犬脊髓損傷的組織病理學(xué)觀察

犬脊髓損傷的組織病理學(xué)觀察摘要目前，國內(nèi)獸醫(yī)一般根據(jù)以下癥狀做出腰椎間盤突出的初步診斷：尾巴下垂，背部拱起，不愿動(dòng)，約束不嚴(yán)，步幅不穩(wěn)，后肢不靈活，食欲欠佳，觸診局部腰椎敏感，疼痛反應(yīng)可，腹肌緊張板硬，個(gè)別狗頭后仰。但無法準(zhǔn)確判斷脊髓損傷的確切程度。本研究的目的是比較病變脊髓與健康脊髓的組織病理學(xué)方面，了解椎間盤突出所致脊髓損傷的程度，并為研究的后期做好準(zhǔn)備。關(guān)鍵詞：犬脊髓損傷脊髓血流針刺式探頭激光多普勒監(jiān)測儀目錄TOC\o"1-3"\h\u1緒論 緒論1.1研究背景和意義急性脊髓損傷是一種高度致殘的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷性疾病，是目前世界上急診醫(yī)學(xué)，神經(jīng)外科，骨科和醫(yī)療修復(fù)領(lǐng)域最棘手的問題之一。目前，國內(nèi)獸醫(yī)一般根據(jù)以下癥狀做出腰椎間盤突出的初步診斷：尾巴下垂，背部拱起，不愿動(dòng)，約束不嚴(yán)，步幅不穩(wěn)，后肢不靈活，食欲欠佳，觸診局部腰椎敏感，疼痛反應(yīng)可，腹肌緊張板硬，個(gè)別狗頭后仰。但無法準(zhǔn)確判斷脊髓損傷的確切程度。中國現(xiàn)有的SCI患者保守估計(jì)約為100萬人，每年增加10000人。各種致SCI事故中存活并能被緊急送往急診室的患者死亡率為4.4%~16.7%。這些幸存者長期在急診醫(yī)院和康復(fù)中心住院治療。雖然死亡率顯著下降，但大多數(shù)SCI病例留下了生活質(zhì)量差或無法自理的后遺癥。人們需要花費(fèi)大量的人力、物力和金錢在醫(yī)療和康復(fù)上。因此，對SCI的研究迫在眉睫。本研究的目的是比較病變脊髓與健康脊髓的組織病理學(xué)方面，了解椎間盤突出所致脊髓損傷的程度，并為研究的后期做好準(zhǔn)備。1.2研究內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)研究旨在利用針刺式探頭激光多普勒（NeedleProbe—LaserDopplerFlowmetry，NP—LDF）探討一種實(shí)時(shí)監(jiān)測不同區(qū)域脊髓血流的方法，并觀察沖擊脊髓損傷急性期脊髓血流的規(guī)律，希望為臨床急診更多的治療策略提供初步的理論依據(jù)。2犬脊髓損傷的組織病理學(xué)觀察2.1材料和方法2.1.1材料EQ\o\ac(○,1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)8只1～2歲實(shí)驗(yàn)用比格犬，體重10～12.5kg，雌性，所有動(dòng)物由附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供并飼養(yǎng)。室內(nèi)溫度約為25℃左右，空氣濕度40%～50%。實(shí)施手術(shù)前先進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。EQ\o\ac(○,2)主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺、嚴(yán)格無菌脊柱外科手術(shù)常規(guī)器械1套，顯微外科器械1套，F(xiàn)orceFX-8C型高頻電刀，由中國人民解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。（2）RM-6008型8道生理記錄儀日本光電（3）數(shù)控電機(jī)撞擊裝置：工作原理見圖2-1301醫(yī)院骨科研究所提供（4）Moor-VMS激光多普勒血流監(jiān)測儀英國Moor公司（5）針刺式單光纖維探頭英國Moor公司（6）Cascade16通道術(shù)中電生理監(jiān)護(hù)儀CadwellLaboratories,Inc（7）BL-1型手術(shù)放大鏡上海精密儀器儀表有限公司（8）冰凍切片機(jī)、光學(xué)顯微鏡附屬醫(yī)院病理科（9）異丙酚西安楊森制藥（10）15%異氟醚上海雅培公司（11）青霉素哈藥集團(tuán)制藥總廠2.1.2方法EQ\o\ac(○,1)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)中，8只比格犬根據(jù)隨機(jī)數(shù)表隨機(jī)分為兩組：對照組2只和SCI組6只。成功模擬SCI組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。圖2-1：數(shù)控電機(jī)撞擊裝置制造創(chuàng)傷性脊髓損傷模型工作原理示意EQ\o\ac(○,2)手術(shù)所有動(dòng)物術(shù)前8～12小時(shí)禁食水，做好背部及腹部皮膚準(zhǔn)備。每只動(dòng)物稱重6mg/kg靜脈注射異丙酚進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉。采用15%異氟醚混合濃度約1.0～1.5l/min氧氣進(jìn)行氣管插管吸入麻醉。監(jiān)測狗的肛門溫度、經(jīng)皮血氧飽和度（鉗夾狗舌）。打開左股靜脈通路進(jìn)行術(shù)中補(bǔ)液，右股動(dòng)脈插管用壓力傳感器，連接RM-60088通道生理記錄儀記錄平均動(dòng)脈壓，心率等。由于手術(shù)時(shí)間長，整個(gè)手術(shù)過程，動(dòng)物呼吸機(jī)輔助呼吸，頻率約為15次/min。麻醉成功后，動(dòng)物的溫度保持在36.5°C至37.5°C左右，使用保溫毯。高頻電刀負(fù)極板粘貼至動(dòng)物腹部。取俯臥位并將四肢固定在動(dòng)物手術(shù)臺上，背部用毛巾消毒，選擇胸廓12-胸廓13（T12-13）為陽性中心，做出長度約8cm后的正中切口，依次切開皮膚，淺筋膜及岡上韌帶，電刀止血，鈍性剝離雙側(cè)椎旁肌肉暴露棘突，雙側(cè)椎板及小關(guān)節(jié)。脊髓后部結(jié)構(gòu)用微椎板咬鉗切除，暴露硬膜外。暴露范圍約為1厘米上下在上關(guān)節(jié)過程的頂點(diǎn)在T13。清晰觀察脊髓邊緣和脊髓后正中線，確保直徑為6mm的CNC運(yùn)動(dòng)沖擊頭能通過（見圖2-2）。所有SCI組動(dòng)物均采用余潘峰實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行SCI建模。采用余潘豐法對數(shù)控電機(jī)的沖擊參數(shù)進(jìn)行了嚴(yán)重破壞，即沖擊速度為1.0m/s，沖擊深度為6mm，壓縮深度為6mm，壓縮時(shí)間為10min（1.0m/s，6mm，10min）（見圖2-3）。對照動(dòng)物未接受脊髓損傷治療。觀察脊髓血流指數(shù)后，閉合切口。EQ\o\ac(○,3)術(shù)后管理所有動(dòng)物清醒后，放入動(dòng)物飼養(yǎng)籠中。術(shù)后3天內(nèi)每只狗補(bǔ)充0.9%生理鹽水250ml/d，動(dòng)物每天進(jìn)行兩次膀胱按摩擠壓，幫助其排尿，防止尿路感染。必要時(shí)為有排尿困難的動(dòng)物留置導(dǎo)尿管。術(shù)后喂動(dòng)物少量食物，易消化為主，每隔1天給予蓖麻油，花生油等植物油10~20ml/次，幫助軟化糞便，保持肛門干燥。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中進(jìn)行下肢按摩以防止水腫。更換切口2次/1天，常規(guī)給予青霉素43106U肌注，每天1次，連續(xù)3d，預(yù)防切口感染。所有動(dòng)物使用丁丙諾啡（0.05mg/kg，2次/d）于術(shù)后48h內(nèi)肌肉注射止痛。EQ\o\ac(○,4)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測（1）SCBF監(jiān)測對SCI組動(dòng)物進(jìn)行脊髓暴露SCBF監(jiān)測，SCI后5min，SCI后60min，7d，3w；對照組動(dòng)物對SCI組動(dòng)物的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)測。SCBF監(jiān)測操作過程參考和預(yù)實(shí)驗(yàn)：使用直徑為0.46mm的單個(gè)光纖探頭固定在CNC沖擊裝置上，連接到Moor-VS激光多普勒流量監(jiān)測儀上。采用顯微手術(shù)器械，對硬腦膜和軟膜進(jìn)行順序切割。暴露范圍約0.5毫米上下在關(guān)節(jié)過程頂部的T13（見圖2-4）。啟動(dòng)運(yùn)動(dòng)，將探頭放置在脊髓中線（正中動(dòng)脈后）的右側(cè)，以避免后正中動(dòng)脈的小分支垂直進(jìn)入脊髓（見圖2-5），并刺入腹脊髓，直至不能穿透腹面硬膜外，確認(rèn)探針來源。固定靜止后，記錄血流值。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的犬脊髓不同區(qū)域的最佳測量深度，將探針向后退1mm，測量腹側(cè)白質(zhì)區(qū)血流；再向后退2mm，測量中心灰色區(qū)血流；最后向后退3mm，測量背側(cè)白質(zhì)區(qū)血流。測量完成后，取出探頭，縫合硬腦膜（見圖2-6）。圖2-2：術(shù)中暴露脊髓圖2-3：數(shù)控電機(jī)對脊髓進(jìn)行撞擊圖2-4：顯微外科器械依次切開圖2-5:NP-LDF刺入硬脊膜及軟脊膜脊髓進(jìn)行SCBF值監(jiān)測圖2-6：手術(shù)結(jié)束后對硬膜進(jìn)行縫合圖2-7：神經(jīng)電生理監(jiān)測（2）神經(jīng)電生理監(jiān)測兩組動(dòng)物術(shù)后1d、7d、3w的神經(jīng)電生理監(jiān)測包括：SEP和MEP。根據(jù)StephenJP等人報(bào)道的方法，使用級聯(lián)16通道術(shù)中電生理監(jiān)測儀對SEP進(jìn)行監(jiān)測，其中刺激電極嵌入犬后肢跟腱后皮下，記錄電極皮下埋在犬顱骨頂部，參考電極皮下埋在前肢接地。脈沖電壓刺激狗的脛后神經(jīng)，刺激標(biāo)準(zhǔn)：引起狗的后肢抖動(dòng)。參數(shù)控制：強(qiáng)度：5mA恒流，頻率：3Hz，模式：P-N-P，疊加刺激300次后開始記錄波形。根據(jù)Wilson-Holden和其他報(bào)告方法。記錄電極嵌入C3-C4水平皮下；刺激電極嵌入雙側(cè)腓腸肌后部，強(qiáng)度：50V，記錄波形后信號疊加：300次；參考電極埋于下跟腱位置（見圖2-7）。（3）TSCIS評估犬行為學(xué)根據(jù)GwendolynJ所闡述的TSCIS所有兩組動(dòng)物均在術(shù)后1d、7d和3w上進(jìn)行評級。兩名實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟幻鞯挠^察者和各組根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分（見表2-1）。平均值重復(fù)三次。表2-1：犬的TSCIS評分標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容評分步態(tài)肢體未見任何自主活動(dòng)0肢體徹底伸直時(shí)不能見離地間隙1肢體徹底伸直時(shí)間斷見離地間隙2肢體徹底伸直時(shí)見有持續(xù)的最小離地間隙（離地時(shí)間超過75%）3能行走，肢體能持續(xù)離地，行走期間有中度輕癱—共濟(jì)失調(diào)現(xiàn)象（偶爾跌倒）4能行走，肢體能持續(xù)離地，行走期間有輕度輕癱—共濟(jì)失調(diào)現(xiàn)象（光滑地面也不會跌倒）5正常步態(tài)6本體感覺沒有反應(yīng)0反應(yīng)遲鈍1反應(yīng)正常2傷害知覺深傷害未見知覺反應(yīng)0深傷害知覺反應(yīng)，未見淺表傷害知覺反應(yīng)1深傷害知覺和淺表傷害知覺反應(yīng)正常2（4）組織學(xué)觀察根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，在7d和3w后隨機(jī)選擇SCI組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。所有試驗(yàn)結(jié)束后，給予丙泊酚12mg/kg劑量靜脈注射進(jìn)行深度麻醉。動(dòng)物被放置在動(dòng)物操作臺上，有一個(gè)向下推的位置。常規(guī)消毒巾用脊髓手術(shù)器械暴露T12-T13段脊髓后，注射100ml空氣殺死動(dòng)物。固定后常規(guī)進(jìn)行脫水，透明，浸蠟，包埋，切片。切片厚度約為4μm，用蘇木精伊紅染色。切片過程由醫(yī)院病理科完成。兩名資深病理學(xué)家在光學(xué)顯微鏡下盲目讀取膠片，以觀察HMIAS-2000分析儀拍攝的病理組織變化。2.1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，兩組數(shù)據(jù)比較根據(jù)數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布情況采用t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA),兩兩比較采用LSD或Tamhane’sT2方法進(jìn)行，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行記錄和分析。2.2結(jié)果2.2.1動(dòng)物模型情況有8只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，其中對照組1只犬，SCI組2只犬分別于術(shù)后第5，第4和第4天出現(xiàn)切口感染。考慮到術(shù)后動(dòng)物的安全性，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在術(shù)后第五天給予頭孢美拉唑鈉0.5g，1次/d，靜脈滴注，連續(xù)使用3天。其中，SCI組中的兩只狗分別于第8天和第12天死亡?？紤]到實(shí)驗(yàn)的完整性，增加了兩只狗進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。對照組動(dòng)物術(shù)前術(shù)后均有相同的脊髓損傷癥狀。所有SCI組動(dòng)物均成功建模。所有動(dòng)物后肢無自主運(yùn)動(dòng)，后肢肌肉萎縮。狗只能在前腿上移動(dòng)（見圖2-8）.。對照組在脊髓暴露時(shí)、術(shù)后5min、術(shù)后60min、術(shù)后7d、術(shù)后7d和術(shù)后3w記錄中樞灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)和背側(cè)白質(zhì)的SCBF值（見表2-3）。脊柱暴露時(shí)，中央、腹側(cè)和背側(cè)白質(zhì)兩組的白質(zhì)SCF值無顯著性差異（P>0.05）。所有動(dòng)物中央灰質(zhì)區(qū)SCBF值與腹側(cè)白質(zhì)區(qū)、背側(cè)白質(zhì)區(qū)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腹側(cè)白質(zhì)區(qū)與背側(cè)白質(zhì)區(qū)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對照組SCBF無明顯差異（脊髓暴露后5min，術(shù)后60min，術(shù)后7d，術(shù)后3w）（P>0.05）。對照組在術(shù)后第5min、第60min、第7d、第3w與SCI組在中央灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)、背側(cè)白質(zhì)的SCBF值比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（見表2-4）。SCI組動(dòng)物脊髓中央灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)、背側(cè)白質(zhì)：脊髓暴露時(shí)與術(shù)后第5min、第60min、第7d、第3wSCBF值比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后第5min與術(shù)后第60min、第7d、第3wSCBF值比較差異均具有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.05）；術(shù)后第60min與術(shù)后第7d、第3wSCBF值比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后第7d與第3wSCBF值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SCI組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脊髓中央灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)、背側(cè)白質(zhì)SCBF值在術(shù)后第5min小幅度升高（11.55%、9.02%、18.33%）后隨著受損時(shí)間快速下降，并且術(shù)后第7d與第3w未見明顯變化（見圖2-10）。表2-2：對照組動(dòng)物脊髓各區(qū)域SCBF值（Mean±SD）,單位：PU脊髓區(qū)域中央灰質(zhì)腹側(cè)白質(zhì)背側(cè)白質(zhì)脊髓暴露時(shí)338.55±19.73260.05±15.63＃235.70±14.70＃術(shù)后第5min330.41±17.21251.02±10.23＃243.81±13.74＃術(shù)后第60min347.23±19.23253.74±17.93＃240.56±19.62＃術(shù)后第7d329.11±20.43266.12±9.13＃270.27±14.10＃術(shù)后第3w339.19±18.56271.45±11.52＃260.12±13.23＃注釋：P＃＜0.05：中央灰質(zhì)與腹側(cè)白質(zhì)比較；P*＜0.05:中央灰質(zhì)與背側(cè)白質(zhì)比較表2-3：SCI組動(dòng)物脊髓各區(qū)域SCBF值（Mean±SD）,單位：PU脊髓區(qū)域中央灰質(zhì)腹側(cè)白質(zhì)背側(cè)白質(zhì)脊髓暴露時(shí)329.34±16.73266.07±23.63○240.70±17.70□術(shù)后第5min367.01±14.21&290.02±17.24○&284.41±10.74□&術(shù)后第60min229.20±10.23Ï.74±17.94○Æ.54±14.62□&#術(shù)后第7d65.14±22.43&#△101.23±9.03○&#△62.43±17.10□&#△術(shù)后第3w72.14±17.50&#△*94.45±11.72○&#△*68.80±12.20□&#△*注釋：時(shí)間分組比較：P&＜0.05:與脊髓暴露時(shí)比較；P＃＜0.05：與術(shù)后第5min比較；P△＜0.05與術(shù)后第60min比較；P*＞0.05:與術(shù)后第7d比較。脊髓區(qū)域分組比較：P○＜0.05:中央灰質(zhì)與腹側(cè)白質(zhì)比較；P□＜0.05：中央灰質(zhì)與背側(cè)白質(zhì)比較。表2-4：對照組與SCI組脊髓各區(qū)域SCBF值（Mean±SD）比較，單位：PU脊髓區(qū)域中央灰質(zhì)腹側(cè)白質(zhì)背側(cè)白質(zhì)脊髓暴露時(shí)對照組338.55±19.73266.05±15.63235.70±14.70SCI組329.34±16.73*266.07±23.63*240.70±17.70*術(shù)后第5min對照組330.41±17.21251.02±10.23243.81±13.74SCI組367.01±14.21#290.02±17.24#284.41±10.74#術(shù)后第60min對照組347.23±19.23253.74±17.93240.56±19.62SCI組229.20±10.23#207.74±17.94#198.54±14.62#術(shù)后第7d對照組329.11±20.43266.12±9.13270.27±14.10SCI組65.14±22.43#101.23±9.03#62.43±17.10#術(shù)后第3w對照組339.19±18.56271.45±11.52260.12±13.23SCI組72.14±17.50#94.45±11.72#68.80±12.20#注：P＃＜0.05：術(shù)后SCI組與對照組比較；P*＞0.05：脊髓暴露時(shí)SCI組與對照組比較圖2-10：SCI組動(dòng)物脊髓血流在各測量時(shí)間點(diǎn)所測量的SCBF值變化趨勢圖；Y軸：脊髓血流值，X軸監(jiān)測時(shí)間點(diǎn)；2.2.2神經(jīng)電生理結(jié)果SCI組所有動(dòng)物在第1d、第7d、第3w進(jìn)行SEP及MEP監(jiān)測未見到規(guī)律潛伏期及波幅（見圖2-11、2-12）圖2-11：SCI組犬只MEP未見任何波形記錄圖2-12：SCI組犬只SEP未見任何波形記錄2.2.3TSCIS評分結(jié)果對照組：所有狗的tscis評分為20分，表明后肢神經(jīng)行為無異常；SCI組的1dtscis評分為0分，兩只狗的后肢在7d上的損傷感知項(xiàng)中評分為1分，其中一只狗的后肢在損傷感知項(xiàng)中評分相同（見圖9）。無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P＞0.05)（見表5）。表5:兩組動(dòng)物TSCIS評分:(Mean±SD)分組TSCIS評分術(shù)后第1d對照組20±0SCI組0±0術(shù)后第7d對照組20±0SCI組0.33±0.52術(shù)后第3w對照組20±0SCI組0.33±0.582.2.4組織學(xué)觀察組織學(xué)顯示：脊髓大部分在SCI組后7d失去正常脊髓組織，中心灰質(zhì)壞死逐漸被巨噬細(xì)胞吞噬，多囊腔小，周圍白質(zhì)也顯示壞死（見圖2-13，2-14），中央灰色區(qū)進(jìn)行性加重出現(xiàn)一大囊腔，周圍白質(zhì)壞死帶物質(zhì)也被巨噬細(xì)胞吞噬，膠質(zhì)細(xì)胞逐漸充滿囊腔內(nèi)（見圖2-15、2-16）。圖2-8：SCI組動(dòng)物后肢癱瘓圖2-9：對犬只進(jìn)行TSCIS評分圖2-13：SCI組SCI后第7d脊髓損傷標(biāo)本圖2-14：SCI組SCI后第7d脊髓損傷標(biāo)本（4*10）（20*10）組織學(xué)顯示：脊髓大部分脫離正常脊髓組織，中心灰質(zhì)壞死逐漸被巨噬細(xì)胞吞噬，多囊腔小，周圍白質(zhì)也壞死。圖2-15：SCI組SCI術(shù)后第3w脊髓標(biāo)本圖2-16：SCI組SCI術(shù)后第3w脊髓標(biāo)本（4*10）（20*10）組織學(xué)顯示：脊髓完全脫離正常脊髓組織，中央灰色區(qū)逐漸加重伴有大的囊腔，周圍白質(zhì)壞死帶物質(zhì)也被巨噬細(xì)胞吞噬，囊腔內(nèi)逐漸充滿膠質(zhì)細(xì)胞。圖2-17：預(yù)實(shí)驗(yàn)中NP-LDF刺入脊髓前后圖2-18：預(yù)實(shí)驗(yàn)中NP-LDF刺入脊髓前后SEP檢測結(jié)果MEP檢測結(jié)果2.3討論2.3.1NP-LDP評估SCBF的方法研究監(jiān)測SCBF在臨床上往往是重要的，因?yàn)樗潜匾年P(guān)閉動(dòng)脈，然后減少脊髓的血流。如果脊髓缺血再灌注損傷在夾閉期能影響脊髓功能，大多數(shù)基本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都采用SCI模型研究了SCBF的變化。因此，SCBF監(jiān)測的一些方法已經(jīng)被開發(fā)并應(yīng)用于這些實(shí)驗(yàn)研究，如清除氫，放射性示蹤微球，LDF，C14放射自顯影和活力組織監(jiān)測系統(tǒng)。但這些技術(shù)有其自身的局限性。為了滿足實(shí)驗(yàn)要求，我們使用Moor-VM-LDF及其匹配的針刺型單光纖探針（直徑0.46mm）對沖擊SCBF進(jìn)行了監(jiān)測，利用各自的優(yōu)勢和劣勢組成NP-LDF。LDF可滿足SCBF的實(shí)時(shí)連續(xù)監(jiān)測，針式單纖維探針（NP）可插入脊髓進(jìn)行不同區(qū)域的SCBF監(jiān)測。我們使用NP-LDF監(jiān)測對照動(dòng)物的SCBF值，與先前研究的結(jié)果一致。表明脊髓SCBF監(jiān)測中的NP-LDF是可行的，如圖7所示，SCBF監(jiān)測和固定探針可以連續(xù)實(shí)時(shí)監(jiān)測SCBF。為了確定單光纖維探針滲透到脊髓是否影響脊髓功能，在文獻(xiàn)和我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了探針的安全性：我們使用NP-LDF測量空白對照動(dòng)物的SCBF，沒有SCI模型，MEP和SEP檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在測量1周前和測量后，并同時(shí)進(jìn)行TSCI評分。結(jié)果：tscis評分均為滿分20分，SEP和MEP的潛伏期和振幅無明顯變化（見圖2-17，2-18）。結(jié)果表明，單光纖維探針不會對中型和大型動(dòng)物造成脊髓損傷，NP-LDF對SCBF的實(shí)時(shí)監(jiān)測是可行的。臨床上，神經(jīng)外科立體定向治療儀使用2mm或4mm的導(dǎo)管刺入腦實(shí)質(zhì)，專門清除血腫，這一技術(shù)也表明，微妙的針刺不會造成神經(jīng)損傷。本研究結(jié)果規(guī)模較小，需要大樣本實(shí)驗(yàn)證明。因此，這一理論仍有一些缺陷，就像氫的分裂一樣，可能會受到質(zhì)疑。2.3.2NP-LDF對撞擊性SCI脊髓中央灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)、背側(cè)白質(zhì)SCBF的監(jiān)測研究急性期沖擊脊髓的主要病理變化是中樞灰質(zhì)出血，對SCBF的血流有一定的影響。中密度纖維板測量SCBF為相對值PU，而不是其他方法提供的血液灌注絕對值：ml/min/100g。PU是單位體積平均紅細(xì)胞濃度和紅細(xì)胞移動(dòng)平均速度的乘積，因此出血區(qū)無流動(dòng)性的血細(xì)胞不會影響SCBF值。在具有良好PU值的組織中，微循環(huán)血流的發(fā)生率可以充分解釋沖擊性脊髓脊髓微循環(huán)的灌注。本實(shí)驗(yàn)采用SCBF對不同部位的脊髓進(jìn)行穿刺監(jiān)測。如果探針已經(jīng)在每個(gè)監(jiān)測組織內(nèi)，則無需增加檢測深度，以避免被監(jiān)測的SCBF值不清楚地代表某一區(qū)域。單光探頭直徑較小，刺入脊髓時(shí)不會對脊髓造成不規(guī)范的損傷，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。插入脊髓的NP過程會導(dǎo)致脊髓收縮，導(dǎo)致脊髓受到NP的壓迫。在測量SCBF時(shí)，我們切割硬膜外，降低硬膜外對探針的阻力，并使用CNC運(yùn)動(dòng)直接將NP刺入脊髓腹面，以避免推進(jìn)過程對脊髓的影響。為了確定脊髓面積，余潘峰等人。用病理切片測量犬脊髓標(biāo)本的矢狀直徑，確定中心灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)和背側(cè)白質(zhì)的相對區(qū)域，這對于指導(dǎo)測量深度所代表的區(qū)域是科學(xué)的。然而，仍然需要大量的樣本研究來確定其真正的科學(xué)性質(zhì)。2.3.3撞擊性SCI的SCBF變化與脊髓功能、組織學(xué)的關(guān)系本研究建立了沖擊SCI模型，研究SCBF的變化。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是SCBF在SCI后第5min增加，中心灰質(zhì)、腹側(cè)白質(zhì)和背側(cè)白質(zhì)比基值增加11.55%、9.02%、18.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這與許多研究報(bào)道在SCI模型中SCBF的變化下降且下降幅度超過50%的結(jié)論不符合。我們根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法，使用數(shù)控沖擊裝置模擬重物對脊髓的墜落損傷，這與Lavery的實(shí)驗(yàn)方法相似。脊髓創(chuàng)傷后SCBF的變化是否導(dǎo)致脊髓缺血仍存在巨大爭議。爭論的重點(diǎn)是脊髓損傷的嚴(yán)重程度，以及SCBF的位置是否是SCI后脊髓損傷的部位，以及SCI后全身血壓的變化。在本實(shí)驗(yàn)過程中，我們發(fā)現(xiàn)不僅灰色血液增加，而且白質(zhì)血液也增加?；屹|(zhì)充血，SCBF增加已上報(bào)，但白質(zhì)充血未上報(bào)。我們分析了以下可能的原因：（1）由于身體系統(tǒng)血壓和組織灌注增加而引起的創(chuàng)傷引起的整個(gè)應(yīng)激反應(yīng)；（2）我們測量了硬膜和軟心包的切口，在切口過程中可能對周圍軟骨膜下的白質(zhì)造成輕微損害，觸發(fā)微循環(huán)和脊髓血管的舒張，預(yù)先導(dǎo)致白質(zhì)充血；（3）雖然對照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物暴露于脊髓時(shí)脊髓血流量無明顯增加，但對照組只有2只犬，樣本量過少，可能導(dǎo)致結(jié)果偏差。針對實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)增加樣本量，盡量減少后期術(shù)中干擾，并進(jìn)行連續(xù)脊髓標(biāo)本切片，觀察生化因素，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.3.4撞擊性SCI的SCBF變化對SCI急診救治的臨床意義結(jié)果表明，沖擊脊髓的中樞灰質(zhì)及周圍白質(zhì)的血流變化與脊髓低度神經(jīng)中樞功能障礙和上下神經(jīng)傳導(dǎo)障礙的SCI患者的臨床癥狀一致。脊髓神經(jīng)功能障礙的持續(xù)進(jìn)展和恢復(fù)困難與脊髓中樞結(jié)構(gòu)神經(jīng)細(xì)胞無法耐受缺血缺氧的特征有關(guān)。這種繼發(fā)性損傷伴隨著原發(fā)性損傷。鑒于沖擊SCI后脊髓功能的殘留和恢復(fù)主要取決于繼發(fā)性損傷的發(fā)生和發(fā)展的控制，應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)干預(yù)，以阻斷繼發(fā)性損傷級聯(lián)反應(yīng)的進(jìn)展。但在SCI治療過程中，我們的急診作用是第一站，忽視了二次損傷的干預(yù)，錯(cuò)過了SCI患者的黃金搶救時(shí)間，造成了不可挽回的損害。傷后6-8小時(shí)是手術(shù)治療的黃金期，但由于現(xiàn)場治療，轉(zhuǎn)診，影像學(xué)檢查，手術(shù)安排等因素，只有少數(shù)患者可以進(jìn)行手術(shù)，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，傷后8小時(shí)可手術(shù)的患