食品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)一 動物的一般操作技術(shù)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 毒理學(xué)研究需要用實(shí)驗(yàn)動物來進(jìn)行各種實(shí)臉，通過對動物的實(shí)驗(yàn)觀察和分析來研究毒作用，獲得毒物的毒性、劑量-反應(yīng)關(guān)系、毒作用機(jī)制等方面的資料，因此動物實(shí)驗(yàn)是毒理學(xué)研究中重要的手段之一。 通過本次學(xué)習(xí)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中有關(guān)動物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)，掌握實(shí)驗(yàn)動物的選擇、動物抓取和分組等技術(shù)。2. 實(shí)驗(yàn)原理 做毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，首先要了解實(shí)驗(yàn)動物選擇的要求，實(shí)驗(yàn)動物分組、實(shí)驗(yàn)樣品的采集、實(shí)驗(yàn)動物處死方法等。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備: 小鼠若干，手套15副，苦味酸酒精飽和液，0.5%中性紅或品紅溶液，棉簽，解剖剪刀10把，感應(yīng)量為0.1g的天平一臺。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步騷:(一)

2、健康動物的選擇無論選擇哪種種屬品系的動物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均要求選擇健康的實(shí)驗(yàn)動物。健康動物檢查時要求達(dá)到：外觀體型豐滿，被毛濃密有光澤、緊貼體表，眼睛明亮，行動迅速，反應(yīng)靈活，食欲及營養(yǎng)狀況良好。選擇時重點(diǎn)檢查以下幾項(xiàng)：1. 眼睛 明亮，瞳孔雙側(cè)等圓，無分泌物2. 耳 耳道無分泌物溢出，耳殼無膿瘡3. 鼻 無噴嚏，無漿性粘液分泌物 4. 皮膚 無創(chuàng)傷、無膿瘡、疥癬、濕疹。5. 頸部 要求頸端端正，如有歪斜提示可能存在內(nèi)耳疾患，不應(yīng)選作實(shí)驗(yàn)動物。 6. 消化道 無嘔吐、腹泄，糞便成形，肛門附近被毛潔凈。 7. 神經(jīng)系統(tǒng) 無震顫、麻痹。若動物(大鼠、小鼠)出現(xiàn)圓圈動作或提尾倒置呈圓圈擺動，應(yīng)放棄該動物。

3、 8. 四波及尾 四肢、趾及尾無紅腫及潰瘍。(二) 實(shí)驗(yàn)動物的性別鑒定 小鼠 主要依據(jù)肛門與生殖孔間的距離區(qū)分，間距大者為雄鼠，小者為雌性。成年雄鼠臥位可見睪丸，雌性在腹部可見乳頭。(三) 抓取方法 正確地抓取固定動物，是為了在不損害動物健康、不影響觀察指標(biāo)、并防止被動物咬傷的前提下，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。小鼠的抓取方法 先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒?yàn)臺上向后位，在其向前爬行時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。(四) 編號、標(biāo)記方法 1、稱重鼠的感應(yīng)量在0.1g以下。 2、標(biāo)記方法染色法:采用染科(苦味酸酒精飽和液

4、)涂擦動物皮毛標(biāo)記的方法進(jìn)行編號。用毛筆或棉簽蘸取染料涂于動物的不同部位，以苦味酸黃色斑點(diǎn)染料標(biāo)記來表示不同號碼。一般習(xí)慣涂在左前腿為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，右前腿為7，右腰部為8，右后腿為9。如果動物編號超過10,需要10100號碼時，可采用在上述動物的不同部位，再涂染另一種涂料斑點(diǎn)，即表示相應(yīng)的十位數(shù)，即左前腿為10,左腰部為20，以此類推。(5) 實(shí)驗(yàn)動物的隨機(jī)分組方法(隨機(jī)數(shù)字表法)為了得到客觀的劑量反應(yīng)關(guān)系。應(yīng)將一群動物按統(tǒng)計學(xué)原則隨機(jī)分配到各個試驗(yàn)組中。將實(shí)驗(yàn)單位隨機(jī)分成三組設(shè)有動物X只，隨機(jī)等分成Y組。將動物編號后，按上述方法，從隨機(jī)數(shù)字表抄錄

5、X個數(shù)字，將各數(shù)一律以Y除之，并以余數(shù)1,2,3代表各組。動物號碼 1 2 3 4 5隨機(jī)數(shù)目除Y后的余數(shù)要使各組的動物數(shù)相等，須把原歸某組的動物改配到其他組去?？梢噪S機(jī)數(shù)字表繼續(xù)按斜角線抄錄一個數(shù)字，得60，以有多出的一組現(xiàn)有只數(shù)除之，余數(shù)為幾，就可以把第幾個移入其他組。5. 注意事項(xiàng): 在實(shí)驗(yàn)操作過程中，注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失。同時要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:掌握實(shí)驗(yàn)動物的一般操作、實(shí)驗(yàn)樣品采集、實(shí)驗(yàn)動物處死方法等7. 實(shí)驗(yàn)報告要求:實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容:原理、儀器和試劑、步驟、原始數(shù)據(jù)、計算結(jié)果。實(shí)驗(yàn)二 動物染毒途徑和方法1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅赫莆粘Ｓ玫膭游锶径就?/p>

6、徑和方法。2. 實(shí)驗(yàn)原理: 實(shí)驗(yàn)動物的一般染毒途徑主要是皮下注射、皮內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、靜脈注射、腹腔注射、經(jīng)口染毒、皮膚染毒和呼吸道染毒。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備:實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康小鼠二器材：注射器(0.5,1ml)、消毒棉球、手套、5Oml燒杯。試劑：0,9%生理鹽水(1OOmI,滅菌)。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟:染毒的途徑和方法多種多樣，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、動物種類和藥物劑型等情況確定。1. 皮下注射 注射時以左手拇指和食指提起皮膚。將連有針頭的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿外側(cè)、內(nèi)側(cè)、背部、耳根部、腹部。2. 皮內(nèi)注射 皮內(nèi)注射時需要將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊

7、，在兩指之間，將連有針頭的注射器緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥物，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。 3. 肌內(nèi)注射 肌內(nèi)注射應(yīng)選用肌肉發(fā)達(dá)、沒有大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時垂直刺入肌肉，回抽針?biāo)o回血，即可進(jìn)行注射。 4. 靜脈注射 一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用。操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用溫水浸潤或用酒精擦拭。以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器，使針頭與靜脈平行，從尾下四分之一處進(jìn)針，先緩慢注入少量藥液，如無阻力，可繼續(xù)注入

8、。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。或用消毒棉球壓迫針眼止血。 5. 腹腔注射 用小白鼠做實(shí)驗(yàn)時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左或右下腹刺入皮下，使針頭向前推進(jìn)0.5一1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩慢注入藥液。 6. 經(jīng)口染毒 (見實(shí)驗(yàn)五) 7. 皮膚染毒 (見實(shí)驗(yàn)四)8. 呼吸退染毒 (見實(shí)驗(yàn)六)5. 注意事項(xiàng):在實(shí)驗(yàn)操作過程中，注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失。同時要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:掌握實(shí)驗(yàn)動物染毒的常用的方法及其操作.7. 實(shí)驗(yàn)報告要求:實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容:原理、儀器和試劑、實(shí)驗(yàn)操作步驟。實(shí)驗(yàn)三 動物生物材料采集、準(zhǔn)備1. 實(shí)

9、驗(yàn)?zāi)康囊笳莆談游锷飿悠凡杉椒皩?shí)驗(yàn)動物的處死方法。2. 實(shí)驗(yàn)原理: 動物生物樣品的采集對實(shí)驗(yàn)結(jié)果十分重要，各臟器的比重和血液指標(biāo)反映了動物染毒后的生理變化。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備:實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康小鼠試劑：酒精。器材：酒精棉球、解剖剪刀、血色素吸管、干棉球、注射器、鑷子。4.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟:(一)采血方法1. 鼠尾采血方法：適用于血量少的實(shí)驗(yàn)。方法：將動物固定后，把鼠尾浸入4550oC溫水中使尾靜脈充血,擦干皮膚后，再用酒精棉球擦拭消毒。剪去尾尖（約0.20.3cm），拭去第一滴血，用血色素吸管(根據(jù)需要事先在吸管內(nèi)加入與不加抗凝劑)吸取一定量尾血,然石用干棉球壓迫止血。也可以不剪尾，以1

10、 ml注射器連上7-8號針頭直接刺破尾靜脈進(jìn)行定最采血。2. 眼眶靜脈叢采血法：操作者以左手拇指、食指緊緊握住小鼠頸部壓迫頸部兩側(cè)使眶后靜脈叢充血（注意用力要恰當(dāng)，以防止動物窒息死亡），右手持玻璃毛細(xì)管從一側(cè)眼內(nèi)眥部以45度角刺入，捻轉(zhuǎn)前進(jìn)。如無阻力繼續(xù)刺入，有阻力就抽出玻璃毛細(xì)管調(diào)準(zhǔn)方向后再刺入，直至出血為止。右手持容器收集血液后，拔出毛細(xì)管，用干棉球壓迫止血。3. 腹主動脈或股動(靜）脈采血法：為一次性采血方法。大、小鼠麻醉后，仰臥位固定動物，剪開腹腔，剝離暴露腹主動脈或暴露股動(靜)脈，用往射器刺入采血。4. 斷頭采血法：操作者左手握住動物，右手持剪刀，快速剪斷頭頸部，倒立動物將血液滴入

11、容器。注意防止剪斷的毛發(fā)掉入接血容器中。(二)處死方法1. 脊椎脫臼法 左手按住鼠頭，右手抓住鼠尾猛力向后拉，使動物頸椎拉斷脫節(jié)而立即死亡。此法多用于處死小鼠。2. 斷頭法 操作者用右手握住大鼠或小鼠頭部，左手握住背部，露出頸部，助手用大剪刀或斷頭器剪斷頸部使之死亡。也可使用斷頭器。 3. 急性大失血法 可用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血法使大、小鼠立即死亡.(詳見動物的采血方法)。4. 擊打法 右手抓住鼠尾，提起，用力摔打其頭部，鼠痙孿后立即死亡。也可用小木錘或器具猛力擊打動物頭部，使其立即死亡，常用于處死家兔或大鼠。(3) 實(shí)驗(yàn)動物臟器的觀察和采取。5. 注意事項(xiàng):在實(shí)驗(yàn)操作過程中，注意安全

12、，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失；實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué)藥品妥善處理;要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:掌握各種采血方法、實(shí)驗(yàn)動物各器官的正確位置和實(shí)驗(yàn)動物常用的處死方法。7. 實(shí)驗(yàn)報告要求:實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容:原理、儀器和試劑、步驟，各種采血和處死方法的適用范圍。實(shí)驗(yàn)四 皮膚刺激實(shí)驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟊驹囼?yàn)的目的是:學(xué)習(xí)皮膚染毒技術(shù)，了解受試物對皮膚是否有刺激或腐蝕作用。2. 實(shí)驗(yàn)原理: 有些化學(xué)毒物與皮膚接觸后可經(jīng)皮膚吸收引起機(jī)體中毒，或引起皮膚、粘膜局部損傷。因此，經(jīng)皮膚接觸毒性試驗(yàn)在衛(wèi)生毒理學(xué)中占有重要位置。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備:實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的小鼠。皮膚刺激試驗(yàn)需動物3只。 器材

13、：解剖剪刀，細(xì)玻璃棒，棉球、醫(yī)用紗布、塑料薄膜、無刺激性膠布。試劑：辣椒油；脫毛劑:取3份硫化鈉，l份洗衣粉和7份淀粉，使用前臨時用溫水調(diào)成糊狀。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟:1. 小鼠脫毛技術(shù)。方法有三種：剪毛、拔毛和脫毛。剪毛 固定動物后用粗剪刀剪去所需部位的被毛。應(yīng)注意幾點(diǎn):把剪刀貼緊皮膚剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮膚；依次剪毛，不要亂剪；剪下來的被毛集中在一個容器內(nèi)，勿遺留在手術(shù)和操作臺周圍。拔毛 小鼠作尾靜脈注射時，需用拇指、食指將局部被毛拔去，以利操作。脫毛 脫毛系指用化學(xué)藥品脫去動物的被毛，適用于無菌手術(shù)的準(zhǔn)備以及觀察動物局部皮膚血液循環(huán)和病理變化。常用硫酸鋇或脫毛劑配方配制脫毛劑。

14、2. 小鼠染毒操作 浸尾法：染毒前先將小鼠放入特制地固定盒內(nèi)，并使其尾巴通過固定盒底部的軟木塞的圓孔露出管外。繼之將尾巴通過小試管軟木塞小孔，插入裝有受試物液體的試管內(nèi)，浸飽2 6小時。觀察中毒癥狀。涂布法:用棉簽將受試物液體均勻涂布于脫毛的皮膚上，在其上覆蓋紗布，并用膠布固定。于染毒后30min，60min，2h，4h分別觀察染毒部位的皮膚，有無紅斑和水腫，有無水泡，糜爛滲出等癥狀。記錄癥狀并判斷待測物對皮膚的刺激性。3.皮膚局部刺激作用的觀察方法和評價。表1. 皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)刺激反應(yīng)分值紅斑無紅斑0輕度紅斑（勉強(qiáng)可見）1中度紅斑（明顯可見）2重度紅斑3紫紅色紅斑到輕度焦痂形成4水腫無

15、水腫0輕度水腫（勉強(qiáng)可見）1中度水腫（明顯隆起）2重度水腫（皮膚隆起1mm，輪廓清楚）3嚴(yán)重水腫（皮膚隆起1mm以上并有擴(kuò)大）4最高總分值8表2. 皮膚刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)分值評價0-0.49無刺激性0.5-2.99輕度刺激性3.0-5.99重度刺激性6.0-8.0強(qiáng)刺激性 4. 實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)脫毛操作過程中，注意不要傷到小鼠皮膚；小鼠在染毒過程中，注意其隨時間的變化。5. 注意事項(xiàng):在實(shí)驗(yàn)操作過程中，注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失；實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué)藥品妥善處理;要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:觀察辣椒油對小鼠皮膚的刺激作用，并做出皮膚刺激性分級的判斷。7. 實(shí)驗(yàn)報告要求:實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包

16、含如下內(nèi)容:原理、儀器和試劑、步驟、結(jié)果。實(shí)驗(yàn)五 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊罅私庖淮位?4小時內(nèi)多次給予受試化學(xué)物后，動物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系，求出半數(shù)致死量。2. 實(shí)驗(yàn)原理:化學(xué)物經(jīng)口染毒的方法是毒理學(xué)中重要的基本技術(shù)之一，經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)物毒性效應(yīng)的基本試驗(yàn)。通過該實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)化學(xué)物毒性試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計原則和掌握經(jīng)口灌胃技術(shù)。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備: 實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的雌、雄小鼠若干。 器材：注射器(0.25, 1，2，5ml)吸管（0.1 ,0.2 ,0.5 ,1 ,2 ,10ml）容最瓶(10,

17、25，50ml）,燒杯(10,25,50ml）,滴營、灌胃針、電子天平、動物體重稱、解剖剪刀、鑷子。試劑：受試化合物氯化鋇溶液，20mg/mL )。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟:1. 健康動物的選擇和性別鑒定。2. 實(shí)驗(yàn)動物稱重、編號和隨機(jī)分組。3. 受試化學(xué)物溶液的配置。4. 小鼠灌胃操作技術(shù)。 取9只小鼠，稱重并隨機(jī)分成三組，對三組動物分別用灌胃法給以0.2mg/g，0.l mg/g，0.5mg/g的氯化鋇溶液。 小鼠灌胃法 將鈍頭的16號注射針(活用于小鼠)（注意事先可用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，使其不易損傷動物的消化道)安裝在適當(dāng)容積的注射器上，吸取所需的受試物溶液，左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚

18、(小鼠僅抓住耳后、頸部的皮膚，用無名指、小手指和大魚際肌將其尾根部壓緊)，將動物固定成垂直體位，腹部面向操作者。注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持注射器，將針頭由動物口腔側(cè)插入，避開牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即可深入至胃部。如遇動物掙扎。應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬觯扇f不能強(qiáng)行插入，以免操作穿破食管，其至誤入氣管，導(dǎo)致動物立即死亡。 進(jìn)針深度一般是小鼠24cm為了驗(yàn)明是否已正確地插入胃部，可輕輕回抽注射器，如無氣泡抽出，表明已插入胃中；如有大量氣泡，則提示誤插氣管，應(yīng)抽出重插。隨后將受試物溶液注入。灌胃容量小鼠通常為0.2-1 ml。 5.毒性

19、癥狀的觀察染毒后注意觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程的規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官，觀察要點(diǎn)見表1，做好實(shí)驗(yàn)記錄.急性毒性試驗(yàn)可不做病理組織學(xué)檢查，但對死亡動物應(yīng)做大體病理學(xué)觀察，存活動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時可做大體解剖學(xué)觀察，肉眼觀察到病變時應(yīng)取材做病理組織學(xué)檢查，以便為下階段毒性試驗(yàn)劑量選擇提供參考依據(jù)。表1 急性毒性試驗(yàn)原始記錄受試物種名稱： 提供單位： 染毒劑量： Mg/kg 染毒途徑：動物種屬品系： 動物來源： 合格證號： 室溫： 相對濕度：組別染毒劑量（mg/kg）動物編號性別體重（g）染毒時間癥狀及出現(xiàn)時間死亡時間體重記錄（g） 實(shí)驗(yàn)記錄者： 記錄日期： 年 月 日5. 注意事項(xiàng)在實(shí)驗(yàn)操作過程

20、中，注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失；實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué)藥品妥善處理;要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。 為了使受試物能完全吸收，灌胃染毒時要求動物保持空腹?fàn)顟B(tài)，這是因?yàn)榛瘜W(xué)毒物進(jìn)入胃內(nèi)易與食糜作用而降低毒性，而且胃內(nèi)容物也不利于受試物溶液的灌入，因此染毒前應(yīng)禁食610小時，但要注意時間不能過長。否則動物長時間饑餓會影響肝臟，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。灌胃后至少23小時后才能喂食，油劑比水溶液要求限制喂食的時間更長些。 相同劑量的受試物，若以不同濃度給藥，死亡情況會有所不同。體積太小、太濃可能發(fā)生局部刺激或其他損傷;體積太大可能會引起胃部機(jī)械性損傷，影響正常生理功能。常用的方法是將受試物體積固定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計的劑

21、量將受試物配制成不同濃度的溶液進(jìn)行灌胃。通常灌胃體積以體重的1%一2%計算，最多不超過3%，即每100g體重灌胃1一2 m1,最多不超過3 ml。根據(jù)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)得出的各種實(shí)驗(yàn)動物灌胃量的極限是:小鼠0.5一1 ml，大鼠4一5 ml。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照表1的內(nèi)容進(jìn)行填寫。7.實(shí)驗(yàn)報告要求:實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容:原理、儀器和試劑、步驟、原始數(shù)據(jù)、計算結(jié)果。實(shí)驗(yàn)六 經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)是研究氣態(tài)、蒸氣志、氣溶膠、煙塵、粉塵狀的外源性化合物在吸入過程中對呼吸道有無損傷，能否經(jīng)呼吸道吸收以及吸收后對機(jī)體有無損害。經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)是衛(wèi)生毒理學(xué)的重要基本

22、實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)靜式呼吸道染毒技術(shù)。2. 實(shí)驗(yàn)原理:外源性化合物經(jīng)呼吸道吸入是工業(yè)毒理學(xué)和環(huán)境毒理學(xué)中最常見的基礎(chǔ)途徑之一，在衛(wèi)生毒理學(xué)研究中具有重要意義。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備: 實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的雌、雄小鼠若干。器材：靜式吸入染毒柜干燥器改裝)、吸管（0.2、0.5、1.0、5.0ml）、0.1g一下的天平。試劑：受試化合物乙醚)。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟:1. 復(fù)習(xí)實(shí)驗(yàn)動物選擇、性別鑒定、稱重、編號和隨機(jī)分組。2. 小鼠靜式呼吸道吸入染毒操作。向干燥器的陶瓷底板下分別放入沾有3ml，1.5ml，0.5ml乙醚的脫脂棉，將1只小鼠置于干燥器中，加蓋密封，每二十分鐘可開小縫通氣一次

23、。持續(xù)觀察4h，觀察小鼠活動狀態(tài)，表現(xiàn)癥狀，如有死亡，則記錄死亡時間。在觀察結(jié)束后計算LD50. 吸入接觸可分為兩種方式，一是動式吸入，一是靜式吸入。其類型又可分為兩種，一是將實(shí)驗(yàn)動物整體置于染毒柜中;一是只將實(shí)驗(yàn)動物的口鼻部位與染毒柜中含受試化合物的空氣接觸，身體其它部位置于染毒柜外，一般成為面罩吸入染毒，可以避免化合物經(jīng)皮交叉吸收。靜式吸入：系將實(shí)驗(yàn)動物置于一個一定體積的密閉容器內(nèi)，加入定量的易揮發(fā)液態(tài)受試化合物或一定體積的氣態(tài)受試化合物。在容器內(nèi)形成所需的受試化合物濃度的空氣環(huán)境。接觸一定時間（一般為2h或4h)后，觀察動物的中毒反應(yīng)，并根據(jù)動物的死亡隋況和相應(yīng)的受試物濃度。求出LC50。這種接觸方式，實(shí)驗(yàn)動物在整個接觸期間得不到氧氣的補(bǔ)充。隨著接觸時間延長，染毒柜內(nèi)氧分壓下降，二氧化碳分壓上升，濕度、溫度也會上升。為此，染毒柜的體積與所放置的動物數(shù)量應(yīng)相應(yīng)，否則會出現(xiàn)缺氧與二氧化碳潴留現(xiàn)象。要求在接觸期內(nèi)染毒柜的