大豆凝集素SBA酶聯(lián)免疫分析

1、大豆凝集素（sba）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96t20pg/ml-480pg/ml 使用目的：本試劑盒用于測(cè)定植物相關(guān)液體樣本中大豆凝集素（sba）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大豆凝集素（sba）水平。用純化的大豆凝集素（sba ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大豆凝集素（sba ）,再與hrp標(biāo)記的大豆凝集素（sba）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹 底洗滌后加底物 tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大豆凝集素（ sba）呈正相

2、關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（od值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大豆凝集素（ sba）濃度。 試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml x 1 瓶7終止液6ml x 1 瓶2酶標(biāo)試劑6ml x 1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(960pg/ml)0.5ml x 1 瓶3酶標(biāo)包被板12孔x 8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml x 1 瓶4樣品稀釋液6ml x 1 瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑a液6ml x 1 瓶11封板膜2張6顯色劑b液6ml x 1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1 .標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20 c保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2 .

3、不能檢測(cè)含 nan3的樣品，因nan3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（hrp）活性。操作步驟1 .標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。480pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150 m標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液240pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 m標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液120pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 m標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 m標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 m標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2 .加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操

4、作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50小待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40 m,然后再加待測(cè)樣品10 d （樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3 .溫育：用封板膜封板后置 37 c溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水 30倍稀釋后備用5 .洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 4，空白孔除外。7 .溫育:操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑a50u,再加入顯色劑 b50m,輕輕震蕩混勻，37c

5、避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液 50人 終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11 .測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ od值）。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37匕反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37c反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入顯色液a, b, 37c顯色10分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀0d值計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的od值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與od值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式， 將樣品的od值代

6、入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本od 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 od 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（x n x 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請(qǐng)避光保存。7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)