微孔濾膜過濾除菌

1、微孔濾膜過濾除菌關(guān)鍵詞：硝酸 化學(xué)試劑 氯化鈉 菌種 試劑 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 北京標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?1)了解過濾除菌的原理。(2)掌握微孔濾膜過濾除菌的方法。二、基本原理盡管有報(bào)道稱原核細(xì)菌小至納米(10-9m)級(jí)，大可達(dá)0103mm甚至075mm(非洲納米比亞球菌)，一些真核微生物如蘑菇、木耳等擔(dān)子菌也非常大。但絕大部分微生物都是微米級(jí)(10-6mm)，常用的微孔濾膜可以把絕大部分細(xì)菌分離開來。過濾除菌是根據(jù)微生物的大小，如原核微生物的尺寸為110m(球菌052m，桿菌長(zhǎng)18m、寬051m，螺旋菌長(zhǎng)550m、寬055m)，真核微生物的尺寸為10100m(粗略地說，真核微生物和原核微生物大小

2、存在10：1的遞減規(guī)律)，選擇孔徑不同的濾膜，通過機(jī)械作用濾去液體或氣體中微生物的方法(圖12)。這是一種非殺滅性除菌方式，實(shí)際上達(dá)到菌液分離的效果。具體實(shí)驗(yàn)應(yīng)根據(jù)不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。市面上常見的微孔濾膜有醋酸纖維酯和硝酸纖維酯濾膜等，孔徑有0025m、005m、010m、020m、022m、030m、045m、060m、065m、080m、100m、200m、300m、500m、700m、800m和1000m等，實(shí)驗(yàn)室除菌用一般選擇022m，但除病毒需選擇更小孔徑的濾膜。大濾板有石棉濾板、K型濾板(孔徑最大，作一般澄清用)、EK濾板(濾孔較小，用以去除一般細(xì)菌)、EK-S濾板

3、(濾孔最小，可阻止大病毒通過)。此法除菌的最大優(yōu)點(diǎn)是可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分，適用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的過濾，但由于濾量有限，所以一般只適用于實(shí)驗(yàn)室中小量溶液的過濾除菌。隨著反滲透技術(shù)的逐漸成熟和成本下降，大規(guī)模的過濾除菌工業(yè)應(yīng)用也已經(jīng)出現(xiàn)：在礦泉水、純凈水生產(chǎn)制作過程中已有應(yīng)用。三、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備1培養(yǎng)基2的葡萄糖溶液(葡萄糖試劑需滿足HGT 3475 1999化學(xué)試劑葡萄糖要求)、肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基(平皿)、營(yíng)養(yǎng)肉湯。肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基配制：朊胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，蒸餾水1000mL，瓊脂16g，調(diào)節(jié)pH至72，分裝克氏瓶，每瓶150mL，121

4、、20min滅菌，后平放成平板。營(yíng)養(yǎng)肉湯類有YYT11872010營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基可作參考，配制：朊胨100g，牛肉粉30g，NaCl 50g(品質(zhì)應(yīng)滿足GBT 12662006化學(xué)試劑氯化鈉)，pH值72±02(25)，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶或試管，121高壓滅菌15Dmin備用。如無特殊說明，本書及附錄中所有藥品均為市售分析純(AR)或生物化學(xué)純(BR)或以上純度級(jí)別試劑，蒸餾水為雙蒸水或去離子水，所有市售化學(xué)藥品應(yīng)滿足有關(guān)國(guó)家法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和或技術(shù)規(guī)范等。我國(guó)已經(jīng)制定實(shí)施的化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)有280多條，如GBT12662006化學(xué)試劑氯化鈉等，為了方便閱讀，在本書

5、相應(yīng)首次提及的地方，都作了提示。2儀器或其他用具注射器、微孔濾膜過濾器、022m045m濾膜、無菌試管、鑷子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯過濾裝置。有關(guān)裝置至少應(yīng)滿足GBT u415 89實(shí)驗(yàn)室燒結(jié)(多孔)過濾器孔徑、分級(jí)和牌號(hào)等的要求。四、操作步驟1大量液體過濾除菌將022m孔徑的濾膜裝入清洗干凈的砂芯過濾裝置中，旋緊或稍真空抽濾，壓平(如用一次性預(yù)滅菌的帶膜針式濾頭則無此步驟)，包裝滅菌(01MPa、1215滅菌20min)后待用。2針孔過濾器將滅菌濾器的入口在無菌條件下以無菌操作方式連接于裝有待濾溶液(2葡萄糖溶液)的注射器上，將針頭與出口處連接并插入帶橡皮塞的無菌容器中(圖1一3)。3壓濾將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢將針頭拔出。注意：壓濾時(shí)，用力要適中，不可太猛、太快，以免細(xì)菌被擠壓通過濾膜。4無菌檢查以無菌操作吸取除菌濾液01mL或者直接將濾膜培育于朊胨瓊脂平板上，涂布均勻，置37溫室中培養(yǎng)24h，檢查是否有菌生長(zhǎng)。5清洗棄去砂芯過濾裝置上的微孔濾膜，將砂芯過濾裝置清洗干凈，并換上一張新的微孔濾膜組裝包扎，再經(jīng)滅菌后使用。注意：整個(gè)過程應(yīng)在無茵條件下嚴(yán)格無茵操作，以防污染。過濾時(shí)應(yīng)避免各連接處出現(xiàn)滲透現(xiàn)象。綜合比較上述第一部分