人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則.doc

人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則2003年03月20日 發(fā)布一、序言 體細(xì)胞治療是指應(yīng)用人的自體、同種異體或異種（非人體）的體細(xì)胞，經(jīng)體外操作后回輸（或植入）人體的治療方法。這種體外操作包括細(xì)胞在體外的傳代、擴(kuò)增、篩選以及藥物或其他能改變細(xì)胞生物學(xué)行為的處理。經(jīng)過(guò)體外操作后的體細(xì)胞可用于疾病的治療，也可用于疾病的診斷或預(yù)防。體細(xì)胞治療具有多種不同的類型，包括體內(nèi)回輸體外激活的單個(gè)核白細(xì)胞如淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）、腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞（TIL）、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或體外致敏的殺傷細(xì)胞（IVS）等等；體內(nèi)移植體外加工過(guò)的骨髓細(xì)胞或造血干細(xì)胞；體內(nèi)接種體外處理過(guò)的腫瘤細(xì)胞（瘤苗）；體內(nèi)植入經(jīng)體外操作過(guò)的細(xì)胞群如肝細(xì)胞、肌細(xì)胞、胰島細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等等。 由于體細(xì)胞治療的最終制品不是某一種單一物質(zhì)而是一類具有生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞，其制備技術(shù)和應(yīng)用方案具有多樣性、復(fù)雜性和特殊性，因此不能象一般生物制品那樣制訂出適合于每一種方案的具體標(biāo)準(zhǔn)，本指導(dǎo)原則只提出一個(gè)共同的原則，具體的申報(bào)資料和應(yīng)用方案應(yīng)根據(jù)本技術(shù)指導(dǎo)原則加以準(zhǔn)備、申請(qǐng)和實(shí)施。對(duì)每個(gè)方案的整個(gè)操作過(guò)程和最終制品必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行（實(shí)施）標(biāo)準(zhǔn)操作程序，以確保體細(xì)胞治療的安全、有效。二、申報(bào)資料（一）體細(xì)胞治療制劑的名稱、選題目的與依據(jù)、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀或生產(chǎn)使用情況1申請(qǐng)表2體細(xì)胞治療制劑的名稱及命名依據(jù)3選題的目的和立題依據(jù)4國(guó)內(nèi)外有關(guān)該制劑的研究現(xiàn)狀、生產(chǎn)及臨床應(yīng)用情況（包括專利查詢情況）5臨床應(yīng)用的風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估（二）體細(xì)胞的采集、分離和檢定1體細(xì)胞類型和供體的情況（1）體細(xì)胞類型 須指出細(xì)胞來(lái)源是屬于自體、同種異體、異種還是細(xì)胞系。必須提供細(xì)胞的組織來(lái)源及細(xì)胞類別的確證資料，其中包括形態(tài)生化或表面標(biāo)志等。（2）供體 若體細(xì)胞來(lái)源于同種異體，需說(shuō)明供體的年齡、性別，供體必須符合國(guó)家對(duì)獻(xiàn)血員的要求，并提供測(cè)試的方法及符合條件的依據(jù)。供體必須經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)證明HBV抗原、抗HCV、抗HIV-1/2、梅毒抗體、細(xì)菌、霉菌均為陰性，必要時(shí)需說(shuō)明供體的既往病史、家族史等臨床資料。對(duì)于那些需通過(guò)激活體內(nèi)免疫功能發(fā)揮作用或需體細(xì)胞在體內(nèi)長(zhǎng)期存活的體細(xì)胞治療項(xiàng)目，除ABO血型外，還必須對(duì)供體做HLA-I類和II類分型檢查，并證明與受體（病人）相匹配，同時(shí)提供檢測(cè)方法和依據(jù)。 若體細(xì)胞來(lái)源于動(dòng)物，必須提供動(dòng)物的來(lái)源，遺傳背景，健康證明（如重要病原體，包括人畜共患疾病的病原體），飼養(yǎng)條件，應(yīng)用此類體細(xì)胞的必要性和安全性。（3）細(xì)胞系 若采用細(xì)胞系進(jìn)行體細(xì)胞治療，應(yīng)按國(guó)家相關(guān)規(guī)定進(jìn)行主細(xì)胞庫(kù)、種子細(xì)胞庫(kù)及生產(chǎn)細(xì)胞庫(kù)三級(jí)細(xì)胞庫(kù)的建立及管理。應(yīng)詳細(xì)記述細(xì)胞的來(lái)源、鑒別標(biāo)志、保存、預(yù)計(jì)使用壽命，在保存和復(fù)蘇條件下穩(wěn)定性的依據(jù)。生產(chǎn)細(xì)胞庫(kù)不應(yīng)含有可能的致癌因子，不應(yīng)含有感染性外源因子，如細(xì)菌、霉菌、支原體及病毒。2體細(xì)胞的采集 應(yīng)對(duì)采集體細(xì)胞的技術(shù)方法的安全性、可行性、穩(wěn)定性進(jìn)行充分論證，應(yīng)提供體細(xì)胞采集技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，應(yīng)說(shuō)明采集體細(xì)胞的地址/環(huán)境，所用的設(shè)備和設(shè)施、保存和運(yùn)輸?shù)沫h(huán)節(jié)和條件，預(yù)防微生物及病毒等有害因子污染的方法，預(yù)防共用設(shè)備和設(shè)施可能帶來(lái)的交叉污染等措施。3體細(xì)胞的分離 應(yīng)詳細(xì)規(guī)定分離體細(xì)胞用的方法、材料及設(shè)備，應(yīng)提供在此過(guò)程中所用的各種材料的資料，如果是購(gòu)買的原材料，應(yīng)有供應(yīng)商/制造商提供的產(chǎn)品說(shuō)明及分析合格證明。當(dāng)應(yīng)用單克隆抗體進(jìn)行有關(guān)操作時(shí)，應(yīng)參照國(guó)家藥品管理當(dāng)局有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。4體細(xì)胞的檢定 在體細(xì)胞采集及分離過(guò)程中的適當(dāng)階段，應(yīng)對(duì)體細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)控檢定，包括采集與分離體細(xì)胞的收率、存活率、純度、均一性等。應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明檢定體細(xì)胞所用的方法、材料及設(shè)備，并制定合格標(biāo)準(zhǔn)。（三）體細(xì)胞的體外操作1培養(yǎng)基（1）所有成分應(yīng)有足夠純度（例如水應(yīng)符合注射用水標(biāo)準(zhǔn)），殘留的培養(yǎng)基或受者不應(yīng)有明顯影響。每個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞的部門應(yīng)保證所用的各種成分的質(zhì)量都經(jīng)過(guò)鑒定，并制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格。若用商業(yè)來(lái)源的培養(yǎng)基，應(yīng)由廠商提供全部培養(yǎng)基成分資料。（2）血清的使用 除能證明體細(xì)胞培養(yǎng)或激活需要血清外，應(yīng)避免使用任何血清。不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)考慮每批血清都應(yīng)對(duì)潛在的外源因子（包括人的病原體）進(jìn)行檢查、篩選。例如，牛血清應(yīng)進(jìn)行病毒和支原體污染的檢查篩選等。（3）人血液成份的應(yīng)用 若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白，應(yīng)說(shuō)明其來(lái)源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，應(yīng)盡可能用已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品。（4）條件培養(yǎng)基的應(yīng)用 在體細(xì)胞培養(yǎng)中使用細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源的條件培養(yǎng)基時(shí)，有可能增加了制劑的危險(xiǎn)性及降低產(chǎn)品的一致性。因此，盡可能確定條件培養(yǎng)基的必要成份，以及嘗試用確定的試劑取代條件培養(yǎng)基。在應(yīng)用條件培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)考慮以下幾點(diǎn)： 應(yīng)詳細(xì)提供條件培養(yǎng)基的來(lái)源、加工及使用說(shuō)明。 當(dāng)用供者（人）細(xì)胞制備條件培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)對(duì)供者按獻(xiàn)血員標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行傳染因子的檢查。 當(dāng)用自體細(xì)胞制備條件培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)減少傳播病毒性疾病的危險(xiǎn)，病毒在體外擴(kuò)增的能力亦應(yīng)考慮。（5）抗生素的應(yīng)用 培養(yǎng)基中盡量避免使用內(nèi)酰胺類抗生素。若采用青霉素類抗生素，應(yīng)做青霉素皮試，該細(xì)胞制劑應(yīng)標(biāo)明加用的抗生素，并不得用于已知對(duì)該藥過(guò)敏的患者。另外，應(yīng)做不加抗生素的培養(yǎng)對(duì)照，以證明能夠保持無(wú)菌。（6）其他成份 應(yīng)充分說(shuō)明體細(xì)胞培養(yǎng)和激活時(shí)所采用的有絲分裂原、抗體、細(xì)胞因子、化學(xué)物質(zhì)，以及培養(yǎng)物。應(yīng)盡可能采用國(guó)家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。如上述成份的生產(chǎn)廠家已獲國(guó)家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用，可以引用該批件。如上述成份的生產(chǎn)廠家未獲國(guó)家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用，應(yīng)參照國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)控要點(diǎn)，提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)每批產(chǎn)品提供詳盡的質(zhì)量檢定報(bào)告。（7）培養(yǎng)基的檢定 對(duì)每批制成的培養(yǎng)基（例如已加入血清及生長(zhǎng)添加物等）應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，以及對(duì)擬給病人用的體外培養(yǎng)細(xì)胞的激活及/或支持生長(zhǎng)試驗(yàn)。2生產(chǎn)過(guò)程 生產(chǎn)部門對(duì)制備工藝流程應(yīng)有詳細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序和適時(shí)修訂的程序。收獲時(shí)應(yīng)保留細(xì)胞及培養(yǎng)基樣品，供檢定用。若細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有改進(jìn)，則應(yīng)評(píng)估對(duì)細(xì)胞得率、生物學(xué)效應(yīng)、均一性及純度的影響。 應(yīng)敘述保證細(xì)胞批同一性和防止交叉污染的質(zhì)量控制系統(tǒng)，以及適用于長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)定期進(jìn)行的和在體外培養(yǎng)后輸注前對(duì)所有培養(yǎng)物進(jìn)行的質(zhì)量控制系統(tǒng)。3質(zhì)量控制 應(yīng)對(duì)所有成份分離、培養(yǎng)及最后處理細(xì)胞所用的器具進(jìn)行質(zhì)量控制。各種成份都應(yīng)進(jìn)行同一性及污染物檢查。有生物活性的成份還應(yīng)進(jìn)行功能檢定。批記錄應(yīng)予保存，該記錄應(yīng)反映制備每批體細(xì)胞的所有步驟，記載每一成份的批號(hào)及所有檢定結(jié)果。（四）體細(xì)胞制劑的檢定與質(zhì)量控制 各批體細(xì)胞的檢定包括為驗(yàn)證操作過(guò)程對(duì)最初數(shù)批體細(xì)胞所進(jìn)行的檢定及在操作過(guò)程做任何改變后進(jìn)行的檢定，以及確定安全性和生物學(xué)效應(yīng)等對(duì)每批體細(xì)胞所進(jìn)行的檢定，應(yīng)依據(jù)實(shí)施方案制定合格標(biāo)準(zhǔn)。1每批體細(xì)胞的檢定（1）得率及存活率：于回輸前應(yīng)進(jìn)行體細(xì)胞得率及存活率檢定。（2）每批細(xì)胞來(lái)源的確認(rèn)：應(yīng)注明供者的來(lái)源并加以標(biāo)記或確定批號(hào)。（3）無(wú)菌試驗(yàn)：每批培養(yǎng)的體細(xì)胞在患者輸注前均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。建議在培養(yǎng)開(kāi)始后34天起每間隔一定時(shí)間取培養(yǎng)液樣品，包括患者回輸前24小時(shí)取樣，按現(xiàn)行版中國(guó)藥典生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。在患者使用前，取培養(yǎng)液及/或沉淀物用丫啶橙染色或革蘭染色，追加一次污染檢測(cè)。 進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)的體細(xì)胞，應(yīng)進(jìn)行支原體檢查。對(duì)大多數(shù)自體體細(xì)胞產(chǎn)品而言，有效期很短，因此有些試驗(yàn)（如支原體檢測(cè)）可能對(duì)制品的應(yīng)用來(lái)說(shuō)耗時(shí)太長(zhǎng)，但每批制品的留樣檢測(cè)是必需的，其結(jié)果可以為制品的質(zhì)量控制提供完整資料。雖然單個(gè)病人應(yīng)用的體細(xì)胞不會(huì)等到檢測(cè)完成后再回輸，但是如果留樣發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果或發(fā)現(xiàn)幾次陽(yáng)性結(jié)果后，應(yīng)及時(shí)對(duì)生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行檢查。如果在體細(xì)胞制備的早期發(fā)現(xiàn)有污染的情況，應(yīng)終止該批體細(xì)胞制品的繼續(xù)制備。如果某些檢測(cè)結(jié)果在制品應(yīng)用時(shí)還無(wú)結(jié)果，應(yīng)說(shuō)明可獲得結(jié)果的時(shí)間。（4）體細(xì)胞的純度與均一性 在體細(xì)胞回輸前，應(yīng)證明其純度和均一性已達(dá)到可應(yīng)用水平。對(duì)于經(jīng)過(guò)數(shù)代培養(yǎng)的體細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞的鑒定及無(wú)污染檢查，以保證未被其他類型細(xì)胞污染或取代。 對(duì)于體細(xì)胞體外操作中所用的非人用成份應(yīng)測(cè)定其成品中的含量，并制定相應(yīng)的限量指標(biāo)。（5）生物學(xué)效應(yīng) 如有可能，應(yīng)盡量檢測(cè)每批體細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)，例如體細(xì)胞具有的某種生物學(xué)功能，分泌某種產(chǎn)物的能力，表達(dá)某種標(biāo)志的水平等。2體細(xì)胞制劑的檢定（申報(bào)臨床前完成） 檢定項(xiàng)目：（1）體細(xì)胞制品的得率和存活率：（2）體細(xì)胞制品的純度和均一性或特征性表面標(biāo)志：（3）體細(xì)胞制品的生物學(xué)效應(yīng)；（4）體細(xì)胞制品外源因子的檢測(cè)包括： 細(xì)菌 真菌 支原體 病毒 內(nèi)毒素（5）體細(xì)胞制品其他添加成份殘余量的檢測(cè)（如牛血清蛋白、抗體、血清、抗生素、固相微粒等）。3體細(xì)胞制劑的制造及檢定過(guò)程，及原始記錄和中國(guó)藥品生物制品檢定所的復(fù)核檢定報(bào)告。4體細(xì)胞制劑的穩(wěn)定性 根據(jù)穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定有效期，說(shuō)明體細(xì)胞制劑的保存條件、保存液的成份與配方。如果體細(xì)胞在處理之前、處理當(dāng)中或處理之后需由一地運(yùn)到另一地，應(yīng)說(shuō)明運(yùn)輸條件對(duì)保存體細(xì)胞存活率和功能的影響，應(yīng)確保運(yùn)輸過(guò)程中體細(xì)胞制品達(dá)至上述檢定標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)提供運(yùn)輸容器能適用運(yùn)輸材料的合格證明。若體細(xì)胞制品經(jīng)凍存后繼續(xù)用于病人。應(yīng)在凍融或再擴(kuò)增后進(jìn)行上述檢定，達(dá)到檢定標(biāo)準(zhǔn)。（五）體細(xì)胞治療的臨床前試驗(yàn)1安全性評(píng)價(jià)（1）生長(zhǎng)因子依賴性細(xì)胞，對(duì)其生長(zhǎng)行為必須予以監(jiān)測(cè)，若某細(xì)胞株在傳代過(guò)程中失去對(duì)該生長(zhǎng)因子的依賴，不能再予以使用。（2）對(duì)同種異體細(xì)胞的移植，必須從免疫學(xué)方面提供其安全性依據(jù)。（3）對(duì)異種細(xì)胞，必須提供該異種細(xì)胞在體內(nèi)存活的時(shí)間及安全性的依據(jù)。（4）毒性試驗(yàn) 盡可能模擬臨床回輸方式，高于臨床用量的相同組織類型的動(dòng)物體細(xì)胞制品回輸入動(dòng)物體內(nèi)，觀察其毒性反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、局部刺激反應(yīng)。對(duì)特殊來(lái)源的體細(xì)胞，按具體情況制定毒性反應(yīng)的評(píng)價(jià)方法。（5）致癌試驗(yàn) 對(duì)于某些長(zhǎng)期培養(yǎng)的體細(xì)胞，應(yīng)進(jìn)行致癌性試驗(yàn)。 體外試驗(yàn)：軟瓊脂克隆形成試驗(yàn) 體內(nèi)試驗(yàn)：采用裸鼠試驗(yàn)，按國(guó)家藥品管理當(dāng)局有關(guān)細(xì)胞株檢定和質(zhì)量控制要求進(jìn)行，應(yīng)證明經(jīng)體外處理后已失去生長(zhǎng)和增殖能力。（6）對(duì)于體細(xì)胞終制品所用的附加物，應(yīng)視為體細(xì)胞制品的一部分，應(yīng)做動(dòng)物毒性試驗(yàn)。2有效性評(píng)價(jià)（1）體細(xì)胞的表型應(yīng)提供該類體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、表面標(biāo)志等，該體細(xì)胞應(yīng)具有預(yù)期的功能如分泌某種產(chǎn)物（或因子），可通過(guò)體外試驗(yàn)加以檢測(cè)。（2）體外試驗(yàn) 檢測(cè)體細(xì)胞制品的生物學(xué)效應(yīng)如細(xì)胞毒效應(yīng)、免疫誘導(dǎo)/增強(qiáng)或抑制效應(yīng)、造血細(xì)胞增殖能力等。（3）體內(nèi)試驗(yàn) 如果有可能以動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行，臨床前試驗(yàn)應(yīng)測(cè)定體細(xì)胞制品在體內(nèi)生物學(xué)功能及其治療效果。 若某種體細(xì)胞治療方法，因種屬特異性等原因無(wú)法用動(dòng)物模型體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其有效性，應(yīng)做特別說(shuō)明，并提供和引證有效性的其它依據(jù)。（六）體細(xì)胞治療臨床試驗(yàn)方案 1臨床試驗(yàn)方案除參照國(guó)家有關(guān)臨床研究的規(guī)定外，必須包括所選用的病種、病人的年齡范圍、性別、疾病的發(fā)展階段（臨床分期）、試用的病例數(shù)、事前制定病例選擇與淘汰的標(biāo)準(zhǔn)。 2給藥的方式、劑量、時(shí)間及療程。如果通過(guò)特殊的手術(shù)條件導(dǎo)入治療制品，必須提供詳細(xì)的操作過(guò)程。 3評(píng)估療