱4～5分鐘后，即顯橙紅色。拓展知識中藥制劑的鑒別技術－氣相色譜法鑒別中藥制劑目錄

基礎知識1必備知識2拓展知識3

適用范圍：含有揮發(fā)油或揮發(fā)性成分的制劑；大分子或不揮發(fā)性成分可分解或制成衍生物。

原理：利用保留值進行鑒別，即在同一色譜條件下，供試品應呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，對樣品進行定性鑒別。基礎知識分別以試樣和標準物進樣分析——各自的色譜圖；對照：如果試樣中某峰的保留時間和標樣中某峰重合，則可初步確定試樣中含有該物質；通過在樣品中加入標準物，看試樣中哪個峰增加來確定。一、鑒別方法必備知識氣相色譜儀：載氣源（氫氣、氮氣或氦氣作為載氣）進樣系統(tǒng)色譜柱（填充柱或毛細管柱）柱溫箱檢測器（氫火焰離子化檢測器、電子捕獲檢測器等）溫度控制系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)二、儀器必備知識色譜系統(tǒng)適用性試驗：藥品標準規(guī)定的理論板數(shù)（n）分離度（R）應大于1.5信噪比應不小于10（定量測定時）或不小于3（定性測定時）峰面積相對標準偏差（RSD）或平均校正因子相對標準偏差（RSD）均不應大于2.0%除另有規(guī)定外，拖尾因子（T）應在0.95～1.05之間。配制對照品和供試品溶液，在同一色譜條件下，分別進樣，繪制相應的色譜圖。三、操作方法必備知識四、測定注意事項先通載氣，再加熱；進樣時，注射器操作應快速；一般色譜圖應于30分鐘內記錄完畢；測試完畢，先關閉各加熱電源以及氫氣和空氣開關，待檢測器和柱箱溫度降100℃以下時，關閉載氣。必備知識五、檢驗記錄與結果判斷必備知識五、檢驗記錄與結果判斷比較供試品與對照品色譜圖，供試品呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰，則判斷為符合藥品標準規(guī)定。氣相色譜鑒別法實例——安宮牛黃丸中麝香的鑒別

【處方】牛黃、水牛角濃縮粉、麝香、珍珠等11味藥材制備而成【鑒別方法】供試品：環(huán)己烷提取液對照品：麝香酮固定相：苯基（50％）甲基硅酮（OV-17）為，涂布濃度為9％柱長：2m柱溫：210℃拓展知識中藥制劑的鑒別技術－升華法鑒別中藥制劑

基礎知識1必備知識2拓展知識3一、升華鑒別法概述

利用中藥制劑中所含的某些化學成分，在一定溫度下能升華的性質，獲得升華物，根據(jù)升華物的理化性質進行鑒別的方法。二、升華物的鑒別方法主要有利用顯微鏡觀察晶型；

可見光下觀察顏色；紫外燈下觀察熒光；加入合適的試液與其發(fā)生顯色反應或熒光反應?；A知識微量升華法：金屬片上放一金屬圈，圈內放置藥材粉末，圈上覆蓋載玻片，在石棉網(wǎng)下用酒精燈緩緩加熱，至載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉后，置顯微鏡下觀察結晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應。微量升華裝置必備知識升華鑒別法注意事項：制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進行鑒定；樣品粉末用量一般約0.5g，過少不易產生足夠量的升華物；可在載玻片上滴加少量水降溫，促使升華物凝集析出；

無金屬片，可用載玻片代替。必備知識

升華鑒別法實例——牛黃解毒片中冰片的鑒別

【處方】人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草。【鑒別方法】取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新制的l％香草醛-硫酸溶液1～2滴，液邊緣漸顯玫瑰紅色。冰片升華物冰片升華物顯微觀冰片升華物顯色拓展知識作者：八音魔琴中藥制劑的化學反應鑒別●中藥制劑檢查●中藥制劑鑒別●中藥制劑含量測定貳壹目錄基礎知識方法精誠制藥

本草濟民概述中藥制劑的鑒別是利用一定的方法來確定中藥制劑中原料藥的組成，從而判斷該制劑的真?zhèn)?。主要內容包括性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別?！吨袊幍洹犯髌贩N項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物，用以證實是否為其所標示的藥物。中藥制劑的理化鑒別是利用制劑所含化學成分的理化性質，如通過化學反應法、光譜法和色譜法等分析方法和技術檢測有關成分是否存在，從而判斷制劑的真?zhèn)巍?一)、概念一、基礎知識（二）應用注意1處方分析，首選主藥、輔藥、貴重藥和毒性藥作為鑒別重點；2排除干擾，可采用陰性和陽性對照。一、基礎知識化學反應鑒別法是利用化學試劑與制劑中的指標成分發(fā)生化學反應，根據(jù)所產生的顏色、沉淀或氣體等現(xiàn)象，來判斷某些藥味或成分的有無，并以此鑒別制劑真?zhèn)蔚姆椒ā?.概述二、方法2.操作方法二、方法（1）供試液的制備固體制劑：適當?shù)娜軇┨崛。灰后w制劑：直接取樣檢識或經有機溶劑萃取分離后檢測。（2）操作方法試管反應：取供試液于試管中，加入試劑或試藥進行反應；蒸發(fā)皿或坩堝：供試液置蒸發(fā)皿或坩堝中，揮去溶劑，滴加試劑于殘留物進行檢識。避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑；慎重使用專屬性不高的分析反應：如泡沫反應、三氯化鐵顯色反應；對樣品進行分離、精制：除去干擾分析反應的物質，借此改善鑒別方法的專屬性；采用陰性及陽性對照方式，對擬定的鑒別方法進行反復驗證：防止出現(xiàn)假3.注意事項二、方法本品由山楂、六神曲（麩炒）、麥芽（炒）制成的大蜜丸。取本品9g，切碎，加乙醇40ml，置水浴上加熱回流10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，加熱使溶解，加正丁醇15ml振搖提取，分取正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，濾過。取濾液1ml，加少量鎂粉與鹽酸2～3滴，加熱4～5分鐘后，即顯橙紅色。4.實例大山楂丸的化學鑒別操作(鑒別山楂的黃酮類成分)二、方法中藥制劑的升華鑒別利用中藥制劑中所含的某些化學成分，在一定溫度下能升華的性質，獲得升華物，根據(jù)升華物的理化性質進行鑒別的方法。一、升華鑒別法概述升華物的鑒別方法主要有：利用顯微鏡觀察晶型；可見光下觀察顏色；紫外燈下觀察熒光；加入合適的試液與其發(fā)生顯色反應或熒光反應。操作方法微量升華法、坩堝法或蒸發(fā)皿法。微量升華法：金屬片上放一金屬圈，圈內放置藥材粉末，上覆蓋載玻片，在石棉網(wǎng)下用酒精燈緩緩加熱，至載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉后，置顯微鏡下觀察結晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應。微量升華裝置二、方法制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進行鑒定；樣品粉末用量一般約0.5g，過少不易產生足夠量的升華物；可在載玻片上滴加少量水降溫，促使升華物凝集析出；無金屬片，可用載玻片代替。二、方法

升華鑒別法注意事項：升華鑒別法實例——牛黃解毒片中冰片的鑒別【處方】人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草?！捐b別方法】取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新制的l％香草醛-硫酸溶液1～2滴，液邊緣漸顯玫瑰紅色。冰片升華物冰片升華物顯微觀冰片升華物顯色二、方法中藥制劑的熒光鑒別熒光鑒別法是利用制劑中某些成分在可見光或紫外光照射下可發(fā)射熒光或經其他方法處理后產生熒光的特性進行中藥制劑鑒別的方法。一、概述取制劑的提取液點在濾紙上或加入蒸發(fā)皿中，置紫外光燈下觀察所產生的熒光。必要時可在供試品中加酸、堿或其他試劑，再觀察熒光及其變化。UV二、熒光鑒別操作方法熒光強度較弱，故一般需在暗室中觀察熒光；供試液一般用毛細管吸取，少量多次點在濾紙上，使斑點集中且具有一定濃度；紫外光對人的眼睛和皮膚有損傷，操作者應避免與紫外光較長時間接觸；試驗時，一般將供試品置于紫外光燈下約10cm處觀察所產生的熒光。紫外光波長一般為365nm，如用254~265nm波長觀察熒光，應加以說明。操作注意事項二、熒光鑒別操作方法熒光鑒別法實例——安神補腦液的熒光鑒別【鑒別方法】取本品5ml，加氫氧化鈉試液2.5ml、鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強烈振搖2分鐘，放置使分層，溶液置紫外光燈（365nm）下觀察，正丁醇層顯藍色熒光，加酸使成酸性，熒光即消失，再加堿使成堿性，熒光又顯出。二、熒光鑒別操作方法操作注意事項中藥制劑的薄層色譜鑒別法薄層色譜法是將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層，在同一塊薄層板上點加供試品和對照品，在相同條件下展開，顯色劑顯色，檢出色譜斑點，對比供試品與對照品的色譜圖進行定性鑒別。一、概述儀器與材料二、薄層色譜鑒別法方法涂布器點樣器展開箱顯色與檢測儀器薄層板及固定相（1）薄層板具有一定機械強度、化學惰性、耐一定溫度、表面平整、厚度均勻，價格合理，常用為玻璃板。玻璃板的常用規(guī)格：5×20cm、10×20cm、20×20cm，要求光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥。儀器與材料二、薄層色譜鑒別法方法硅膠：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶酸性；氧化鋁：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶堿性；硅藻土：中性吸附劑；纖維素：液-液分配色譜擔體（水為固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有機薄層材料。二、薄層色譜鑒別法方法（2）固定相硅膠G(含粘合劑煅石膏)，GF254(含254nm熒光劑)，硅膠H(不含粘合劑)，硅膠HF254二、薄層色譜鑒別法方法（3）涂布器有手工、半自動、全自動薄層涂布器常用微升毛細管或手動、半自動、全自動點樣器微升毛細管全自動點樣器手動點樣器二、薄層色譜鑒別法方法（4）點樣器材上行展開可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時須能密閉；水平展開用專用的水平展開缸。二、薄層色譜鑒別法方法（5）展開箱顯色有噴霧法及浸漬法噴霧瓶薄層色譜數(shù)碼相機成像系統(tǒng)二、薄層色譜鑒別法方法（6）顯色與檢測儀器薄層色譜鑒別法操作方法二、薄層色譜鑒別法方法制板供試液及對照液的制備點樣展開顯色與檢視

2、操作方法（1）制板鋪制薄層板二、薄層色譜鑒別法方法薄層色譜鑒別法操作方法市售薄層板：臨用前，110℃活化30min聚酰胺薄膜不用活化自制薄層板一份固定相三份水（或含有黏合劑的水溶液）研磨混勻涂布器自然干燥用前活化二、薄層色譜鑒別法方法2、操作方法（2）點樣注意：點樣時勿損傷薄層表面展開劑的制備：新鮮配制展開：點樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點約5mm，展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm預吸附中展開中薄層色譜鑒別法操作方法2、操作方法（3）展開噴霧顯色法熒光顯色法薄層色譜鑒別法操作方法2、操作方法（4）顯色與檢視顯色：噴霧法或浸漬法熒光淬滅法的GF254薄層板日光檢視熒光淬滅斑點紫外光365nm或254nm下檢視薄層色譜鑒別法操作方法2、操作方法（4）顯色與檢視制備薄層板應清潔干燥后制板；3、薄層色譜鑒別法注意事項預制薄層板選擇符合要求的產品；使用新鮮溶劑配制展開劑；配制多元展開劑時，各種溶劑應分別量取后再混合。薄層色譜鑒別法實例：

首烏丸的薄層色譜鑒別提取方法：甲醇提取固定相：硅膠G+0.5%NaOH展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1、大黃素2、大黃素甲醚3-4、何首烏對照藥材5、首烏丸首烏丸的薄層色譜3、薄層色譜鑒別法注意事項中藥制劑的分光光度鑒別法紫外-可見分光光度法中藥制劑中有些化學成分在可見紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜，在一定條件下利用這些吸收光譜的特征，以鑒別制劑中的某些成分。1、概述紫外-可見分光光度法2、紫外-可見分光光度法測定方法規(guī)定吸收波長法對照品對比法規(guī)定吸收波長和吸光度比值法多溶劑光譜法紫外-可見分光光度法注意事項：分光光度計應進行準確度檢定后使用；使用配對吸收池，若使用不配對吸收池，應在所測量波長范圍內進行基線校正；設定的參數(shù)應合理；測定時應將樣品室蓋關嚴。紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法實例：（1）規(guī)定吸收波長法：樣品經適當處理后，測定吸收光譜，在一定波長處有最大吸收。復方丹參滴丸中丹參的鑒別：在283nm的波長處有最大吸收。復方丹參滴丸紫外光譜圖紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法實例：（2）對照品對比法：取對照品或對照藥材及供試品經處理后，制成對照品及供試品溶液，分別測定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。大山楂丸的紫外光譜鑒定：樣品與山楂對照品在280±2nm處皆有最大吸收，在254±4nm處皆有最小吸收