無菌培養(yǎng)基灌裝驗證方案

1、驗證方案標(biāo)題：培養(yǎng)基無菌灌裝驗證方案第1頁，共12頁編號驗證對象生產(chǎn)部灌裝生產(chǎn)線起 草 人日 期部門批準(zhǔn)人日 期對象部門批準(zhǔn)人日 期QA批準(zhǔn)人日 期驗證小組長日 期1、目的：對生產(chǎn)部制劑車間的灌裝機進行培養(yǎng)基無菌灌裝試驗，通過灌裝后的產(chǎn)品污染程度檢測灌裝工藝能否保證產(chǎn)品的無菌。2、范圍：生產(chǎn)部制劑車間的灌裝生產(chǎn)線。3、責(zé)任：3.1 驗證小組3.1.1 設(shè)計、組織和協(xié)調(diào)驗證試驗。3.1.2 準(zhǔn)備、檢查和批準(zhǔn)驗證方案。3.1.3 準(zhǔn)備驗證報告并且流轉(zhuǎn)批準(zhǔn)。3.1.4 評估所有的測試結(jié)果。3.1.5 完成此文件規(guī)定的驗證報告。3.1.6 驗證小組成員名單姓名職務(wù)總經(jīng)理（驗證小組組長）QAg理生產(chǎn)部經(jīng)

2、理上海賽達生物藥業(yè)有限公司制劑主管制劑技術(shù)員3.2 生產(chǎn)部3.2.1 對灌裝車間進行清掃、消毒，保證環(huán)境清潔。3.2.2 操作灌裝機。3.2.3 按照規(guī)定的程序進行培養(yǎng)基灌裝。3.2.4 進行日常清洗、維護。3.3 QA3.3.1 取樣。3.3.2 進行目檢。3.3.3 進行環(huán)境監(jiān)測。3.3.4 檢查和批準(zhǔn)驗證方案和報告。4、描述制劑車間使用x公司的灌裝流水線，包括：洗瓶機、隧道烘箱、灌裝機、軋蓋機，y公司的凍干機進行凍干。5、程序5.1使用的設(shè)備及材料5.1.1 洗瓶機生產(chǎn)廠家型號安裝地點最大清洗速度制劑洗瓶問133 瓶/min生產(chǎn)廠家型號安裝地點容量制劑洗瓶問133 瓶/min5.1.3

3、灌裝機安裝地點最大灌裝速度制劑灌裝問133 瓶/min5.1.4 凍干機生產(chǎn)廠家型號安裝地點容量制劑凍干機房5m5.1.5灌裝材料5.1.5.1 瓶子生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼批號12210200211434925.1.5.2月交塞生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼批號2ml12210202001143195.1.5.3 鋁蓋生產(chǎn)廠家規(guī)格代碼批號2ml122102050011130025.1.6 培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號失效期胰蛋白陳大豆肉湯0105232003.55.1.7 菌種5.1.7.1 枯草桿菌(Bacillus Subtilis ) ATCC 66335.1.7.2 白色念珠菌(Candida albicans

4、 ) ATCC 102315.1.7.3廠房環(huán)境分離菌5.2培養(yǎng)基準(zhǔn)備1.1.1 在10L血清瓶中加入2L的熱注射用水，再加入240g胰蛋白陳大豆肉湯 充分?jǐn)嚢?，等溶解后再加?L的熱注射用水，整個培養(yǎng)基量為8L。1.1.2 將配制好的培養(yǎng)基放到高壓蒸汽滅菌柜中121c滅菌30分鐘，滅菌后取出血清瓶，從瓶中取4瓶（50ml/瓶）作為陰性對照，其中2瓶于32±2 C 培養(yǎng)14天，另外2瓶于23± 2c培養(yǎng)14天。觀察有無微生物污染。5.3 培養(yǎng)基無菌灌裝5.3.1 準(zhǔn)備無菌的灌裝器具（針、硅管、等等），聯(lián)接到灌裝機上。硅管一頭放入滅菌培養(yǎng)基中。5.3.2 用的瓶子，膠塞和鋁蓋

5、按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（P-SOP-048,P-SOP-049進行洗 滌，滅菌。5.3.3 按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（P-SOP-051）進行液量調(diào)節(jié)，按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 （P-SOP-05。進行灌裝，每瓶灌裝2ml滅菌培養(yǎng)基。5.3.4 使用2個針頭進行灌裝，每瓶2ml。灌裝的速度為70瓶/分鐘。5.3.5 灌裝的總瓶數(shù)為3000瓶以上，全部為半壓塞。5.3.6 灌裝時將瓶子按順序放箱中，給箱編上號，以便能夠追查出受污染的瓶子灌裝時狀態(tài)。5.3.7 灌裝結(jié)束后，將半壓塞的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至凍干機中，在機內(nèi)壓塞。5.3.8 加塞結(jié)束后將瓶子轉(zhuǎn)移至軋蓋間進行軋蓋。5.3.9 將灌裝好的瓶子倒置于32±2C培養(yǎng)7天

6、，然后在23±2c培養(yǎng)7天。5.4 環(huán)境檢查5.4.1 按照100級和10,000級潔凈級別檢查項目實施，下面為實施項目：5.4.1.1 浮游菌測定5.4.1.1.1 在灌裝過程中的關(guān)鍵操作點采樣。5.4.1.1.2 使用儀器：FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器（）。5.4.1.1.3 參照SOP（QA-SOP-112）浮游菌測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行檢測。5.4.1.2 塵埃粒子測定5.4.1.2.1 在灌裝過程中的關(guān)鍵操作點采樣。5.4.1.2.2 儀器：光散射塵埃粒子計數(shù)器（）5.4.1.2.3 參照SOP（QA-SOP-106）塵埃粒子測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測。5.4.1.3 表面菌測定5

7、.4.1.3.1 表面菌采用RODAC?養(yǎng)皿進行測定5.4.1.3.2 在灌裝中對各測試點進行取樣，特別是在離灌裝針頭30cm以內(nèi)的區(qū)域。5.4.1.3.3 對無菌服的袖子和胸部以及操作人員的手套取樣。5.4.1.3.4 參照SOP（QA-SOP-108）表面菌測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行檢測。5.4.1.4 沉降菌5.4.1.4.1 培養(yǎng)皿：營養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)平板（|）90） o5.4.1.4.2 參照SOP（QA-SOP-107）沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行檢測。5.5 灌裝培養(yǎng)基靈敏度試驗5.5.1 從灌裝的培養(yǎng)基中每1000瓶抽取20瓶，從每箱中均勻取樣，20瓶接種0.1ml（含約 100CFU拈

8、草桿菌（Bac川us Subtilis） ATCC 6633, 20 瓶接 種(0.1ml 約含 100CFU白色念珠菌(Candida alblcans ) ATCC 10231。5.5.2 剩下的20瓶用于接種0.1ml（含約100CFU廠房檢查分離菌。5.5.3 將接種枯草桿菌及廠房環(huán)境分離菌的瓶子放置到32± 2c的恒溫箱培養(yǎng)7天，將接種白色念珠菌的瓶子放置到 23±2C的恒溫箱培養(yǎng)7天，觀察 菌的生長情況。6、灌裝培養(yǎng)基的培養(yǎng)及計算污染度（）6.1 培養(yǎng)基倒置到32±2C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7天。然后在23±2C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)7天。6.2 進行周期

9、性的檢查（7天一次），檢查受污染的瓶子數(shù)在其箱上編上號并記 錄。6.3 假如受污染的瓶子有破損，在計算污染度時應(yīng)將其排除在外。6.4 未受到損傷的瓶子培養(yǎng)共14天。6.5 污染度計算式染菌的瓶數(shù)（因瓶子破損染菌的除外）污染度（% = X100%灌裝總瓶數(shù)-破損的瓶數(shù)7、合格標(biāo)準(zhǔn)7.1 滅過菌的培養(yǎng)基的陰性對照結(jié)果合格（無菌生長）。7.2 培養(yǎng)基靈敏度試驗中至少有 50%勺瓶中有明顯的微生物生長。7.3 環(huán)境檢測符合以下基準(zhǔn)：項目塵埃粒子浮游菌沉降菌表向菌>0.5um>5um胳膊 胸部 手套單位個/m3cFu/mCFU/rn.CFU/25cm基準(zhǔn)<35000<5<

10、1<37.4 培養(yǎng)基灌裝污染率小于0.1%注射劑無菌保證工藝研究與驗證常見技術(shù)問題解答內(nèi)容（四）注：以下均為2008年度第一期講習(xí)班（注射劑無菌保證工藝研究與驗證技術(shù)要求）參會代表所提問題，本期講習(xí)班講習(xí)組根據(jù)目前的有關(guān)技術(shù)要求，經(jīng)過認(rèn)真梳理、分析、總結(jié)后，現(xiàn)予以發(fā)布，并就相關(guān)問題進行討論與交流。30、培養(yǎng)基灌裝試驗中，培養(yǎng)基滅菌后、灌裝前，再經(jīng)濾膜除菌過濾，以觀察濾器在消毒安裝過程中的無菌效果，是否可行？答：培養(yǎng)基灌裝試驗是對包括無菌過濾在內(nèi)的所有步驟的無菌性保證程度的考察，推薦配制培養(yǎng)基后直接用于無菌過濾及隨后的灌裝過程，實際操作中要注意防止不溶性顆粒堵塞濾器。31、培養(yǎng)基灌裝試驗?zāi)?/p>

11、度再驗證每年兩次，每次幾批？答：對于某個產(chǎn)品的年度再驗證，通常的做法是每年進行兩次培養(yǎng)基灌裝試驗，每次一批。32、中國藥典2005年版無菌培養(yǎng)時間已變?yōu)?14天，培養(yǎng)基模擬灌裝后在兩個溫度的培養(yǎng)試驗是否也需延長？答：總培養(yǎng)時間不得少于14天，可以分成兩個溫度（22.5度和32.5度）各培養(yǎng)至少7天，也可以一個溫度（22.5度）直接培養(yǎng)。33、培養(yǎng)基灌裝試驗合格標(biāo)準(zhǔn)置信限為95%,染菌概率0.1%,請具體解釋一下使用哪個統(tǒng)計方法，如何計算查表得出。答：有關(guān)計算公式的詳細(xì)說明，可參照國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管司和藥品認(rèn)證管理中心組織編寫的藥品生產(chǎn)驗證指南（2003 ） »（化學(xué)工

12、業(yè)出版社）一書第 258頁。有兩種計算方法。一種是采用泊松分布的近似值計算公式，即P （X>0） =1e-Np>0.95其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，p= 0.1 % （污染概率）另一種計算方法是更為精確的二項式計算公式，即P（X>0）=1 （ 1 X） N其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，X= 0.1 % （污染概率）在書中的第259頁，列有 可信限為95%時一次模擬分裝中模擬分裝量、污染數(shù)量與污染概率關(guān)系表 ：可從該表查出模擬分裝數(shù)量與污染數(shù)量的對應(yīng)數(shù)值。34、在講義72頁第59張片子中提到粉針劑、凍干粉針、小容量注射劑工藝驗證的異同點中培養(yǎng)基灌裝程序

13、的差異主要是指什么，具體怎樣做，起始點是哪里，從哪里開始到哪里結(jié)束？答：對于無菌粉針劑，培養(yǎng)基灌裝的形式有一些特殊性，如要準(zhǔn)備模擬的無菌粉末，分裝后用注射器將液體培養(yǎng)基加入瓶中；或?qū)o菌培養(yǎng)基粉末分裝，結(jié)束后用注射器加入無菌注射用水。但目的仍是考察整個無菌分裝過程的無菌保證程度。35、如何進行容器密封性驗證？答：容器密封性驗證常采用物理和微生物學(xué)檢測手段。物理檢測有許多優(yōu)點，如靈敏度較高、使用方便、檢測迅速及低成本等。 在產(chǎn)品有效期內(nèi)，均可使用物理檢測方法來確定包裝完整性是否符合規(guī)定要求。進行包裝完整性檢測的一個重要原因是確保無菌產(chǎn)品始終保持無菌狀態(tài)。因此，在產(chǎn)品包裝的研發(fā)階段，應(yīng)考慮采用微生

14、物侵入試驗，或采用經(jīng)驗證過的并且比微生物檢測更為有效的物理試驗方法，來檢測產(chǎn)品包裝的完整性。 但是, 對效期內(nèi)產(chǎn)品的穩(wěn)定性試驗來說，因進行微生物侵入試驗較為困難，故建議采用物理檢測方法。微生物侵入試驗是對最終滅菌容器/密封系統(tǒng)完好性的挑戰(zhàn)性試驗。在驗證試驗中，取輸液瓶或西林瓶（小瓶），灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上壓塞、壓蓋滅菌。然后，將容器密封面浸入高濃度運動性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入，確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。同時，需作陽性對照試驗，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長能力。36、在采用微生物浸泡法進行容器密封性驗證時，為什么要事先去除鋁蓋，請問除去鋁蓋后，是不是只剩膠塞，那么在試驗過程中會

15、不會發(fā)生藥液泄露而影響驗證結(jié)果？答：去除鋁蓋是為了造成一個更為嚴(yán)格的條件，講課中以凍干粉針劑為例，通常容器內(nèi)有較高的真空，不會造成漏液，試驗者可根據(jù)自己產(chǎn)品的特點判斷去除鋁蓋是否適用。37、密封性驗證中，如鋁桶的驗證，用培養(yǎng)基驗證無法觀察結(jié)果，是否有其他方法？答：對于無菌原料的容器，建議嘗試物理的方法，如鹽水滲入法。38、密封性驗證一般每次取樣量是多少，再驗證的周期是多少？答：可以從壓蓋線上從開始、中間、結(jié)束各取至少10瓶進行試驗，起始驗證應(yīng)考察有效期內(nèi)不同時間的密閉性，再驗證一般一年可進行一次。39、驗證指南中對大輸液產(chǎn)品的密封性驗證有相關(guān)的要求，但對分裝及凍干產(chǎn)品無要求，是否不需進行密封性

16、驗證？答：對大容量注射劑、小容量注射劑、粉針劑均應(yīng)進行容器密封性驗證。40、容器密封性測試是否在安甑、西林瓶等所有注射劑型中都必須完成？答：容器密封性測試在安甑、西林瓶等所有注射劑型中都必須進行。但 采用的方法不盡相同，安甑一般采用物理測試方法，西林瓶則采用物理和微生物學(xué)檢測方法。對于無菌灌裝產(chǎn)品，還應(yīng)包括環(huán)境監(jiān)測記錄。善待自己，學(xué)會放棄，得而不喜，失而不煩，棄而不悔，多一份執(zhí)著和自信，添一份灑脫和從容，才是瀟灑快樂的人生！善待自己，學(xué)會原諒。誰都會遇到不順心的事，誰都會碰到不順眼的人。如果你不學(xué)會原諒，就會活得痛苦，活得很累。既要學(xué)會原諒自己，又要學(xué)會原諒別人，還要學(xué)會原諒生活。原諒自己，并不意味著對自己的放縱；原諒別人，并不代表著丟棄原則，原諒生活，并不是不熱愛生活。學(xué)會原諒一切，只