馬鈴薯新品種莊薯3號脫毒快繁技術(shù)

馬鈴薯新品種莊薯3號脫毒快繁技術(shù)

馬蹄脫毒技術(shù)的普及和應(yīng)用，解決了長期以來由甘薯生產(chǎn)的甘薯的病毒性退化問題。為了大面積推廣馬鈴薯新品種莊薯3號,解決莊薯3號品種保純不退化問題,我們經(jīng)過對莊薯3號優(yōu)良品種進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)及脫毒技術(shù)研究,總結(jié)出了馬鈴薯新品種莊薯3號脫毒快繁技術(shù),為莊薯3號脫毒快繁提供技術(shù)支撐?，F(xiàn)就馬鈴薯新品種莊薯3號脫毒快繁技術(shù)介紹如下。1培養(yǎng)基制備1.1培養(yǎng)基的制備按照每升培養(yǎng)基稱取40gMS全脫水培養(yǎng)基粉劑(河北科技大學(xué)生物工程學(xué)院研制生產(chǎn))和0.50mg6-BA的比例配制培養(yǎng)基,每袋500g可加澄清的熱開水12.50L。1.2培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基充分?jǐn)嚭腿芙夂?趁熱迅速進(jìn)行分裝,一般每瓶分裝50mL,每升分裝20瓶,然后立即加封口材料,用線繩扎緊。1.3滅菌桶、放氣閥采用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。操作程序?yàn)?加水→裝桶→密封→預(yù)置滅菌溫度→預(yù)置滅菌時(shí)間→加熱(排放冷空氣)→滅菌→結(jié)束。具體方法為:滅菌前先往鍋內(nèi)加水至水位線,放入滅菌桶,將待滅菌培養(yǎng)基裝滿桶,蓋上鍋蓋,對角線旋緊后,設(shè)置滅菌時(shí)間15～20min,設(shè)置滅菌溫度121℃以上,打開電源,打開放氣閥,開始放冷氣,待有急促氣流從放氣閥溢出時(shí),放氣結(jié)束,關(guān)閉放氣閥。繼續(xù)加熱,壓力-溫度指針開始上升,至預(yù)置滅菌溫度時(shí)計(jì)時(shí)器自動計(jì)時(shí),開始滅菌,達(dá)到預(yù)置滅菌時(shí)間后發(fā)出蜂鳴聲,滅菌結(jié)束,關(guān)閉電源,待自動降至“O”時(shí),打開鍋蓋,取出培養(yǎng)基,自然冷卻凝固。2脫毒治療2.1播種選擇健康的整薯在38～40℃恒溫條件下處理10d,室內(nèi)播種,待芽長至4～5cm長時(shí),剪取1～2cm長的壯芽。2.2葉原基的制備將芽置于自來水下沖洗30min,用75%酒精沖洗30s,無菌水沖洗3次,在超凈操作臺上用0.10%HgCl浸泡12min,無菌水沖洗6次,用濾紙吸干水分,在解剖鏡下剝離至露出圓滑生長點(diǎn),切取帶1～2個葉原基的莖尖分生組織,接于制備好的MS+6-BA0.50mg/L的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。3培養(yǎng)3.1莖尖組織的處理接種前清洗地面,用75%酒精擦試臺面與臺頂,將接種培養(yǎng)基解繩放在臺頂上,隨接隨取,將處理好的莖尖組織放于臺面上。打開風(fēng)機(jī)開始吹風(fēng),同時(shí)灼燒支架剪刀和攝子等接種工具10min,放在臺面上冷卻,然后拖凈地面,打開室內(nèi)紫外燈照射10min,進(jìn)行室內(nèi)消毒。3.2莖段的預(yù)處理準(zhǔn)備工作就緒后,用肥皂洗凈手,進(jìn)入接種室,點(diǎn)燃酒精燈,用70%酒精擦試雙手后開始接種。灼燒接種工具后,用攝子將莖段插入制備好的培養(yǎng)基上,然后封瓶綁扎,注明品種、處理和日期、工作人員姓名。接種時(shí)工作人員的工作服要經(jīng)常保持干凈,并戴上口罩、衛(wèi)生帽進(jìn)行接種,接種期間嚴(yán)禁講話,禁止一切外出活動,以防雜菌帶入接種室。待莖尖組織形成伸長的莖段,葉原基形成可見的小葉時(shí),轉(zhuǎn)入無激素的普通培養(yǎng)基中,莖尖繼續(xù)伸長并形成根系,最后發(fā)育成完整植株,進(jìn)行切段擴(kuò)大繁殖。3.3葉小葉小株dms把接種好的瓶子放在溫度22～26℃,光照1000～3000lx,每天光照16h,培養(yǎng)30～40d后,莖尖轉(zhuǎn)綠,伸長成莖和小葉,可轉(zhuǎn)入普通MS培養(yǎng)瓶內(nèi),經(jīng)100～150d可發(fā)育成4～5個葉的小植株。小苗長至6～7cm時(shí),一個植株編一個號進(jìn)行轉(zhuǎn)接,轉(zhuǎn)接一定數(shù)量后,同一編號瓶苗保留一部分,另一部分進(jìn)行病毒檢測。4指示植物鑒定可采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),采用雙抗體夾心法,檢測PVX、PVY、PVS、PVM、PVA、PLPV病毒。我們用白花刺果蔓陀羅、千日紅、番茄幼苗、心葉煙等指示植物作鑒定。方法為:(1)將指示植物種在花盆中,置于溫室內(nèi),用防蟲網(wǎng)罩罩住,在幼苗期接種。(2)取出瓶內(nèi)植株,剪去根部,放入研缽,同時(shí)加入適量1%磷酸二氫鉀緩沖液,研磨至植株組織充分破碎,用紗布過濾制成接種汁液。(3)用400～500目金剛砂作為磨料彈于指示植物嫩葉上,用棉球棒蘸取接種汁液在葉面上輕輕摩擦,造成微傷接種,清水沖洗掉殘留金剛砂和汁液。(4)7d后觀察葉片,如果出現(xiàn)枯斑,說明該組瓶苗帶有病毒應(yīng)該剔除,如果葉面沒有病斑出現(xiàn),說明該組瓶苗不帶病毒,可以擴(kuò)大繁殖,應(yīng)用于生產(chǎn)。5莊托3號脫毒苗全陽光培養(yǎng)5.1平均光照強(qiáng)度強(qiáng)光照有利于脫毒瓶苗的生長,在一定光照強(qiáng)度范圍內(nèi),光照愈強(qiáng),瓶苗生長愈健壯,移栽或扦插成活率愈高。日光培養(yǎng)溫室(選用胖龍公司設(shè)計(jì)建造的五連棟溫室培養(yǎng))內(nèi)平均光照強(qiáng)度在夏季晴天中午可達(dá)到4.80萬lx左右。夏季高溫期,需在培養(yǎng)室頂覆蓋遮陽網(wǎng)來遮陽降溫,最好安裝便于拉動操作的遮陽網(wǎng),以便于在陰雨天氣拉開增加光照,而在秋冬、春季,培養(yǎng)室頂不必再用遮陽網(wǎng),其室內(nèi)光照強(qiáng)度晴天通常在1.20～4.20萬lx左右,完全可以滿足瓶苗對光照的要求。5.2人工誘導(dǎo)溫度過高由于溫室效應(yīng),日光溫室內(nèi)的溫度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于人工光照培養(yǎng)室,春秋季節(jié)比較適合瓶苗生長,夏季溫度過高,培養(yǎng)瓶內(nèi)高溫高濕易造成瓶內(nèi)植株氣生根大量生長,瓶苗過早老化,培養(yǎng)基過早變干,影響瓶苗的質(zhì)量,因此需要進(jìn)行人工