滅菌注射用水無菌檢查方法適用性(共11頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 編 號：SOP-VM-02-075 版本號：00陜西同康藥業(yè)有限公司滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗方案起草人日 期年 月 日會 審化 驗 室：日 期年 月 日質(zhì)量管理處：日 期年 月 日批準(zhǔn)人日 期年 月 日專心-專注-專業(yè)目 錄9陜西同康藥業(yè)有限公司滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗方案1 試驗描述：本分析方法為本公司的滅菌注射用水檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（下稱SOP），該SOP制定依據(jù)中華人民共和國藥典2015年版二部的方法。為確保其檢測結(jié)果準(zhǔn)確，本公司實驗室對該品種無菌檢查方法適用性是否適合進(jìn)行試驗。2 試驗依據(jù)：中華人民共和國藥典2015年版四部分析方法指導(dǎo)原則

2、中華人民共和國藥典2015年版二部滅菌注射用水檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-01-001無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-07-018滅菌注射用水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)3 試驗項目組成員及職責(zé)：部門成員職責(zé)QC報告起草QC方法實施QAQA監(jiān)督質(zhì)量部分析方法審核4 試驗內(nèi)容:序列號試驗測試項目可接受標(biāo)準(zhǔn)1滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗該檢查方法適用于滅菌注射用水的無菌檢查5 試驗前準(zhǔn)備：5.1 人員培訓(xùn)：根據(jù)試驗方案已對本次試驗相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)（見附表1）。序號參加試驗人員名單是否參加培訓(xùn)培訓(xùn)考核結(jié)果1口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定2口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定3口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)

3、定4口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定5口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定6口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定7口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定8口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定9口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定10口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定11口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定12口是 口否口符合規(guī)定 口不符合規(guī)定5.2 儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)品和試劑：5.2.1 儀器設(shè)備儀器名稱編號設(shè)備操作規(guī)程萬分之一天平pH計集菌儀蒸汽滅菌器生化培養(yǎng)箱霉菌培養(yǎng)箱生物安全柜快速振蕩器5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品和試劑名稱廠家批號硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SD

4、A培養(yǎng)基）0.9%無菌氯化鈉溶液5.2.3 指導(dǎo)文件文件名稱編 號存放地點無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-07-018質(zhì)量管理處5.2.4 樣品名稱廠家規(guī)格批號滅菌注射用水本公司5ml6 試驗過程6.1培養(yǎng)基的適用性檢查對配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基無菌性及靈敏度檢查均符合中國藥典2015年版無菌檢查法（通則1101）要求。6.2菌種及菌液制備6.2.1、菌種：金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501，生孢梭菌( Clostridium spo

5、rogenes)CMCC(B) 64 941，大腸埃希菌菌（Escherichia coli）CMCC(B) 44 102，白色念珠菌( Candida albicans)CMCC(F) 98 001，黑曲霉( Aspergillus niger)CMCC(F) 98 003，上述標(biāo)準(zhǔn)菌株均源自中國食品藥品檢定研究院，工作用菌株為第三代。6.2.2、菌液制備： 6.2.2.1 接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中，3035培養(yǎng)1824h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.2 接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸

6、鹽流體培養(yǎng)基（+瓊脂）中，3035培養(yǎng)1824h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.3 接種大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中，3035培養(yǎng)1824h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.4 接種枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中，3035培養(yǎng)1824h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.5 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB培養(yǎng)基）中，2025培養(yǎng)2448h培養(yǎng)

7、后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.6 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基（SDA培養(yǎng)基）上，2025培養(yǎng)57d，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后 ，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的孢子懸液。上述6株菌制得菌懸液含量（每1ml含菌數(shù)）結(jié)果見表1。 表1 菌液制備計數(shù)結(jié)果試驗菌株代 數(shù)菌液稀釋度接菌量ml/皿 計數(shù)結(jié)果cfu/皿均值cfu/ml平皿1平皿2大腸埃希菌金黃色葡萄球菌

8、生孢梭菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑 曲 霉6.3方法適用性試驗6.3.1 供試液制備：按照中國藥典2015年版 “無菌檢查法（通則1101）”，取供試品120支/每次，按無菌操作法處理，以薄膜過濾法進(jìn)行試驗。6.3.2 試驗過程：6.3.2.1 試驗管 取供試品20支，導(dǎo)入集菌過濾器內(nèi)（單聯(lián)），按薄膜過濾法過濾。用0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗，每次100ml，共沖洗2次，在最后一次沖洗液中分別加入小于100cfu的金黃色葡萄球菌，加入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基；枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、大腸埃希菌菌、白色念珠菌、黑曲霉等試驗菌，同法操作，加入相應(yīng)培養(yǎng)基。6.3.2.2 對照管 不加入供試液，按試驗管方法同法試

9、驗。6.3.2.3 培養(yǎng) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基置2025培養(yǎng)。培養(yǎng)不得超過5天。6.3.2.4 結(jié)果判斷 與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加沖洗量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗。6.3.2.5 陰性對照 陰性對照試驗同時進(jìn)行，不得有菌生長。6.3.3 方

10、法適用性試驗結(jié)果6.3.3.1第一次結(jié)果試驗時間： 年 月 日培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置35；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置25。 試驗結(jié)果見表2。表2 無菌檢查方法適用性第一次試驗結(jié)果試驗菌 培養(yǎng)對象培養(yǎng)時間硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345大腸埃希菌試驗管對照管金黃色葡萄球菌試驗管對照管生孢梭菌試驗管對照管陰性對照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（ ）試驗菌培養(yǎng)對象 培養(yǎng)時間胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345枯草芽孢桿菌試驗管對照管白色念珠菌試驗管對照管黑曲霉試驗管對照管陰性對照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（ ）備注： “+”表示混濁；“-” 表示澄清；“+/-”表示生長微弱試驗結(jié)果評價：本次試驗小組組

11、長對檢驗方法進(jìn)行試驗及評價。評價人： 日期： 年 月 日6.3.3.2 第二次試驗結(jié)果試驗時間： 年 月 日 培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置35；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置25。試驗結(jié)果見表3。表3 無菌檢查方法適用性第二次試驗結(jié)果試驗菌 培養(yǎng)對象培養(yǎng)時間硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345大腸埃希菌試驗管對照管金黃色葡萄球菌試驗管對照管生孢梭菌試驗管對照管陰性對照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（ ）試驗菌 培養(yǎng)時間培養(yǎng)對象胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345枯草芽孢桿菌試驗管對照管白色念珠菌試驗管對照管黑曲霉試驗管對照管陰性對照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（ ）備注： “+”表示混濁；“-” 表示澄清；“+

12、/-”表示生長微弱試驗結(jié)果評價：本次試驗小組組長對檢驗方法進(jìn)行試驗及評價。評價人： 日期： 年 月 日6.3.3.3 第三次試驗結(jié)果試驗時間： 年 月 日 培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置35；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置25。 試驗結(jié)果見表4。 表4 無菌檢查方法適用性第三次試驗結(jié)果試驗菌 培養(yǎng)對象培養(yǎng)時間硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345大腸埃希菌菌試驗管對照管金黃色葡萄球菌試驗管對照管生孢梭菌試驗管對照管陰性對照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（ ）試驗菌 培養(yǎng)對象培養(yǎng)時間胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果12345枯草芽孢桿菌試驗管對照管白色念珠菌試驗管對照管黑曲霉試驗管對照管陰性對照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

13、（ ）備注： “+”表示混濁；“-” 表示澄清；“+/-”表示生長微弱試驗結(jié)果評價本次試驗小組組長對檢驗方法進(jìn)行試驗及評價。評價人： 日期： 年 月 日6.3.4 滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗結(jié)論本次試驗小組組長對試驗結(jié)果進(jìn)行試驗及評價。評價人： 日期： 年 月 日6.4 無菌檢查方法取供試品60支，采用薄膜過濾法，以0.9%無菌氯化鈉溶液為沖洗液（沖洗量：200ml/膜，100ml/次）按照中國藥典2015年版四部無菌檢查法，以相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對照；以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌。6.5 結(jié)果判斷陽性對照應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。若供試

14、品管均澄清，或雖顯渾濁但均確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個條件時方可判試驗結(jié)果無效：（1） 無菌檢查試驗所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。（2） 回顧無菌實驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。（3） 供試品中污染的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。 試驗若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。7 偏差處理方案執(zhí)行

15、過程中如有偏差產(chǎn)生，根據(jù)偏差處理管理規(guī)定處理，并填寫偏差處理記錄最終報告包括偏差列表（見附表3）和以下信息。偏差編號發(fā)生工序 產(chǎn)生原因處理情況處理措施處理結(jié)果8 變更控制方案執(zhí)行過程中如有對原系統(tǒng)進(jìn)行變更，提出的變更應(yīng)遵循，變更控制管理規(guī)程，并要求填寫變更申請控制表，最終報告應(yīng)包括變更控制列表（見附表4）和以下信息變更控制號變更內(nèi)容變更原因處理情況變更結(jié)果9 最終評價及建議驗證委員會主任對本次試驗進(jìn)行評價。9.1 本次試驗人員培訓(xùn)效果是否達(dá)到預(yù)期。9.2 本次試驗的先決條件的試驗是否滿足設(shè)計要求。評價人： 日期： 年 月 日10 試驗周期 當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有變更，需對相關(guān)項目進(jìn)行再試驗。附表1編 號：SOP-