腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對(duì)荷瘤小鼠化療的增效減毒作用

1、腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對(duì)荷瘤小鼠化療的增效減毒作用    【摘要】  目的研究腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油（SGE）對(duì)環(huán)磷酰胺（CTX）治療H22、S180小鼠的增效和減毒作用。方法建立小鼠體內(nèi)移植性肉瘤、肝癌模型，通過兩種給藥途徑，觀察腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油與環(huán)磷酰胺聯(lián)合用藥對(duì)荷瘤小鼠抑瘤率的影響；觀察SGE拮抗CTX引起血小板、白細(xì)胞及血紅蛋白下降。結(jié)果腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油與CTX合用時(shí)，對(duì)肝癌H22、肉瘤S180兩種腫瘤均有不同程度的抑瘤增效作用。CTX（10mg/kg或15mg/kg）分別聯(lián)用iv.SGE（36.6mg/kg），對(duì)小鼠H22、S180的抑瘤率均高于相應(yīng)劑量的單用C

2、TX（P<0.05）；CTX（20mg/kg）聯(lián)用ig.SGE（73.2mg/kg），對(duì)H22的抑瘤率高于單用CTX（P<0.05）。腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油能明顯拮抗CTX引起的血小板、白細(xì)胞下降（P<0.050.01）。結(jié)論腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油能增強(qiáng)CTX的抗腫瘤作用，同時(shí)減輕CTX的毒性。 【關(guān)鍵詞】  腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油 環(huán)磷酰胺 增效 減毒腫節(jié)風(fēng)是金粟蘭科草珊瑚屬植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.) Nakai的干燥全草1，又名草珊瑚、九節(jié)茶、接骨木。腫節(jié)風(fēng)味苦、辛、性平，歸心、肝經(jīng)。辛能行散，苦涼泄熱，即除外侵之風(fēng)濕，有解內(nèi)蘊(yùn)之熱毒。腫節(jié)風(fēng)注射液具有抗腫瘤

3、、抗菌消炎、抗病毒作用，適用于肌肉注射，其生產(chǎn)工藝以水煎煮提取，酒精沉淀去雜質(zhì)。臨床前需要稀釋，有可能造成二次污染。為尋找新的抗癌增效、減毒劑，本課題組提取得到腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油，通過H22、S180兩種荷瘤模型，采用兩種給藥途徑，觀察與CTX聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤的影響。1  材料1.1  藥物  腫節(jié)風(fēng)藥材，浙江國鏡藥業(yè)有限公司；腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油（SGE），取腫節(jié)風(fēng)藥材經(jīng)水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，臨用前配制成劑量為1.83mg/ml、2.75mg/ml、3.66mg/ml；注射用環(huán)磷酰胺：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)為06070721；氯化鈉注射液：國營張家港制藥廠，批號(hào)060

4、61503。1.2  瘤株  小鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22，浙江中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)院提供。1.3  儀器  Heraeus Biofuge冷凍離心機(jī)，德國Heraeus；Power Wave340酶標(biāo)儀，美國BioTek。1.4  動(dòng)物  昆明種小鼠，體重1822g，雌雄各半，浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（滬）2003-0003。2.  方法2.1  兩種給藥途徑對(duì)CTX的增效作用實(shí)驗(yàn)2  動(dòng)物分組：昆明種小鼠，體重1822g，隨機(jī)分成7組。SGE iv：模型對(duì)照組（NS）、兩組

5、單用CTX1、2組（10mg/kg、15mg/kg），另設(shè)CTX+SGE1、2組（10mg/kg、15mg/kg）分別加用SGE（18.3mg/kg、36.6mg/kg），每組12只小鼠。模型對(duì)照組iv生理鹽水，CTX組ip.，SGE給藥組iv.，0.1ml/10g，連續(xù)12天。SGE ig：模型對(duì)照組（NS）、兩組單用CTX組（10mg/kg、20mg/kg），另設(shè)CTX+SGE3、4組（10mg/kg、20mg/kg）分別加用SGE（18.3mg/kg、36.6mg/kg），每組12只小鼠。模型對(duì)照組ig生理鹽水，CTX組ip.，0.1ml/10g，SGE給藥組ig.，0.2ml/10g，

6、連續(xù)12d。取昆明種小鼠S180/H22細(xì)胞腹腔內(nèi)接種8d的種鼠，無菌條件下吸出12ml牛奶狀、較粘稠的腹水，先用0.4%苔盼藍(lán)染色，計(jì)活細(xì)胞率>90%，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)癌細(xì)胞數(shù)，以DHanks稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/ml，每只小鼠0.1ml右前肢腋窩皮下接種。于末次給藥后的第2天脫處死小鼠，完整剝?nèi)×鰤K，稱重，比較單用CTX治療組與聯(lián)用SGE組間抑瘤率的差異，觀察SGE的增效作用。抑瘤率（%）=（對(duì)照組平均瘤重給藥組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重×100%。2.2  SGE對(duì)CTX致荷瘤小鼠血細(xì)胞下降的影響3  取昆明種小鼠60只，隨機(jī)分成5組

7、，即正常對(duì)照組，模型對(duì)照組（CTX），SGE劑量組（18.3mg/kg、27.5mg/kg、36.6mg/kg），每組12只。除正常對(duì)照組外，各組動(dòng)物均ip.60mg/kgCTX，1次/d，連續(xù)7d。SGE組按照劑量iv.，0.1ml/10g，于停藥后24h自小鼠眼眶靜脈取血，EDTAK2抗凝，測白細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量、血紅蛋白濃度。2.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，以x±s表示。3  結(jié)果3.1  SGE iv給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠增效的影響  表1顯示，與模型對(duì)照組比較，CTX無論是單用還是與SGE合用，均能明顯

8、減小S180荷瘤小鼠的瘤重（P<0.050.01）。當(dāng)CTX（10mg/kg或15mg/kg）分別與SGE（36.6mg/kg）合用，其抑瘤率均較相應(yīng)劑量的單用CTX升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、15mg/kg單用的抑瘤率分別為45.24%、49.74%，聯(lián)用SGE36.6mg/kg的抑瘤率則分別為68.13%、69.81%，提高抑瘤率為50.60%、40.34%。結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油iv給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠具有增效作用。表1  SGE iv給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠增效的影響（略）與模型對(duì)照組比較,*P<0.05,*P<0

9、.01；與CTX組比較：P<0.05,P<0.013.2  SGE iv給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠增效的影響  表2顯示，與模型對(duì)照組比較，CTX無論是單用還是與SGE合用，均能明顯減小H22荷瘤小鼠的瘤重（P<0.01）。當(dāng)CTX（10mg/kg或15mg/kg）分別與SGE（36.6mg/kg）合用，其抑瘤率均較相應(yīng)劑量的單用CTX升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、15mg/kg單用的抑瘤率分別為43.80%、40.91%，聯(lián)用SGE36.6mg/kg的抑瘤率為59.93%、62.04%，提高抑瘤率為36.83%、51.65%。結(jié)

10、果表明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油iv給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠具有增效作用。表2  SGE iv給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠增效的影響（略）與模型對(duì)照組比較,*P<0.05,*P<0.01；與CTX組比較：P<0.05,P<0.013.3  SGE ig給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠增效的影響  表3顯示，與模型對(duì)照組比較，CTX無論是單用還是與SGE合用，均能明顯減小S180荷瘤小鼠的瘤重（P<0.050.01）。當(dāng)CTX（10mg/kg或20mg/kg）分別與SGE（73.2mg/kg）合用，其抑瘤率均較相應(yīng)劑量的單用CTX組有升

11、高趨勢。CTX10mg/kg、20mg/kg單用的抑瘤率分別為44.47%和56.33%，聯(lián)用SGE73.2mg/kg的抑瘤率則分別為57.59%、69.34%，提高抑瘤率為29.50%、23.09%。結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油灌胃給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠具有一定增效作用。表3  SGE ig給藥與CTX合用對(duì)S180荷瘤小鼠增效的影響（略）與模型對(duì)照組比較,*P<0.05,*P<0.01；與CTX組比較：P<0.05,P<0.013.4  SGE ig給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠增效的影響  表4顯示，與模型對(duì)照組比較，CTX無論

12、是單用還是與SGE合用，均能明顯減小H22荷瘤小鼠的瘤重（P<0.050.01）。當(dāng)CTX（20mg/kg）與SGE（73.2mg/kg）合用，其抑瘤率較單用CTX明顯升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、20mg/kg單用的抑瘤率分別為37.80%、45.19%，聯(lián)用SGE73.2mg/kg的抑瘤率則分別為46.76%、57.48%，提高抑瘤率為23.70%、27.19%。結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油灌胃給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠具有一定增效作用。表4  SGE ig給藥與CTX合用對(duì)H22荷瘤小鼠增效的影響（略）與模型對(duì)照組比較,*P<0.05,*P<

13、0.01；與CTX組比較：P<0.05,P<0.013.5  SGE對(duì)CTX致荷瘤小鼠血細(xì)胞下降的影響  表5顯示，與正常對(duì)照組比較，CTX（60mg/kg）組小鼠的WBC、PLT、Hb均顯著下降（P<0.01）；與CTX模型組比較，SGE（27.5mg/kg、36.6mg/kg）均能顯著增加WBC、PLT數(shù)量（P<0.010.05）；SGE（18.3mg/kg）能增加PLT數(shù)量（P<0.05）。結(jié)果表明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油能明顯回升化療藥CTX所引起的白細(xì)胞、血小板下降，從而降低化療藥的毒性。表5  SGE對(duì)CTX的減毒作用（略）與模型對(duì)照

14、組比較,*P<0.05,*P<0.01；與CTX組比較：P<0.05,P<0.014  討論據(jù)WHO報(bào)告，目前全球每年新發(fā)的癌癥病人約1000萬，死亡620萬。預(yù)計(jì)未來25年內(nèi)將有3億新病歷，有1億死于腫瘤。腫瘤已經(jīng)成為人類的主要死亡原因之一?；瘜W(xué)治療雖能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長，但也引起許多不良反應(yīng)，尤其對(duì)骨髓造血功能的抑制更為明顯，使患者的血液細(xì)胞減少4。如何提高腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性并減輕化療藥物的不良反應(yīng)是目前腫瘤治療領(lǐng)域中越來越引起人們重視并值得探討的問題。對(duì)化療中的減毒、增效作用不能孤立的看，而要將兩者有機(jī)的結(jié)合起來使之相輔相成。中國藥典20

15、05年版記載：腫節(jié)風(fēng)具有清熱涼血，活血消斑，祛風(fēng)通絡(luò)等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明腫節(jié)風(fēng)具有抗菌消炎、抑制流感病毒、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等多種活性5。腫節(jié)風(fēng)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道至今已有30年的歷史。臨床上腫節(jié)風(fēng)主要用于胰腺癌、胃癌、直腸癌、食管癌及急性白血病67。本實(shí)驗(yàn)采用兩種腫瘤模型、兩種給藥途徑，研究腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油對(duì)CTX治療肝癌H22、肉瘤S180的增效作用、以及對(duì)CTX所致白細(xì)胞減少的作用。證明了腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油能夠提高CTX的抗腫瘤效果，并能拮抗CTX所引起的白細(xì)胞總數(shù)、血小板數(shù)量下降。說明腫節(jié)風(fēng)揮發(fā)油能夠輔助化療藥物CTX增強(qiáng)抗腫瘤作用，同時(shí)減輕CTX的毒性。【參考文獻(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005